研究鐵皮石斛乙酸乙酯部分中聯(lián)芐類化學成分。運用大孔樹脂、MCI、硅膠、凝膠(Sephadex LH-20)、ODS等柱色譜、制備薄層色譜及制備高效液相色譜等技術(shù)進行化合物的分離純化，根據(jù)1H-NMR、13C-NMR、MS等波譜數(shù)據(jù)和理化性質(zhì)鑒定化合物的結(jié)構(gòu)。從鐵皮石斛乙醇提取物的乙酸乙酯部位分離得到了15個聯(lián)芐類化合物，分別鑒定為dendrocandin X(1)、3,4'-二羥基-4,5-二甲氧基聯(lián)芐(2)、6''-de-O-methyldendrofindlaphenol A(3)、3,4-二羥基-4',5-二甲氧基聯(lián)芐(4)、dendrosinen B(5)、3,4,4'-三羥基-5-甲氧基聯(lián)芐(6)、3,3'-二羥基-4,5-二甲氧基聯(lián)芐(7)、3,4'-二羥基-5-甲氧基聯(lián)芐(8)、杓唇石斛素(9)、石斛酚(10)、4,4'-二羥基-3,5-二甲氧基聯(lián)芐(11)、3,4',5-三羥基-3'-甲氧基聯(lián)芐(12)、3-O-methylgigantol(13)、dendrocandin U(14)和dendrocandin N(15)?；衔?為新化合物，化合物2首次在石斛屬中分離得到，化合物3~7首次在鐵皮石斛中分離得到。

鐵皮石斛Dendrobium officinale Kimura et Migo為蘭科石斛屬珍稀名貴藥用植物，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，被列為上品，自1963年版《中國藥典》以“耳環(huán)石斛”收載后，歷經(jīng)多版修訂，一直為中藥石斛的基原植物之一，并于2010年版《中國藥典》以“鐵皮石斛”單列收載。

鐵皮石斛性味甘、微寒；歸胃、腎經(jīng)，具有滋陰清熱、益胃生津、潤肺止咳等藥效，用于熱病傷津、口干煩渴、病后虛熱、目暗不明等?，F(xiàn)代藥理學研究表明，鐵皮石斛具有增強人體免疫力、抗腫瘤、抗氧化、降血糖、降血壓、促進消化等多種藥理活性。為深入研究鐵皮石斛抗腫瘤活性的物質(zhì)基礎(chǔ)，本研究前期以體外抗腫瘤活性為藥效學指標，對鐵皮石斛莖乙醇提取物的不同提取部位進行活性跟蹤，確定其乙酸乙酯部位的體外腫瘤細胞毒性最強，并從中分離得到了15個聯(lián)芐類化合物，經(jīng)波譜學鑒定為dendrocandin X(1)、3,4'-二羥基-4,5-二甲氧基聯(lián)芐(2)、6''-de-O-methyldendrofindlaphenol A(3)、3,4-二羥基-4',5-二甲氧基聯(lián)芐(4)、dendrosinen B(5)、3,4,4'-三羥基-5-甲氧基聯(lián)芐(6)、3,3'-二羥基-4,5-二甲氧基聯(lián)芐(7)、3,4'-二羥基-5-甲氧基聯(lián)芐(8)、杓唇石斛素(9)、石斛酚(10)、4,4'-二羥基-3,5-二甲氧基聯(lián)芐(11)、3,4',5-三羥基-3'-甲氧基聯(lián)芐(12)、3-O-methylgigantol(13)、dendrocandin U(14)和dendrocandin N(15)。其中，化合物1為新化合物 (圖1)，化合物2為首次在石斛屬中分離得到，化合物3~7為首次在該植物中分離得到。

1 材料

Bruker AV-400型核磁共振光譜儀(德國Bruker公司)；HR-ESI-MS聯(lián)用儀(美國Waters公司)；LC3000半制備型高效液相色譜儀(北京創(chuàng)新通恒)；Agilent 1260高效液相色譜儀(美國Agilent公司)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士Buchi公司)。

