2 結(jié)果與討論

2.1 浸提溶劑的選擇

雙酚A易溶于甲醇、乙醇、丙酮、苯等有機(jī)溶劑，難溶于水。樣品于37℃循環(huán)浸提，甲醇、丙酮的沸點(diǎn)低于乙醇、苯（毒性較大），有利于樣品浸提液濃縮處理；丙酮沸點(diǎn)雖較甲醇低，但樣品不耐受丙酮。因此選擇甲醇作為替代溶劑模擬臨床使用對(duì)雙酚A進(jìn)行加嚴(yán)浸提。

2.2 檢測(cè)波長的優(yōu)化

采用高效液相色譜熒光法對(duì)雙酚A標(biāo)準(zhǔn)溶液的激發(fā)波長（210～300nm）及發(fā)射波長（280～400nm）進(jìn)行光譜掃描。結(jié)果表明，雙酚A的最佳激發(fā)波長和發(fā)射波長分別為232、314nm。

2.3 樣品預(yù)處理方式的選擇

取血液透析器端蓋及外殼部分剪成小塊樣品，以甲醇為浸提溶劑，按照1g樣品-10mL甲醇的比例浸提，分別采用超聲和振蕩兩種方式浸提。采用甲醇對(duì)樣品進(jìn)行10、20、30min超聲浸提，分別超聲浸提3次，試驗(yàn)結(jié)果表明三次超聲浸提均未達(dá)到極限浸提。另將樣品于控制型控溫?fù)u床振蕩（37℃，200r/min）浸提5、24h，測(cè)得浸提液中雙酚A的濃度分別為8.58、27.58ng/mL，說明雙酚A的溶出量隨浸提時(shí)間的增加而增加。

通過上述試驗(yàn)表明超聲浸提及振蕩浸提時(shí)樣品中雙酚A均不能達(dá)到極限浸提，無法準(zhǔn)確測(cè)定樣品中雙酚A的殘留量，故采用模擬臨床使用的方式進(jìn)行樣品預(yù)處理。

2.4 專屬性試驗(yàn)

分別取空白供試液、雙酚A對(duì)照品溶液及樣品供試液，按照1.3色譜條件進(jìn)行測(cè)定。試驗(yàn)結(jié)果表明，雙酚A對(duì)照品的保留時(shí)間約為21.5min，樣品供試液中雙酚A的保留時(shí)間與雙酚A對(duì)照品的保留時(shí)間基本一致。雙酚A的色譜峰峰形良好且與鄰近色譜峰分離度均大于1.5，空白供試液及樣品供試液對(duì)本實(shí)驗(yàn)分析均無干擾，滿足試驗(yàn)要求，方法專屬性良好。雙酚A對(duì)照品溶液色譜圖見圖3

2.5 線性方程、檢出限與定量限

按照1.3色譜條件測(cè)定1.2配制的雙酚A系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，以雙酚A的質(zhì)量濃度（x，ng/mL）為橫坐標(biāo)，以色譜峰面積（y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。計(jì)算得到雙酚A在質(zhì)量濃度為51.2～1024ng/mL范圍內(nèi)與色譜峰面積線性關(guān)系良好，線性回歸方程為y=0.0652x-0.7942，線性相關(guān)系數(shù)為0.9999。

用甲醇稀釋1.2配制的雙酚A標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液并進(jìn)行測(cè)定，以3倍的信噪比（S/N）計(jì)算檢出限，10倍的S/N計(jì)算定量限，得到該方法下雙酚A的檢出限與定量限分別為10.8、51.2ng/mL。

2.6 加標(biāo)回收與精密度試驗(yàn)

在樣品浸提液基質(zhì)中分別添加低、中、高濃度的雙酚A標(biāo)準(zhǔn)溶液，精密量取樣品加標(biāo)浸提液100mL旋蒸至干，精密移取2.0mL甲醇至旋蒸瓶，渦旋至殘?jiān)耆芙?，?.45μm濾膜過濾，得樣品加標(biāo)供試液。3個(gè)加標(biāo)水平分別為51.50、103.0、206.0ng/mL，每個(gè)加標(biāo)水平平行測(cè)定6次，結(jié)果見表2。由表2可知，雙酚A在3個(gè)濃度水平的平均加標(biāo)回收率為90.23%～104.21%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.8318%～3.661%，表明該方法的準(zhǔn)確度及精密度良好，均符合《中國藥典》2020版9101分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則中的指標(biāo)要求。

2.7 樣品測(cè)定

采用本方法對(duì)血液透析器平行測(cè)定三組，將測(cè)定結(jié)果代入式(1)，計(jì)算其臨床接觸量，結(jié)果見表3。

式中：W—每套樣品中雙酚A臨床接觸量，μg；

           c—樣品供試液中雙酚A質(zhì)量濃度，ng/mL。

由表3結(jié)果可知，每套血液透析產(chǎn)品中雙酚A的最大臨床接觸量為1.386μg。根據(jù)GB/T16886.17—2005《醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)　第17部分：可瀝濾物允許限量的建立》對(duì)血液透析器中雙酚A允許限量進(jìn)行評(píng)估，本方法對(duì)血液透析器中雙酚A的測(cè)定值在允許限量范圍內(nèi)。

3 結(jié)語

建立了血液透析器中雙酚A的浸提方法，采用高效液相色譜熒光法測(cè)定血液透析器中雙酚A的溶出量。該方法專屬性強(qiáng)、靈敏度高、精密度及準(zhǔn)確度好，可用于血液透析器安全性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，為監(jiān)管部門提供技術(shù)支持。

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