本文建立一種采用高效液相色譜測(cè)定甜茶葉中甜茶苷含量的方法。依據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，甜茶苷測(cè)定前處理過(guò)程中，以30%乙腈溶液為溶劑，采用超聲方式對(duì)甜茶葉進(jìn)行處理能獲得最佳的甜茶苷提取率。色譜條件：C18柱（250mm×4.6mm×5µm）；流動(dòng)相：0.05%磷酸溶液-乙腈（68+32）；流速：1mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm；進(jìn)樣量：5µL；柱溫：40℃；外標(biāo)法定量。在該色譜條件下，甜茶苷濃度為0mg/mL～1.5mg/mL的范圍內(nèi)，甜茶苷峰面積（Y）與甜茶苷濃度（X）具有良好的線性關(guān)系，線性回歸方程Y=21.0844X，相關(guān)系數(shù)r=1.0000；加標(biāo)回收率為96.2%～102.3%；精密度（RSD）為1.23%。相關(guān)試驗(yàn)數(shù)據(jù)證明，該方法快速簡(jiǎn)單、重復(fù)性好、準(zhǔn)確，適用于甜茶葉中甜茶苷含量的測(cè)定。

1引言

甜茶（RubussuavissimusS.Lee）是薔薇科植物甜葉懸鉤子屬多年生有刺灌木，廣西野生甜茶為多年生純天然、原生態(tài)、無(wú)污染常綠木本植物，是廣西特有的野生植物，主要生長(zhǎng)在廣西梧州、桂林及柳州等地區(qū)的。其適宜生成在亞熱帶氣候區(qū)及海拔500-1000m的丘陵山地，由于其葉片味甜，故名甜茶。甜茶是一種低熱能的天然甜味植物。野生甜茶具有相當(dāng)高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，其中以廣西甜茶最為代表，含有極高的甜茶苷和茶多酚外，還含有18種氨基酸及人體所必需的微量元素等成分，其中甜茶苷是一種二萜葡萄糖低熱量甜料，在化學(xué)結(jié)構(gòu)上與甜菊苷近似，它們均由相同的苷元組成，二者的區(qū)別僅在甜茶苷中十位碳上少接一分子葡萄糖。甜茶苷的甜度為蔗糖的300倍，而熱值僅是蔗糖的5%，屬高甜度、低熱能的天然甜味物質(zhì)。甜茶苷能激活人的胰島素，降低血糖，有很好的保健作用，對(duì)糖尿病患者和腎病病人有一定的療效。甜茶葉提取的甜茶苷是甜味植物中口感最佳的甜味劑，因其綠色天然，保健低熱而在食品、飲料、冷食制品、調(diào)味品、醫(yī)藥工業(yè)、美容化妝品等各類(lèi)行業(yè)中展現(xiàn)出良好的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

廣西甜茶中甜茶苷的含量與其生長(zhǎng)時(shí)期有關(guān)，不同生長(zhǎng)發(fā)育階段葉子中甜茶苷的含量有著明顯的差異，嫩葉中最高，成葉次之，落葉最低；甜茶葉中甜茶苷的含量與季節(jié)也有關(guān)系，5月底較高，6月底開(kāi)始上升，7月、8月達(dá)到最高，9月底開(kāi)始下降，12月底降到最低值。

甜茶苷作為甜茶中最重要的功能性成分之一，其含量的測(cè)定對(duì)于甜茶葉的綜合利用十分關(guān)鍵。

目前國(guó)標(biāo)中尚無(wú)針對(duì)甜茶中甜茶苷含量測(cè)定的方法，本論文旨在建立高效液相色譜法測(cè)定甜茶中甜茶苷含量的有效準(zhǔn)確方法，為甜茶苷的開(kāi)發(fā)應(yīng)用作出貢獻(xiàn)。

2實(shí)驗(yàn)部分

2.1儀器及試劑

UltiMate3000高效液相色譜儀：配二極管陣列檢測(cè)器；分析天平：感量為0.0001g和0.00001g;KQ-300DB超聲波發(fā)生器；離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥8000r/min;XHF-D高速分散器；恒溫振蕩器；移液槍。

乙腈（色譜純，賽默飛世爾）；無(wú)水乙醇、石油醚（沸點(diǎn)30～60°）、磷酸（分析純，上海國(guó)藥化學(xué)試劑）；實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

甜茶葉：甜茶原葉采摘自廣西桂林平樂(lè)，經(jīng)干燥后制得。

2.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

準(zhǔn)確稱取甜茶苷標(biāo)準(zhǔn)品20mg，用30%乙腈溶解且定容至10mL混勻，配制成2.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。用移液器準(zhǔn)確吸取0uL、150uL、250uL、500uL、1000uL、1500uL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液后用30%乙腈溶液稀釋至2mL，配制成質(zhì)量濃度為0mg/mL、0.15mg/mL、0.25mg/mL、0.50mg/mL、1.0mg/mL、1.5mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。

2.3甜茶苷樣品測(cè)定的色譜條件

2.3.1色譜條件

色譜柱：C18柱（柱長(zhǎng)250mm，內(nèi)徑4.6mm，粒徑5µm）；流動(dòng)相：0.05%磷酸溶液+乙腈（68+32）；流速：1mL/min；進(jìn)樣量：5µL；柱溫：40℃。

2.3.2檢測(cè)波長(zhǎng)的確定

選取甜茶苷標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣，在2.3.1的色譜條件下，利用高效液相色譜儀的二極管陣列全波長(zhǎng)紫外掃描功能掃描。

2.4色譜出峰評(píng)價(jià)

按2.3確定的色譜條件，對(duì)甜茶苷含量為0.15mg/mL、0.50mg/mL、1.50mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)（曲線最低濃度點(diǎn)、中間濃度點(diǎn)以及最高濃度點(diǎn)）進(jìn)樣分析，得到液相色譜圖。

2.5甜茶苷測(cè)定前處理提取過(guò)程的研究

將甜茶葉經(jīng)粉碎后備用。

2.5.1不同溶劑對(duì)提取對(duì)甜茶苷含量測(cè)定的影響

選取三個(gè)甜茶葉樣品（稱樣量約為0.5g），分別選取70%乙醇、純水以及30%乙腈作為提取溶劑，提取溶劑用量為10mL，超聲提取30min，將提取液用提取溶劑定容至25mL，過(guò)濾，測(cè)定甜茶苷含量。

2.5.2不同提取方式對(duì)甜茶苷含量測(cè)定的影響

選取三個(gè)甜茶葉樣品（稱樣量約為0.5g），按表1的四種方式進(jìn)行提取，將提取液用30%乙腈定容至25mL，過(guò)濾，測(cè)定甜茶苷含量。

2.6加標(biāo)回收試驗(yàn)

稱取四份同一甜茶葉樣品，其中一份作為本底，另外三份分別按照加標(biāo)量為0.104g/100g、0.264g/100g、0.427g/100g進(jìn)行加標(biāo)，然后按照已經(jīng)確定的甜茶苷測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算其回收率。

2.7精密度試驗(yàn)

在確定的甜茶苷含量測(cè)定條件下，對(duì)同一甜茶葉樣品進(jìn)行6次重復(fù)測(cè)定。利用6次測(cè)定結(jié)果的RSD對(duì)精密度進(jìn)行評(píng)價(jià)。

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