制備型色譜柱為Capcell Pak C18色譜柱(20 mm×250 mm, 5 µm，Shiseido)；柱色譜硅膠(200~300、300~400目，青島海洋化工有限公司)；薄層色譜硅膠板(HSGF254，煙臺江友硅膠開發(fā)有限公司)；Sephadex LH-20(GE-Healthcare Bio-Sciences AB, Sweden)；大孔吸附樹脂D101(國藥集團化學試劑有限公司)；MCI(75~150 μm，Mitsubishi Chemical Corporation，Japan)；ODS(40~60 μm，Sepax Technologies Inc.，USA)；CD3OD、CDCl3、DMSO(Cambridge Isotope Laboratories，USA)；色譜純乙腈、甲醇 (DIKMA，USA)；乙醇、石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、甲醇(工業(yè)純、分析純，國藥集團上?；瘜W試劑公司)。

鐵皮石斛于2018年11月采自貴州省貴陽市，由上海中醫(yī)藥大學中藥研究所徐紅研究員鑒定為鐵皮石斛D. officinale，憑證標本(No.2018011-1) 保存于上海中醫(yī)藥大學中藥研究所。

2 提取與分離

鐵皮石斛干燥莖25 kg，粉碎成粗粉，用95%乙醇滲漉提取3次，合并提取液，減壓濃縮得到乙醇提取物浸膏約3.0 kg。將浸膏中殘留的乙醇揮干，混懸于水中，再用乙酸乙酯萃取，萃取液減壓濃縮后得到乙酸乙酯萃取部位1.2 kg。

將乙酸乙酯部分1.2 kg用大孔樹脂柱色譜進行分離，依次用水、30%、50%、80%、90%乙醇進行梯度洗脫，每梯度洗脫3個柱體積，洗脫液經(jīng)薄層色譜檢測，合并相似組成的洗脫液，回收溶劑得洗脫部分Fr.A~Fr.E。Fr.B經(jīng)MCI色譜柱，甲醇-水(10:90~80:20)梯度洗脫，合并洗脫液得到亞組分Fr.B1~Fr.B6。Fr.B6亞組分經(jīng)反相ODS柱色譜、Sephadex LH-20凝膠柱色譜以及制備型HPLC純化得到化合物1(4.5 mg)。

Fr.C經(jīng)MCI色譜柱，甲醇-水(10:90~80:20)梯度洗脫，合并洗脫液得到亞組分Fr.C1~Fr.C6。Fr.C2亞組分經(jīng)反相ODS柱色譜、Sephadex LH-20凝膠柱色譜以及制備型HPLC純化得到化合物6(4.6 mg)，12(9.8 mg)，13(8.7 mg)。Fr.D經(jīng)MCI色譜柱，甲醇-水(10:90~80:20)梯度洗脫，合并洗脫液得到亞組分Fr.D1~Fr.D6。Fr.D3亞組分經(jīng)反相ODS柱色譜、Sephadex LH-20凝膠柱色譜、TLC薄層制備以及制備型HPLC純化得到化合物2(2.0 mg)，3(103.3 mg)，5(6.0 mg)，7(5.5 mg)，10(8.6 mg)，11(8.9 mg)。Fr.D4亞組分經(jīng)正相硅膠柱色譜分離，用石油醚-丙酮(5:1~1:5)進行梯度洗脫得到亞組分Fr.D4-1~Fr.D4-5，F(xiàn)r.D4-1和Fr.D4-2亞組分經(jīng)反相ODS柱色譜、Sephadex LH-20凝膠柱色譜、TLC薄層制備以及制備型HPLC純化得到化合物4(5.1 mg)，8(7.0 mg)，9(6.6 mg)，14(10.2 mg)，15(9.6 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 淡黃色無定形粉末；HR-ESI-MS m/z 435.158 3 -，計算值436.158 3；D25 = 1.3° (c 0.1, MeOH)。紅外光譜數(shù)據(jù)顯示出了內(nèi)酯環(huán)(1 743 cm-1)、羥基(3 381 cm-1)及芳環(huán)(1 613, 1 512, 1 448 cm-1)等特征吸收信號。結(jié)合13C-NMR數(shù)據(jù)(表1)進一步確定其分子式為C25H24O7，不飽和度為14。1H-NMR譜顯示1組ABX偶合質(zhì)子信號，1組對位偶合質(zhì)子信號，1個五取代質(zhì)子信號，2個甲氧基質(zhì)子信號，3個亞甲基質(zhì)子信號 ，1個次甲基質(zhì)子信號 。其中，為1組典型聯(lián)芐類化合物質(zhì)子信號。13C-NMR譜給出了25個碳信號，包括18個芳香碳信號(5個連氧)，2個甲氧基信號，3個亞甲基信號，1個次甲基信號，1個羰基碳信號。

