“瘦肉精”，化學名為鹽酸克倫特羅，是一種白色或類似白色的結(jié)晶體粉末，無臭，略有苦味，可溶于水、乙醇、甲醇，化學性質(zhì)穩(wěn)定，加熱到172℃時才能分解。大鼠經(jīng)口LD₅₀為159mg/kg。

鹽酸克倫特羅是一種β-受體興奮劑類藥物，有松弛支氣管平滑肌的作用，早期用于治療哮喘。幾十年前，人們意外發(fā)現(xiàn)：飼料中添加了適量的鹽酸克倫特羅后，可使豬等禽畜生長速率加快、改善動物體內(nèi)脂肪分配、提高飼料轉(zhuǎn)化率、瘦肉率提高10％以上，“瘦肉精”的俗稱正是由此而來，“瘦肉精”進入動物體內(nèi)后主要分布于肝臟，肌肉中含量較肝臟低很多。這種藥物在胃腸道內(nèi)吸收快，人或動物服后15～20min即起作用。作為獸藥或禽畜飼料添加劑，則屬于違禁品。

 鹽酸克倫特羅中毒途徑主要為經(jīng)口攝入，大多數(shù)為食源性中毒，人們?nèi)绻秤昧嗽?jīng)大量喂食過“瘦肉精”的動物，尤其是動物肝臟，容易發(fā)生中毒事件，由于鹽酸克倫特羅化學性質(zhì)穩(wěn)定，加熱到172℃時才能分解，因此一般的加熱方法不能將其破壞。全國各地已有多起中毒事件發(fā)生，中毒的不良反應和主要癥狀：心慌、心悸、胸悶、頭痛、面色潮紅、四肢震顫、視力模糊、肌肉震顫以及臉部潮紅等。多數(shù)案例是由于食用了曾經(jīng)喂食過鹽酸克倫特羅的禽畜引起。

鹽酸克倫特羅的測定方法有酶聯(lián)免疫法、膠體金免疫層析法，可用于快速篩查，氣相色譜-質(zhì)譜法、液相色譜-質(zhì)譜法可提供鹽酸克倫特羅化合物的質(zhì)譜圖，為確認方法，國家標準方法有GB/T 5009.192—2003(動物性食品中克倫特羅殘留量的測定》，GB/T 22286—2008(動物源性食品中多種β-受體激動劑殘留量的測定  液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法》，GB/T21313—2007《動物源性食品中多種β-受體激動劑殘留量檢測方法  液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》。

案例6：2010年某地一家四口食用午餐后，有3人發(fā)生心悸、心動過速、胸悶氣短、頭痛面色潮紅、四肢震顫、視力模糊等癥狀，臨床醫(yī)生根據(jù)臨床癥狀懷疑為“瘦肉精”引起的食物中毒。經(jīng)現(xiàn)場流行病調(diào)查：該戶居民自當?shù)爻匈徺I了：涼菜、熟食、豬肝等作為一家人當日午餐，一家四口同時進食，未食用豬肝的兒子未發(fā)病，女主人平時喜愛食用豬肝，本次食用量最大，中毒癥狀最嚴重，初步判定可疑食物為豬肝，超市當日批次豬肝已經(jīng)全部售出，采集該居民家剩余豬肝送實驗室檢驗。

儀器與耗材：氣相色譜-質(zhì)譜儀，配有自動進樣器和電子轟擊源(EI)；分析天平；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；離心機；渦旋混勻器；氮吹濃縮儀；超聲波清洗器；恒溫干燥箱。

試劑與材料：所有試劑除另有說明外，均為分析純，試驗中所用水均為二次蒸餾水。異丙醇(色譜純)；乙酸乙酯(色譜純)；磷酸二氫鈉(分析純)；高氯酸(分析純)；氫氧化鈉(分析純)；弱陽離子交換柱(LC-WCX，3mL)；無水硫酸鈉(分析純)：經(jīng)5500C烘烤4h，儲存于干燥器中，冷卻后備用；雙三甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA)99％+三甲基氯硅烷(TMCS)1％；乙醇(分析純)；濃氨水(分析純，要求新)；甲苯(色譜純)；甲醇(色譜純)；鹽酸克倫特羅標準品(99.8％，Sigma公司)；美托洛爾(99.8％，Sigma公司)。

