隨著人口老齡化，急慢性腎病的患病率在全球范圍內(nèi)呈逐年上升的趨勢(shì)。腎衰竭已成為各國(guó)關(guān)注的疾病問(wèn)題，目前臨床腎臟替代療法主要有血液透析、腹膜透析和腎臟移植。由于腎臟移植價(jià)格昂貴，血液透析為主要的腎臟替代治療方式。
血液透析系統(tǒng)主要包括血液透析機(jī)、水處理系統(tǒng)、血液透析器和透析液。血液透析器是血液透析系統(tǒng)的關(guān)鍵部分，又被稱為“人工腎”，是血液凈化的場(chǎng)所。血液透析器在使用過(guò)程中與人體血液及透析液均直接接觸，為三類高風(fēng)險(xiǎn)器械，所以需對(duì)其進(jìn)行溶出物研究，以評(píng)價(jià)血液透析器的安全有效性。

血液透析器由空心纖維透析膜、殼體、密封層組成，其中殼體多為聚碳酸酯材質(zhì)，空心纖維透析膜常用聚砜、聚醚砜、聚酰胺、醋酸纖維素等膜材。聚碳酸酯及聚醚砜的主要合成原料為雙酚A，是一種內(nèi)分泌干擾物，據(jù)研究表明塑料制品使用時(shí)釋放出的雙酚A被引入人體后可能會(huì)導(dǎo)致糖尿病、心腦血管及生殖系統(tǒng)等疾病，從而影響身體的正常機(jī)能。基于雙酚A的安全風(fēng)險(xiǎn)，中國(guó)、美國(guó)、歐盟等國(guó)家限制了其在奶瓶及食品包裝材料中的應(yīng)用。腎衰竭患者在進(jìn)行透析治療時(shí)血液及透析液均與血液透析器直接接觸，血液透析器聚碳酸酯外殼及聚砜透析膜中的雙酚A單體可能會(huì)遷移至患者血液，從而給患者帶來(lái)較高的風(fēng)險(xiǎn)，所以需對(duì)血液透析器中雙酚A的溶出量進(jìn)行研究。

目前，雙酚A測(cè)定有色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、電化學(xué)分析法、免疫分析法、熒光分析法等。AstridBacle等對(duì)透析器中雙酚A的測(cè)定采用固相萃取-超高液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法，操作復(fù)雜且成本較高，不易于方法的普及。電化學(xué)分析法是基于溶液電化學(xué)性質(zhì)的化學(xué)分析方法，選擇性較差，測(cè)定時(shí)需特殊修飾的電極。免疫分析方法有較高的靈敏度和選擇性，但抗體制備成本較高且周期長(zhǎng)。于杰等采用高效液相色譜熒光法測(cè)定食品包裝材料中雙酚A的遷移量。目前，高效液相色譜熒光法測(cè)定雙酚A尚未應(yīng)用于醫(yī)療器械領(lǐng)域，并且聚砜中空纖維膜中雙酚A的溶出研究鮮有報(bào)道。由于樣品基質(zhì)較為復(fù)雜，分析測(cè)定時(shí)干擾較多，鑒于高效液相色譜熒光法具有較高的靈敏度、準(zhǔn)確性、選擇性及重復(fù)性等特點(diǎn)，筆者選用該方法用于聚碳酸酯及聚砜中空纖維膜中雙酚A溶出量的測(cè)定，以甲醇為替代溶劑，模擬臨床使用條件加嚴(yán)浸提血液透析器中的雙酚A，采用乙腈和醋酸銨緩沖鹽為流動(dòng)相，通過(guò)優(yōu)化浸提條件及色譜條件等相關(guān)因素，建立靈敏、高效、準(zhǔn)確的測(cè)定方法，可用于評(píng)估血液透析器中雙酚A溶出量，為該類產(chǎn)品安全性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供數(shù)據(jù)支持，為監(jiān)管部門提供技術(shù)支持。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：1260型，配熒光檢測(cè)器，美國(guó)安捷倫科技有限公司。滾壓泵：JHBP-2000型，廣州市暨華醫(yī)療器械有限公司。pH計(jì)：SevenExcellence型，梅特勒-托利多控股有限公司。數(shù)顯電子恒溫水浴鍋：HH-8型，常州國(guó)華電器有限公司。超純水系統(tǒng)：Milli-QA10型，美國(guó)密理博公司。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：RV10control型，德國(guó)IKA集團(tuán)。數(shù)控超聲波清洗器：KQ3200DE型，昆山市超聲儀器有限公司?？刂菩涂販?fù)u床：KS4000icontrol，德國(guó)IKA集團(tuán)。雙酚A對(duì)照品：純度為99.8%，編號(hào)為30074，上海阿拉丁生化科技股份有限公司。甲醇、乙腈：色譜純，德國(guó)默克公司。醋酸、醋酸銨：分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.2 溶液配制

雙酚A系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：精密稱取雙酚A對(duì)照品10.62mg于50mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解、稀釋、定容，得質(zhì)量濃度為102.4μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，采用逐級(jí)稀釋法分別配制質(zhì)量濃度為51.2、102.4、204.8、409.6、1024ng/mL的雙酚A系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。醋酸銨緩沖溶液：精密稱取1.54g醋酸銨于1L容量瓶中，用水溶解、稀釋、定容，用醋酸調(diào)節(jié)pH至4.0。

1.3 色譜條件

色譜柱：WatersBEHShieldRP18型色譜柱［150mm×4.6mm，3.5μm，沃特世科技（上海）有限公司］；激發(fā)波長(zhǎng)：232nm；發(fā)射波長(zhǎng)：314nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣體積：10μL；流動(dòng)相：A相為乙腈；B相為醋酸銨緩沖溶液，梯度洗脫條件列于表1。

1.4 樣品預(yù)處理

參照血液透析器臨床使用說(shuō)明，按圖1所示連接血液透析器及硅膠管路，分別形成2個(gè)獨(dú)立的循環(huán)系統(tǒng)，在玻璃燒杯中各加入1000mL超純水，通過(guò)滾壓泵注滿整個(gè)閉路系統(tǒng)，以200mL/min的流量分別沖洗血液透析器血液側(cè)與透析液側(cè)，沖洗完畢后吹入氮?dú)馊コ和肝銎髦械囊后w。按圖2所示連接血液透析器及硅膠管路形成閉合循環(huán)系統(tǒng)，溶劑瓶中加入500mL甲醇，通過(guò)滾壓泵在（37±1）℃下以200mL/min的流量循環(huán)5h，循環(huán)完畢后將硅膠管路及血液透析器中浸提液轉(zhuǎn)移至溶劑瓶，溶劑瓶中加入甲醇至溶液體積為600mL，即得樣品浸提液。取500mL甲醇于溶劑瓶，使用硅膠管形成閉合循環(huán)回路，通過(guò)滾壓泵在（37±1）℃下以200mL/min的流量循環(huán)5h，將循環(huán)管路中甲醇轉(zhuǎn)移至溶劑瓶，溶劑瓶中加入甲醇至溶液體積為600mL，即得得空白對(duì)照液。分別量取空白對(duì)照液和樣品浸提液100mL旋蒸至干，精密移取2.0mL甲醇至旋蒸瓶，渦旋至殘?jiān)耆芙?，?.45μm濾膜過(guò)濾，得空白供試液和樣品供試液。

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