2 結(jié)果與討論

2.1 F-WPC溶液和Z-WPC溶液的最大給藥濃度

給藥3天內(nèi)，每天觀察并統(tǒng)計斑馬魚死亡數(shù)量與毒性情況，確定斑馬魚在Z-WPC與F-WPC作用下的最大耐受劑量。由圖1、圖2可知，1µg·mL^-1及以下濃度的F-WPC與100µg·mL^-1及以下濃度的Z-WPC作用于斑馬魚72h內(nèi)的累計死亡率小于10%，對斑馬魚無心包出血、脊柱彎曲等明顯發(fā)育毒性（圖3）。因此，后續(xù)實驗采用1µg·mL^-1F-WPC、100µg·mL^-1Z-WPC溶液作為最大給藥濃度進行研究。

2.2 F-WPC溶液和Z-WPC溶液對斑馬魚頭骨礦化面積和骨密度的影響

斑馬魚骨骼染色及定量分析結(jié)果（圖4、表1）顯示，模型對照組的斑馬魚染色面積與累計吸光度與正常對照組相比具有顯著性差異，提示造模成功。從圖4中可以看出，F(xiàn)-WPC、Z-WPC組各濃度斑馬魚頭骨礦化面積與潑尼松龍組比較都相對增加（P值均＜0.05），其中高濃度組增加的最為明顯，而F-WPC、Z-WPC各高、中、低相應(yīng)劑量組之間，無顯著性差異。

3 結(jié)論與展望

文中F-WPC和Z-WPC均為粉末狀的混合物，其中Z-WPC為未精制的粗提物。因為兩者所含各種物質(zhì)的具體比例存在差異，所以，無論根據(jù)乳鐵蛋白等指標性成分的用量確定劑量，還是選擇兩者同等重量作為實驗用劑量進行比較，都對實際應(yīng)用時的劑量選擇缺乏合理指導(dǎo)作用。

因此，文中選擇的劑量是依據(jù)安全有效的非毒性劑量作為最大給藥劑量。結(jié)果可知，1µg·mL^-1F-WPC溶液和100µg·mL^-1Z-WPC溶液對斑馬魚無明顯發(fā)育毒性，因此抗骨質(zhì)疏松藥效實驗選擇此濃度作為最大給藥濃度進行研究。

乳清蛋白因其生產(chǎn)規(guī)模大，可用性高且生物活性片段含量高，已成為很有前途的生物肽來源。美國早在1990年就采用離子交換法從乳清中分離乳清蛋白，而我國目前還沒有實現(xiàn)相關(guān)產(chǎn)品的生產(chǎn)技術(shù)突破。廣泛用于配方食品、糖果生產(chǎn)、冰淇淋配料等領(lǐng)域的脫鹽乳清粉、乳清濃縮蛋白、乳清分離蛋白和乳糖等乳清制品，主要依靠進口，這不僅制約了我國相應(yīng)產(chǎn)品在生產(chǎn)和開發(fā)方面的發(fā)展，也提升了相關(guān)產(chǎn)品的生產(chǎn)成本，加重消費者負擔，不利于我國乳清蛋白資源的開發(fā)利用以及乳品工業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。

目前，國內(nèi)在食品、保健品等領(lǐng)域，對乳清蛋白需求量逐年提升，但受限于技術(shù)等原因，乳清蛋白主要依靠進口。文中F-WPC和Z-WPC的抗斑馬魚骨質(zhì)疏松實驗表明，二者均能逆轉(zhuǎn)潑尼松龍誘導(dǎo)的斑馬魚骨量減少，但實現(xiàn)相同程度的作用時，F(xiàn)-WPC所需要的劑量遠低于Z-WPC。上述結(jié)論在說明Z-WPC效果可靠、有發(fā)展前景的同時，提示Z-WPC作為粗提物可以進一步發(fā)展純化產(chǎn)業(yè)；也可以從節(jié)約生產(chǎn)成本的角度考慮，將Z-WPC粗提物直接作為產(chǎn)品開發(fā)的原料。這為我國乳清蛋白產(chǎn)業(yè)的發(fā)展奠定了研究基礎(chǔ)，為我國生產(chǎn)及利用乳清蛋白，延長乳業(yè)產(chǎn)業(yè)鏈提供了良好契機。

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