儀器條件：色譜柱，DB-5MS石英毛細管色譜柱(30m×0.25mm×0.25μm)；色譜柱升溫程序，初始溫度75℃，保持1min，以200C/min升溫至200℃，保持5min，再以20℃/min升溫至250℃；載氣，高純氦氣，恒流模式，流速為1.0mL/min；進樣模式，不分流進樣；進樣體積1μL；電子轟擊源(EI)，能量70eV；離子源溫度230℃；選擇離子監(jiān)測方式，鹽酸克倫特羅衍生物特征離子m/z 86、m/z 187、m/z 243、m/2 262；美托洛爾衍生物特征離子m/z 72、m/z 223；傳輸線溫度280℃；溶劑延遲8min。

樣品處理：按照GB/T 5009.192—20036動物性食品中克倫特羅殘留量的測定：《氣相色譜-質(zhì)譜法》，稱取粉碎后樣品10g，(精確至0.01g)，用20mL 0.1mol/L高氯酸溶液勻漿，置于50mL離心管中，超聲提取20min，取出置于80⁰C水浴中加熱30min，冷卻后5000r/min離心15min，取出上清液，沉淀用5mL 0.1mol/L高氯酸溶液洗滌，再離心，將兩次的上清液合并。用1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至(9.5±0.1)，再離心，將上清液轉(zhuǎn)移至磨口玻璃離心管中，加入8g氯化鈉，混勻，加入25mL異丙醇+乙酸乙酯(40+60)，置于振蕩器上振蕩提取20min。靜置待分層，用吸管取出上層有機相，再用20mL異丙醇+乙酸乙酯(40+60)重復萃取一次，合并有機相，氮吹至近干，用1mL0.1mol/L磷酸二氫鈉緩沖液(pH6.O)充分溶解殘留物，經(jīng)針筒式微孔過濾膜過濾，洗滌三次后完全轉(zhuǎn)移至5mL玻璃離心管，并用O.1mol/L磷酸二氫鈉緩沖液(pH6.O)定容至刻度。

凈化：依次用10mL乙醇、3mL水、3mL磷酸二氫鈉緩沖液(pH6.0)、3mL水沖洗弱陽離子交換柱(LC-WCX，3mL)，取2mL萃取液加至弱陽離子交換柱上，棄去流出液，分別用4mL水和4mL沖洗柱子，棄去流出液，用6mL乙醇+濃氨水(98+2)沖洗柱子，收集流出液，將流出液氮氣吹干

衍生化：于凈化、吹干的樣品提取液殘渣中加入200μL甲醇、50μL2.4mg/L的美托洛爾內(nèi)標使用液，混勻，氮氣吹干，迅速加入50μL衍生劑BSTFA99％+TMCSl％，在渦旋式混合器上混勻1min，置于75℃的恒溫加熱器中衍生30min。衍生反應完成后取出冷卻至室溫，在渦旋式混合器上混勻30s，用氮氣吹干，加人200μL甲苯，在渦旋式混合器上混勻，待氣相色譜-質(zhì)譜分析。同時用克倫特羅標準使用液做標準系列同步衍生。

 結(jié)果與討論：①在送檢豬肝中檢出克倫特羅，在上述分析條件下，克倫特羅衍生物的保留時間是14.02min，美托洛爾衍生物的保留時間是15.76min。豬肝樣品提取物的總離子流圖見圖3—10，克倫特羅衍生物的質(zhì)譜圖見圖3—11，克倫特羅標準的質(zhì)譜圖見圖3—12。②樣品前處理是生物樣品分析方法中關(guān)鍵的步驟，肝臟是主要的代謝器官，含有大量的代謝物、血細胞、蛋白質(zhì)等，容易干擾目標化合物的測定，復雜的前處理步驟就是為了盡可能地去除干擾。③質(zhì)量控制：在樣品前處理液進樣前必須進甲苯溶劑，以確認進樣針和氣相色譜-質(zhì)譜儀器系統(tǒng)未受到污染；要進行樣品空白試驗，即除不加樣品外，其余操作完全同樣品的，從用20mL 0.1mol/L高氯酸溶液勻漿，到開始提取、凈化、衍生，按照上述氣相色譜一質(zhì)譜條件進樣分析，保證在克倫特羅衍生物的保留時間14.02min處沒有出現(xiàn)3倍噪音以上峰，以確保在復雜冗長的前處理過程中沒有因溶劑中微量雜質(zhì)濃縮而產(chǎn)生干擾；樣品的定性一是保留時間與克倫特羅標準的保留時間一致；二是樣品的克倫特羅的質(zhì)譜圖與標準的質(zhì)譜圖對比，m/z 86是基峰、豐度為100％，m/z 262豐度是基峰的15％，允許偏差在±20％內(nèi)，m/g 243和m/z 187豐度約是基峰的6％，允許偏差在±50％內(nèi)；三是樣品測定液中的克倫特羅衍生物的色譜峰形與標準溶液中克倫特羅衍生物的色譜峰形一致。

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