隨著人們生活水平的不斷提高，農產品安全成為人們關注的重點，洋蔥味甘微辛辣，具有抗炎抑菌、降低血壓血脂等功效，含有多種維生素、前列腺素A、黃酮等物質，被譽為“蔬菜皇后”。但是不科學、不合理的農藥使用將會導致農產品農殘超標，帶來食品安全隱患，嚴重威脅人們的身體健康，國家也對食品中農藥最大殘留限量做出相關規(guī)定。我國是洋蔥的生產和出口大國，洋蔥年產量約2400萬噸。因此，開展洋蔥農藥殘留檢測具有重要意義。

由于洋蔥內含蒜氨酸酶和多種硫化物，在洋蔥農殘檢測樣品制備過程中，攪碎樣品使細胞腔室內的蒜氨酸酶被釋放，在10s內就會將蒜氨酸轉化為大蒜素，大蒜素不穩(wěn)定，可進一步轉化為二烯丙基二硫醚、大蒜新素等物質，在高溫下發(fā)生Cope消除反應，可分解為更加復雜多樣的含硫化合物，這些物質和有機磷農藥有類似的化學性質，在進氣相色譜分析時，有很強的響應，產生假陽性，干擾農殘檢測，是農殘分析中最難分析的樣品之一。因此，如何抑制蒜氨酸酶活性，減少含硫化合物的產生與分解，是解決洋蔥農殘檢測的關鍵。目前辛辣食物農殘檢測去除干擾的方法有磷酸酸化法、分子印跡固相萃取法、凝膠凈化法、微波熱處理法、攪拌棒萃取法等，這些方法有的存在樣品前處理過于復雜、有的成本較高、有的農殘回收率較低。本研究結合蒜氨酸酶活性中心，通過Cu2+對蒜氨酸酶輔助因子5’-磷酸吡哆醛結構以及其與蒜氨酸酶主鏈結合的影響，從而抑制蒜氨酸酶的活性，解決了洋蔥農殘檢測過程中硫化物的產生，消除了基質干擾，同時結合固相萃取技術，建立了洋蔥中12中有機磷農藥殘留檢測的分析方法，以期為洋蔥的監(jiān)管及安全把控提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

新鮮洋蔥購自保山本地農貿市場。乙腈、丙酮(色譜純，美國Supelco公司)；甲苯、氯化鈉、硫酸銅(分析純，國藥集團化學試劑有限公司)；ProElutTPC固相萃取柱(500mg/6mL，填料：石墨化碳：氨丙基：Florisil土為1:1:1，天津迪馬科技有限公司)。敵敵畏、甲胺磷、樂果、毒死蜱、倍硫磷、馬拉硫磷、殺螟硫磷、對硫磷、喹硫磷、甲基硫環(huán)磷、硫環(huán)磷、三唑磷農藥標準品[濃度均為100μg/mL，農業(yè)部環(huán)境質量監(jiān)督檢驗測試中心(天津)]。

1.2 儀器與設備

JA2003電子天平(北京賽多利斯天平有限公司)；Agilent7890A氣相色譜儀(配火焰光度檢測器，美國安捷倫科技有限公司)；PE-52AA型旋轉蒸發(fā)裝置(上海亞榮生化儀器廠)；XW80A型微型旋渦混合儀(上海滬西分析儀器廠)；KQ500DE數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；JYL-C012E料理機(九陽股份有限公司)。

1.3 實驗方法

1.3.1 標準溶液的配制

準確移取敵敵畏、甲胺磷、樂果等12種有機磷類農藥各0.50mL于25mL容量瓶，用丙酮配制成2.0μg/mL混合儲備液，然后逐級稀釋成濃度為0.02、0.05、0.10、0.15、0.20μg/mL的標準使用液。

1.3.2 樣品制備

對照組1：取50.0g洋蔥，將其切碎，放入料理機中破碎，制成待測樣。

對照組2：將洋蔥冷凍后取50.0g樣品，快速將其切碎，放入料理機中破碎，制成待測樣。

實驗組：取50.0g洋蔥，加入5%硫酸銅溶液10mL，與樣品一同破碎制成待測樣。

1.3.3 提取

取待測樣25.00g于100mL比色管中，加入50.0mL乙腈，渦旋1min，超聲提取20min后用濾紙過濾，濾液收集到裝有5g氯化鈉的100mL具塞量筒內，劇烈振蕩1min，在室溫下靜置30min，使乙腈相和水相分層。

1.3.4 凈化

準確移取10.00mL乙腈提取液于棕色雞心瓶中，50℃水浴下旋蒸至近干，加入2.0mL乙腈+甲苯(3:1，V:V)超聲溶解，獲得待凈化液。

將TPC固相萃取小柱用6.0mL乙腈+甲苯(3:1，V:V)條件化，待溶劑到達吸附層表面時，倒入待凈化液，洗脫液用雞心瓶接收。凈化液完全進入固相萃取柱后，用8mL乙腈+甲苯(3:1，V:V)淋洗TPC柱。將洗脫液旋蒸近干，用2.0mL丙酮定容，超聲15s，過0.22μm濾膜后，供氣相色譜儀測定。

1.3.5 色譜條件

ZB-1701毛細管柱(30m×0.25mm，0.25μm)；進樣口溫度：220℃；不分流進樣；進樣量：1.0μL；升溫程序：初溫：100℃保持2min，以15℃/min升到190℃，保持12min，以20℃/min升到250℃，保持5min；火焰光度檢測器(flamephotometricdetector，F(xiàn)PD)溫度：230℃；載氣及尾吹氣：高純氮氣，純度＞99.99%，載氣流量：1.0mL/min，尾吹流量：30mL/min。

2 結果與分析

2.1 硫酸銅濃度的選擇

稱取約50.0g樣品4份，1份為空白對照，其余3份在攪碎前分別加入10mL濃度為2%、5%、8%硫酸銅溶液，以研究不同濃度硫酸銅溶液對蒜氨酸酶活性的抑制率。研究表明：未經硫酸銅處理的空白樣有很多雜峰，集中在15min前出峰，響應信號高，有些峰與敵敵畏、甲胺磷等保留時間相同(如圖1所示)；經2%的硫酸銅溶液處理的樣品，色譜圖顯示雜峰明顯減少，但仍有干擾，說明2%濃度的硫酸銅溶液對蒜氨酸酶活性抑制不完全；5%的硫酸銅溶液處理的樣品，基線穩(wěn)定，譜圖干凈，無雜峰干擾(如圖1所示)，8%濃度的硫酸銅溶液處理的樣品，色譜圖情況與5%濃度的硫酸銅溶液無差異，說明5%濃度的硫酸銅溶液對蒜氨酸酶活性抑制已基本完全。因此，確定5%濃度的硫酸銅溶液為最佳濃度。

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