2、目標(biāo)化合物的定量分析

試驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)，不同的實(shí)驗(yàn)條件下，產(chǎn)物B環(huán)己醇均能生成，只是主副產(chǎn)物之間的比例發(fā)生了改變。將10mL0.05mg/mL的甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行衍生，條件1：加入硫酸溶液2.5mL，亞硝酸鈉的量分別為0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL，衍生結(jié)果如圖4。結(jié)果表明，產(chǎn)物B環(huán)己醇伴隨著產(chǎn)物A產(chǎn)生，隨亞硝酸鈉量增加，兩者之和增加，產(chǎn)物1的增加幅度明顯快于產(chǎn)物2，產(chǎn)物1與產(chǎn)物2之間的比例為1.51、1.84、2.12、2.50、2.73，兩者之間的比例也隨著增加。
 

試驗(yàn)條件2：加入亞硝酸鈉溶液2.5mL，硫酸溶液的量分別為：0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL，衍生結(jié)果如圖5。結(jié)果表明，硫酸溶液加人量在0.5mL～2.5mL之間，隨酸性條件加強(qiáng)，產(chǎn)物A與產(chǎn)物B生成的量均有所增加，產(chǎn)物A增速快于產(chǎn)物B，兩者之間的比例分別為1.31、1.74、2.04、2.08、2.01，呈增大趨勢，并在2.0mL達(dá)到最高點(diǎn)。

同時(shí)，我們考察了衍生產(chǎn)物隨時(shí)間的變化情況，發(fā)現(xiàn)隨時(shí)間延長，產(chǎn)物A和產(chǎn)物B響應(yīng)發(fā)生改變，產(chǎn)物A減少，產(chǎn)物B增加，但兩者加和基本保持不變，這一結(jié)論在有些研究中也得到證實(shí)；相同條件下，不同底物衍生結(jié)果，峰A和峰B比例也不相同。綜合上述結(jié)果，在對甜蜜素進(jìn)行定量時(shí)，產(chǎn)物B環(huán)己醇在定量過程中不能忽略。所以將峰A和峰B響應(yīng)值加和來進(jìn)行定量分析。峰A定量離子55，峰B定量離子57。

3、標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性關(guān)系和檢測限

標(biāo)準(zhǔn)溶液系列制備及衍生化：準(zhǔn)確移取甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.00mg/mL）0.50mL、1.00mL、2.50mL、5.00mL、10.00mL于50mL容量瓶中，加水定容，配制成系列濃度標(biāo)準(zhǔn)系列為：0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.05mg/mL、0.10mg/mL、0.20mg/mL。準(zhǔn)確移取標(biāo)準(zhǔn)系列溶液10.0mL與樣品術(shù)生化步驟相同。

標(biāo)準(zhǔn)曲線曲線：Y=4.51817x106X+6.1458x105，線性相關(guān)系數(shù)（R2）為0.9995，其中Y為衍生物的峰面積之和，X為甜蜜素濃度。研究中同時(shí)對產(chǎn)物峰A單獨(dú)進(jìn)行了線性分析，線性相關(guān)系數(shù)（R2）為0.9978，這一結(jié)果驗(yàn)證了采用兩種產(chǎn)物加和來外標(biāo)法定量計(jì)算的科學(xué)性。逐步稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液，以≥3倍信噪比（S/N）計(jì)算出甜蜜素的檢出限（LOD）為1.5mg/kg。

4、回收率試驗(yàn)

添加10mg/kg、50mg/kg、100mg/kg的標(biāo)樣濃度，以麻花、果脯和面包為基質(zhì)進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)，采用外標(biāo)法定量，回收率在87.3%～106.5%。

5、精密度和重復(fù)性

準(zhǔn)確移取標(biāo)準(zhǔn)系列溶液（0.05mg/mL）10.0mL于帶蓋離心管中，樣品前處理：稱取打碎、混勻的樣品5g于50mL離心管中，加30mL水，振搖，超生遠(yuǎn)取20min，混勻，離心（3000r/min）10min，過濾，用水分次洗滌殘?jiān)?，收集濾液并定容至50mL。高脂高蛋白樣品暫不在研究范圍內(nèi)。衍生物濃度為100μg/mL，通過本方法進(jìn)行測定分析，保留時(shí)間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.56%（n=6）），峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為6.17%（n=6）。

三、結(jié)論

通過氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，對食品中的甜蜜素衍生物進(jìn)行檢測分析，利用甜蜜素2個(gè)衍生物的保留時(shí)間和離子來進(jìn)行雙重定性，使得檢出的假陽性概率大大降低；該方法具有較好的重現(xiàn)性，保留時(shí)間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.56%（n=6），峰面積對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為6.17%；方法中得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性較好，線性相關(guān)系數(shù)（R2）達(dá)到0.9995；不同濃度的加標(biāo)回收率在87.3%～106.5%；方法的檢出限為1.5mg/kg，低于國標(biāo)，是-種行之有效的檢測方法。

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