北方偉業(yè)計(jì)量集團(tuán)有限公司
將生、熟小米70%乙醇粗提物、正己烷、乙酸乙酯、正丁醇和水配制成不同的濃度梯度5.0,10.0,15.0,20.0,25.0mg/mL,提取物消化液為5mg/mL,沉淀物消化液為25mg/mL,取1.0mL樣品溶液加入到3.0mL工作液中(10mmol/L2,4,6-三吡啶基三嗪(TPTZ)、20mmol/LFeCl3、0.3moL/L醋酸緩沖液以1∶1∶10的比例混合,預(yù)熱至37℃?zhèn)溆茫?,搖勻后于37℃水浴中靜置10min,593nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光值。另以0.0125,0.0250,0.050,0.100,0.150,0.200,0.250和0.300mmol/LFeSO4作標(biāo)準(zhǔn)曲線(吸光度0.087~0.952),樣品的抗氧化活性以達(dá)到同樣吸光度值所需FeSO4的摩爾數(shù)表示。標(biāo)準(zhǔn)曲線為:y=3.0485x+0.0458,R2=0.999。1.2.5α-淀粉酶抑制作用測(cè)定10μL樣品與50μL酶液混合(2U/mL),加入50μL磷酸鈉緩沖溶液(0.02mol/L,pH6.9),37℃孵育10min。加入90μL可溶性淀粉溶液(0.5%),37℃反應(yīng)20min。加入100μL二硝基水楊酸(DNS)溶液沸水浴10min。冷卻至室溫后,540nm下測(cè)定。當(dāng)吸光值在0~2.22時(shí),吸光值與葡萄糖濃度有較好的線性關(guān)系,此方法所用酶及底物濃度、反應(yīng)時(shí)間產(chǎn)生的葡萄糖含量落在標(biāo)準(zhǔn)曲線內(nèi)(y=452.64x-0.064,R2=0.992)。
1.1.2數(shù)據(jù)處理方法
采用Excel軟件統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù),所有數(shù)據(jù)均為4次重復(fù)試驗(yàn)的平均值和標(biāo)準(zhǔn)誤。采用SPSS16.0軟件進(jìn)行顯著性分析,P<0.05表示差異顯著性。
由表1可知,隨著干預(yù)時(shí)間的延長(zhǎng),各組大鼠體重持續(xù)增長(zhǎng),但干預(yù)組與模型組體重并無(wú)差異。臟器指數(shù)能夠反映藥物對(duì)相關(guān)器官的影響。各組大鼠的脾、睪丸及睪丸脂肪系數(shù)與D組均無(wú)顯著差異。與正常對(duì)照組(ND)相比,D組大鼠腎臟及肝臟系數(shù)均顯著增加,灌胃小米提取物的大鼠肝臟系數(shù)沒(méi)有明顯變化(與D組相比)。Met、UM-CL組腎臟系數(shù)有所降低,但與D組相比均無(wú)顯著差異。M-CL組、M-CH組大鼠腎臟系數(shù)升高,其中M-CH顯著高于D組大鼠(P<0.05)。
注射STZ成模后,經(jīng)過(guò)為期4周的高脂喂養(yǎng),D組及干預(yù)組的空腹血糖顯著高于ND組(圖1a),并出現(xiàn)了糖耐量受損(IGT),OGTT曲線下面積(AUC)增加(圖1b),與ND組有極顯著差異(P<0.01)。二甲雙胍可顯著改善由STZ聯(lián)合高脂誘導(dǎo)的大鼠IGT及空腹血糖,AUC及空腹血糖與D組比有顯著差異(P<0.05)。UM-CL可顯著改善大鼠IGT及空腹血糖,其效果與二甲雙胍相當(dāng),Met組及UM-CL組小鼠AUC分別降低38.97%,19.95%。而熟小米粗提取物效果較差,在低/高濃度下AUC及空腹血糖均與D組無(wú)顯著差異。
由表2可知,D組大鼠血清中膽固醇(TC)及高密度脂蛋白(HDL)含量顯著低于ND組大鼠(P<0.05)。經(jīng)過(guò)為期4周的干預(yù),干預(yù)組的TC、甘油三酯、低密度脂蛋白與模型組相比均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。UM組大鼠血清HDL顯著高于D組(P<0.05)。
如圖2所示。各提取物對(duì)DPPH的清除效果與樣品濃度呈劑量依賴關(guān)系。各提取物的抗氧化能力存在較大差距,在樣品質(zhì)量濃度為8mg/mL時(shí),生小米組UM-C、UM-HX、UM-EA、UM-BT、UM-W的DPPH清除能力分別為(73.26±0.22)%,(50.91±0.40)%,(48.14±0.74)%,(80.19±1.31)%及(69.91±0.85)%(圖2a);熟小米組M-C、M-HX、M-EA、M-BT、M-W的DPPH清除能力分別為(85.14±0.43)%,(37.57±0.73)%,(74.29±0.16)%,(87.61±0.32)%,(65.61±0.5)%(圖2b)。由圖2a和圖2b可知,各提取物的DPPH清除能力為MBT>M-C>UM-BT>M-EA>UM-C>UM-W>M-W>UM-HX>UM-EA>M-HX??梢?jiàn),通過(guò)熟化處理后的M-C、M-BT的DPPH清除能力高于UM-C、UM-BT,說(shuō)明熟化后小米可能具有更好的DPPH清除能力。
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相關(guān)鏈接:甘油三酯,二甲雙胍,二硝基水楊酸,2,4,6-三吡啶基三嗪(TPTZ)
對(duì)由瓊脂與刺槐豆膠組成的復(fù)合膠液進(jìn)行了流變性能,旋光性能測(cè)試,對(duì)其形成的凝膠進(jìn)行了力學(xué)性能與負(fù)載鹽酸二甲雙胍藥物的緩釋性能測(cè)試。測(cè)試結(jié)果表明:隨著復(fù)合膠液溫度的降低,瓊脂分子與刺槐豆膠分子發(fā)生了相互作用。
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