已知的真菌毒素有數(shù)百種。主要產(chǎn)毒真菌為曲毒屬、青霉屬、鐮刀菌屬的真菌以及其他菌屬的真菌。曲霉毒素中最重要的是黃曲霉毒素。在潮濕溫暖的季節(jié)，糧食、油料及干果中很易生出黃曲霉毒素，如許多國家在玉米、花生及花生油、花生餅、花生醬、棉籽餅、山核桃、無花果、榛子、可可豆、杏仁、奶粉、牛奶、水牛奶、酸奶、奶酪、大米等都曾查出黃曲霉毒素。日本及中國還曾從發(fā)酵豆制品(如醬及醬油)中發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素。常見真菌毒素見表。

一、黃曲霉毒素的檢驗

黃曲霉毒素是黃曲霉和寄生曲霉產(chǎn)生的一類結(jié)構(gòu)類似的代謝混合產(chǎn)物，有17種之多，包括B₁、B₂、G₁、G₂、M₁、M₂、P₁、Q、H₁、GM、B_2a和毒醇。其基本結(jié)構(gòu)都是二呋喃環(huán)和香豆素，前者為基本毒性結(jié)構(gòu)，后者為為致癌物。在紫外線下，黃曲霉毒素B₁、黃曲霉毒素B₂發(fā)藍色熒光，黃曲霉毒素G₁、黃曲霉毒素G₂發(fā)綠色熒光。黃曲霉毒素M₁是黃曲霉毒素B₁在體內(nèi)經(jīng)過羥化而衍生成的代謝產(chǎn)物。黃曲霉毒素的相對分子質(zhì)量為312～346。難溶于水，易溶于油、甲醇、丙酮和氯仿等有機溶劑，但不溶于石油醚、己烷和乙醇中。一般在中性及酸性溶液中較穩(wěn)定，在pH 9～10的強堿溶液中分解迅速。黃曲霉毒素非常穩(wěn)定，耐熱，在熔點(200～300℃)之下不會分解(黃曲霉毒素B₁的分解溫度為368°C，且其毒性非常強，主要損傷肝臟，使肝細胞壞死、出血及膽管增生，有明顯的致癌作用。

黃曲霉毒素常存在于土壤、動植物、各種堅果(特別是花生和核桃)中，在大豆、稻谷、玉米、通心粉、調(diào)味品、牛奶、奶制品、食用油、咸魚等制品中也經(jīng)常發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素。

黃曲霉菌的檢測方法包括：薄層色譜法（TLC）、高效液相色譜法（HPLC） (液-液提取和固相提取)、微柱篩選法、酶送金疫吸附法皿ISA)、免疫親和柱-熒光分光光度法、免疫親和柱HPLC法等。TLC雖然分析成本較低，但操作步驟多，靈敏度差；HPLC雖然靈敏度高，但樣品處理煩瑣，操作復(fù)雜，儀器昂貴。ELISA法重復(fù)性差，試劑壽命短，需要低溫保存。此外，這些方法都具有如下共同的不足之處：①在操作過程中，需要使用劇毒的黃曲霉毒素作為標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)物，對操作人員造成巨大的危險；②在對樣品進行預(yù)處理過程中，需要使用多種有毒、異味的有機溶劑，不僅毒害操作人員，而且污染環(huán)境；③操作過程煩瑣，時間長，勞動強度大；④儀器設(shè)備復(fù)雜笨重，難以實現(xiàn)現(xiàn)場快速分析；⑤靈敏度較差，無法滿足歐盟及其他一些國家和地區(qū)的標(biāo)準(zhǔn)要求。

(一)微柱篩選法

1、原理

試樣提取液通過由氧化鋁與硅鎂吸附劑組成的微柱色譜管，雜質(zhì)被氧化鋁吸附，黃曲霉毒素被硅鎂吸附劑吸附，在365nm紫外線下呈藍紫色熒光，其熒光強度在一定范圍內(nèi)與黃曲霉毒素的含量成正比，由于微柱不能分離黃曲霉毒素B₁、黃曲霉毒素B₂、黃曲霉毒素G₁、黃曲霉毒素G₂，故結(jié)果為黃曲霉毒素的總量。

2、試劑

①石油醚：沸程60～900°C或30～600°C。

②中性氧化鋁：色譜用100～200目。

③酸性氧化鋁：色譜用100～200目。

④無水硫酸鈉：過40～80目篩或80～100目篩。

⑤硅鎂吸附劑：色譜用100～200目。

⑥甲醇水溶液：(55+45)。

⑦ 展開劑：丙酮一三氯甲烷(1+9)。

⑧脂棉：用索氏提取器以二氯甲烷為溶劑提取2h后，揮干后儲于瓶中保存。

⑨曲霉毒素B₁標(biāo)準(zhǔn)液：用苯-乙腈(98+2)配成0.4μg/mL的儲存液及0.1μg/mL的使用液，閉光冷藏。

注：色譜用氧化鋁、硅鎂吸附劑、無水硫酸鈉應(yīng)在120℃活化2h。

3、儀器

①紫外光燈：8～100W，帶有波長365mm濾光片。

②內(nèi)徑0.4cm、長12cm的玻璃管，為加液方便上加一段粗管。

③微柱管架。

④微量注射器：50mL。

4、測定步驟

(1)提取

①糧食、花生及其制品：取粉碎過篩(20目)試樣20.00g于具塞錐形瓶中，加100mL甲醇水溶液，30mL石油醚，密塞振搖30min，靜置片刻，過濾于50mL具塞量筒中，收集50mL甲醇水溶液(注意切勿將石油醚層帶入濾液中)，轉(zhuǎn)入分液漏斗中，加50mL硫酸鈉溶液 (20g／L)稀釋，加三氯甲烷10mL，輕搖2～3min，靜置分層，三氯甲烷層通過裝有5g無水硫酸鈉的小漏斗脫水(以少量脫脂棉球塞住漏斗徑口，并以少量三氯甲烷潤濕)，并濾入10mL比色管中，再向分液漏斗中加入3mL三氯甲烷重提一次，脫水后濾入原比色管內(nèi)，以少量三氯甲烷洗漏斗并定容至10.0mL，密塞，混勻，待測。此樣液1mL相當(dāng)于1.0g試樣。

②植物油：稱混合油樣10.00g于20mL的燒杯中，用50mL石油醚分?jǐn)?shù)次洗入分液漏斗中，加50mL甲醇水溶液輕搖2～3min，靜置分層，將下層甲醇水轉(zhuǎn)入另一分液漏斗中，加50mL硫酸鈉溶液(20g／L)稀釋，加三氯甲烷10mL，以下按①中自“輕搖2～3min……”起依法操作。此樣液1mL相當(dāng)于1.0g試樣。

③發(fā)酵酒、醬油、醋等水溶性試樣：啤酒等含二氧化碳的試樣，需在燒杯中于水浴上加熱，攪拌，除去氣泡，否則易乳化。稱混勻試樣20.00g于小燒杯中，以80mL硫酸鈉溶液(20g/L)洗人分液漏斗中，加三氯甲烷10mL，此樣液1mL相當(dāng)于2.0g試樣。

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