在HMBC譜中，甲氧基質(zhì)子13-OMe (δH 3.82)與C-13 (δC 149.2)、甲氧基質(zhì)子3'-OMe (δH 3.75)與C-3' (δC 149.5)相關(guān)，結(jié)合NOESY譜中甲氧基質(zhì)子13-OMe (δH 3.82) 與H-14 (δH 6.56)、甲氧基質(zhì)子3'-OMe (δH 3.75) 與H-2' (δH 6.63) 相關(guān)，說明13-OMe與C-13相連，3'-OMe與C-3'相連；在HMBC譜中，H-2 (δH 6.78) 與C-7 (δC 37.7) 相關(guān)，結(jié)合1H-NMR譜顯示的1組對位偶合質(zhì)子信號 以及COSY譜中H-2 (δH 6.78)與H-3 (δH 6.64)、H-5 (δH 6.64)與H-6 (δH 6.78)相關(guān)，說明C-7連有1個對位取代苯環(huán)；在HMBC譜中，H-8 (δH 2.69)與C-10 (δC 118.5)、H-14 (δH 6.56)與C-8 (δC 35.6)相關(guān)，結(jié)合H-14 (δH 6.56) 為五取代質(zhì)子說明C-8連有一個五取代苯環(huán)；在HMBC譜中，H-7' (δH 4.24) 分別與C-2' (δC 111.8) 和C-6' (δC 120.7) 相關(guān)，結(jié)合1H-NMR譜顯示的1組ABX偶合質(zhì)子信號以及COSY譜中H-5' (δH 6.70)與H-6' (δH 6.43)相關(guān)說明C-7'連有1個1,3,4-三取代苯環(huán)；在HMBC譜中，H-8'a (δH 2.89)與C-10 (δC 118.5)、H-8'b (δH 2.79) 與C-10 (δC 118.5)、H-7' (δH 4.24)分別與C-9' (δC 169.8)和C-11 (δC 140.3)相關(guān)，結(jié)合1H和13C-NMR等數(shù)據(jù)說明C-7'、C-8'、C-9'、C-10和C-11構(gòu)成1個內(nèi)酯六元環(huán)。

將化合物1的1H和13C-NMR數(shù)據(jù)與文獻報道的化合物gnetumontanin C的1H和13C-NMR數(shù)據(jù)比較發(fā)現(xiàn)，二者區(qū)別在于化合物1的取代基位置不同以及C-7雙鍵的存在。比對發(fā)現(xiàn)化合物1與化合物vittarin F的基本骨架相似，vittarin F的部分1H-NMR數(shù)據(jù)(按本文的命名順序)為，與化合物1相同位置氫的1H-NMR數(shù)據(jù)相似；vittarin F的部分13C-NMR數(shù)據(jù)(按本文的命名順序)為，與化合物1相同位置碳的13C-NMR數(shù)據(jù)相似，綜上所述，確定了化合物1的結(jié)構(gòu) (圖1)，命名為dendrocandin X。

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