固定液黏度不宜太高。低黏度的固定液擴(kuò)散系數(shù)大，反應(yīng)速度快，色譜柱效能高。同時還要選用對紫外光不敏感的化合物。常用反相液液分配色譜法的固定液有C₁₈、C₈、苯己基、五氟苯基等；正相的有NH₂基、CN基。反相鍵合固定相多為硅烷化鍵合，有單鍵、三鍵之分。

液液分配色譜法現(xiàn)已廣泛采用化學(xué)鍵合固定相。它是借助于化學(xué)反應(yīng)合成方法將有機(jī)分子以共價鍵形式，通常為單分子層連接在載體上?；瘜W(xué)鍵合固定相突出的優(yōu)點(diǎn)是耐流動相沖洗，熱穩(wěn)定性好，在很大程度上減弱了固定相表面的活性位點(diǎn)?，F(xiàn)代高效液相色譜法主要使用3類填料制作色譜柱，一是超純硅膠載體色譜柱，屬于高密度鍵合相，分析對象廣泛；二是親水性化合物專用色譜柱，屬于硅膠低密度鍵合相，適于分離強(qiáng)極性化合物；三是雜化顆粒色譜柱，耐高壓，pH 1～12，不僅用于高效液相色譜(HPLC)，更適于超高效液相色譜(UPLC)。在反相高效液相色譜法中，農(nóng)藥殘留分析廣泛使用的固定相是C₁₈。C₈也是常用的一種，它更適于分析極性強(qiáng)一些的農(nóng)藥品種，如磺酰脲類除草劑。

手性同定相(chiral stationary phase，CSP)仍然是今后液相色譜法固定相的研究方向，因?yàn)榧s25％的農(nóng)藥品種具有手性對映體，加之手性對映體的活性、降解代謝和殘留特點(diǎn)存在著差異。目前商品化的手性色譜柱還難以滿足要求，手性固定相有配體交換型固定相、環(huán)糊精型手性固定相、高聚物手性固定相、蛋白質(zhì)手性親和固定相等。

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