2、姜油樹(shù)脂添加量對(duì)R.oryzaeMG1生物量和發(fā)酵液pH的影響

在20mLPDA液體培養(yǎng)基中分別添加姜油樹(shù)脂0μL、100uL.200μL、400uL、800uL，接入1%的R.oryzaeMG1孢子懸液，28℃震蕩(150/min)培養(yǎng)72h，每8h取樣，測(cè)定培養(yǎng)物pH及菌絲濕重，繪制的生長(zhǎng)量曲線和pH曲線如圖2、3所示。

由圖2可見(jiàn)，隨著姜油樹(shù)脂添加量的增加，R.oryzaeMG1生長(zhǎng)速率及細(xì)胞量逐漸遞減，說(shuō)明姜油樹(shù)脂有一定的抑菌作用。在不添加姜油樹(shù)脂的情況下，R.oryzaeMG1在接種后16h進(jìn)入對(duì)數(shù)期，且持續(xù)增長(zhǎng)，72h后菌絲濕重8.72g；當(dāng)姜油樹(shù)脂添加量為50μL時(shí)，MG1生長(zhǎng)趨勢(shì)與不添加姜油樹(shù)脂時(shí)相近，但生長(zhǎng)速率稍緩，在接種后24h為對(duì)數(shù)期，細(xì)胞量有所降低，72h后菌絲濕重8.22g；當(dāng)姜油樹(shù)脂添加量為100uL時(shí)，生長(zhǎng)速率明顯緩慢，約32h后才進(jìn)入對(duì)數(shù)期，72h后菌絲濕重降為3.71g；當(dāng)姜油樹(shù)脂添加量超過(guò)200μL時(shí)，MG1生長(zhǎng)極緩慢，細(xì)胞量明顯降低，72h后菌絲濕重小于1.70g。上述分析表明，在0～100μL姜油樹(shù)脂添加量范圍內(nèi)，對(duì)R.oryzaeMG1的生長(zhǎng)繁殖影響不大，當(dāng)添加量超過(guò)100μL時(shí)，表現(xiàn)出極強(qiáng)的抑菌能力。

由圖3可見(jiàn)，隨著姜油樹(shù)脂添加量的增加，培養(yǎng)物的pH持續(xù)上升；不添加姜油樹(shù)脂的情況下，經(jīng)72h發(fā)酵，pH為2.81；隨姜油樹(shù)脂添加量的梯度，pH分別為2.77、2.96、3.13、3.43、3.62。上述分析表明，在0～100μL姜油樹(shù)脂添加量范圍內(nèi)，MG1的代謝未受到明顯抑制，產(chǎn)酸能力較強(qiáng)，與圖2的分析相吻合。

由圖4可見(jiàn)，當(dāng)液體培養(yǎng)基中不添加姜油樹(shù)脂時(shí)，MG1生長(zhǎng)狀況良好，菌絲抱團(tuán)，菌絲球大小均勻，培養(yǎng)液澄清；在姜油樹(shù)脂添加量在50～200uL時(shí)，菌絲一部分抱團(tuán)，另一部分呈絮狀，培養(yǎng)液澄清；在姜油樹(shù)脂添加量達(dá)到400～800uL時(shí)，菌絲完全呈絮狀，培養(yǎng)液較混濁。說(shuō)明R.oryzaeMG1對(duì)姜油樹(shù)脂的耐受能力約在100uL以內(nèi)，與圖2、3的分析相吻合，而且絮狀的菌絲形態(tài)更有利于產(chǎn)酶，以此為基礎(chǔ)，進(jìn)行后續(xù)姜油樹(shù)脂添加量單因素試驗(yàn)。

3、R.oryzaeMG1發(fā)酵姜油樹(shù)脂條件的單因素試驗(yàn)

（1）姜油樹(shù)脂添加量對(duì)抗氧化活性的影響

在20mLPDA液體培養(yǎng)基中分別添加姜油樹(shù)脂10μL、20μL、30μuL、40μuL、50μL、60uL、70μL、80μL、90μL、100μL、120μL、140μL、160uL、180μL、200μL，接入1%的MG1孢子懸液，35℃震蕩(150r/min)培養(yǎng)4d后姜油樹(shù)脂的抗氧化活性見(jiàn)圖5。

由圖5可見(jiàn)，在10～70μL姜油樹(shù)脂添加量范圍內(nèi)，發(fā)酵后姜油樹(shù)脂TAC逐漸增加，當(dāng)姜油樹(shù)脂添加量為70uL時(shí)，TAC為1964.67±6.09umol/g；當(dāng)添加量大于70μL后，TAC逐漸降低，說(shuō)明R.oryzaeMG1的生長(zhǎng)受到抑制，生長(zhǎng)代謝減緩，導(dǎo)致發(fā)酵后姜油樹(shù)脂的總抗氧化活性降低。因此選取70μL姜油添加量進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

（2）發(fā)酵溫度對(duì)抗氧化活性的影響

在20mLPDA液體培養(yǎng)基中添加70μL姜油樹(shù)脂，接種后在不同溫度下震蕩培養(yǎng)4d后姜油樹(shù)脂的抗氧化活性見(jiàn)圖6。

由圖6可見(jiàn)，姜油樹(shù)脂乳添加量為70uL，在20～35℃下發(fā)酵4d后，姜油樹(shù)脂的TAC逐漸升高。當(dāng)溫度為35℃時(shí)，TAC為1980.13±8.60μmol/g；當(dāng)溫度高于35℃后，TAC逐漸降低，說(shuō)明R.oryzaeMG1生長(zhǎng)代謝受到影響，發(fā)酵力降低，導(dǎo)致發(fā)酵后姜油樹(shù)脂的總抗氧化活性降低。因此發(fā)酵溫度35℃進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

（3）發(fā)酵時(shí)間對(duì)抗氧化活性的影響

在20mLPDA液體培養(yǎng)基中添加70uL姜油樹(shù)脂，接種后35℃培養(yǎng)不同時(shí)間，每天取樣測(cè)定抗氧化活性見(jiàn)圖7。

如圖7可見(jiàn)，姜油樹(shù)脂乳添加量為70μL，在35℃下發(fā)酵1～4d后，姜油樹(shù)脂的TAC逐漸增加，在發(fā)酵4d時(shí)，TAC為2003.9土5.45umol/g；當(dāng)發(fā)酵時(shí)間超過(guò)4d后，TAC變化差異不顯著，說(shuō)明隨MG1生長(zhǎng)進(jìn)入穩(wěn)定期，發(fā)酵力趨于平穩(wěn)，導(dǎo)致發(fā)酵后姜油樹(shù)脂的總抗氧化活性與之前無(wú)顯著性差異。因此，選擇發(fā)酵時(shí)間4d進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

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