2、液液分配備譜法：液液分配色譜法是流動(dòng)相和固定相都是液體的液相色譜法。利用樣品組分在互不相溶的兩種液相中分配系數(shù)的不同得以實(shí)現(xiàn)分離和分析。流動(dòng)相和固定相為兩種互不相溶的液體，二者之間有一個(gè)明顯的分界面，流動(dòng)相流過色譜柱時(shí)，很大面積上與固定相接觸，流動(dòng)相中的樣品組分在兩相之間很快進(jìn)行平衡分配，由于它們?cè)趦上嘀畣栂鄬?duì)溶解度的差異，會(huì)以不同速度流經(jīng)色譜柱，從而得到分離。

液液分配色譜法的特點(diǎn)：可使用多種溶劑，固定液抗沖刷能力強(qiáng)，不需要預(yù)飽和，再現(xiàn)性能非常穩(wěn)定；分離適用性廣，從非極性化合物到極性化合物，都可以作其分離對(duì)象；為改善分離度可以進(jìn)行梯度洗脫，能做高精度定量分析?；谶@些特點(diǎn)，液液分配色譜法廣泛地用于各種樣品中農(nóng)藥殘留的分析測(cè)定。

3、離子交換色譜法：離子交換色譜法是根據(jù)離子交換能力大小的原理進(jìn)行分離的液相色譜法。離子交換色譜法通常使用的是低交換容量的離子交換劑，這種交換劑的表面有離子交換基團(tuán)。帶負(fù)電荷的交換基團(tuán)（如磺酸基和羧酸基）可用于陽離子的分離，帶正電荷的交換基團(tuán)（如季銨鹽）可用于陰離子的分離。以陰離子交換為例，在庫侖力的作用下，樣品陰離子以及淋洗液中的陰離子（也稱為淋洗離子）都與固定相中帶正電荷的交換基團(tuán)相互作用。樣品陰離子不斷地進(jìn)入固定相，又不斷地被淋洗離子交換而進(jìn)入流動(dòng)相，在兩相中達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡，不同的樣品陰離子與交換基的作用力大小不同，電荷密度大的離子與交換基的作用力大，在樹脂中的保留時(shí)問就長(zhǎng)，于是不同的離子相互分離。

離子交換色譜法固定相，主要有以下類型：微粒樹脂型、表面多孔壁、硅膠鍵合相多孔微粒。硅膠骨架上引入各種離子基團(tuán)，或涂漬鍵合有機(jī)離子交換劑。流動(dòng)相多采用在水溶液中含有一定離子強(qiáng)度的緩沖液，或與水混溶的有機(jī)溶劑，如甲醇、乙醇、乙腈、二氧六環(huán)等。

離子交換色譜法特點(diǎn)：以水（加入相應(yīng)的電解質(zhì)）作為淋洗液?，F(xiàn)廣泛地應(yīng)用于無機(jī)離子的分離。在水溶液中解離度較高的少數(shù)農(nóng)藥品種，可采用電導(dǎo)檢測(cè)器測(cè)定。

4、空間排阻色譜法空間排阻色譜法是依據(jù)分子大小、形狀而分離的液相色譜法。用化學(xué)惰性的具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的多孔性物質(zhì)凝膠作固定相，試樣組分按分子大小進(jìn)行分離，其作用近似于分子篩效應(yīng)。試樣進(jìn)入色譜柱后，隨流動(dòng)相在凝膠外部間隙及凝膠孔穴旁流過，體積大的分子不能滲透到凝膠縫隙里去，而較早地被淋洗出來；中等體積分子產(chǎn)生部分滲透作用；小分子可以滲透到孔穴里去，因此較晚被沖洗出來，從而達(dá)到分離的目的。水或水溶液作流動(dòng)相的凝膠色譜稱為凝膠過濾色譜，有機(jī)溶劑作流動(dòng)相的凝膠色譜稱為凝膠滲透色譜。

凝膠色譜固定相有3種類型：軟性凝膠（如網(wǎng)狀交聯(lián)多聚葡萄糖等）、半剛性凝膠（如交聯(lián)聚苯乙烯等）、剛性凝膠（如多孑L硅膠等）。流動(dòng)相為水、緩沖鹽溶液、乙醇、四氫呋喃、甲苯、間甲苯酚、N，N一二甲基甲酰胺等。

空間排阻色譜法特點(diǎn)：非離子型的高分子化合物，樣品分子質(zhì)量差別愈大愈易分離；司測(cè)聚合物的分子質(zhì)量分布；是一種最穩(wěn)定的分離手段，不會(huì)引起樣品變質(zhì)和損失。

（三）高效液相色譜法的基本組成

高效液相色譜儀由輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)、計(jì)算機(jī)控制和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（含工作站軟件）組成。

1、輸液系統(tǒng)

輸液系統(tǒng)一般由儲(chǔ)液器及脫氣裝置、高壓輸液泵、梯度洗脫裝置構(gòu)成，其功能是給分離系統(tǒng)提供穩(wěn)定的能將}昆合組分分離的高壓液體。

（1）儲(chǔ)液器：儲(chǔ)液器一般是玻璃或聚四氟乙烯襯里的塑料容器，容積0.5～2L。有時(shí)也用500mL溶劑瓶。流動(dòng)相中會(huì)溶解空氣（水更明顯），含有微粒雜質(zhì)，因此流動(dòng)相在轉(zhuǎn)入儲(chǔ)液器前必須過濾和脫氣。制備好的流動(dòng)相一般是先過濾后脫氣。對(duì)于擁有在線脫氣裝置的儀器只需要過濾就可以正常工作。過濾器采用全玻璃系統(tǒng)，依據(jù)色譜柱內(nèi)徑和填料顆粒細(xì)度選用0.22μm或0.45μm水系或有機(jī)系的微孔濾膜進(jìn)行過濾。置于儲(chǔ)液器底部的輸液導(dǎo)管，需要安裝孔徑lOμm的不銹鋼質(zhì)或鋁質(zhì)或聚四氟乙烯材料的過濾頭，該過濾頭要定期（不宜超過7d）清洗，特別是在水相中的，使之保持通暢，避免輸液管路內(nèi)產(chǎn)生氣泡。流動(dòng)相脫氣是非常重要的，若氣泡吸人高壓泵液缸，會(huì)導(dǎo)致壓力不穩(wěn)或停止輸液。

（2）脫氣裝置：在高效液相色譜儀工作期間，每天或每時(shí)每刻都要對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行脫氣。脫氣有3種處理方式。

①超聲波振蕩脫氣加真空脫氣法（5min+5min）：將儲(chǔ)液器置于清洗用超聲波振蕩5min，然后再用微型真空泵或循環(huán)水式真空泵進(jìn)行脫氣5min。有文獻(xiàn)報(bào)道，將上述兩種方法聯(lián)合使用脫氣效果最佳。在充裝流動(dòng)相的密閉容器中，抽真空使溶解氣體從流動(dòng)相中逸出的方法不適合按比例混合好的流動(dòng)相脫氣，因?yàn)殚L(zhǎng)時(shí)間的抽真空會(huì)改變流動(dòng)相的配比，可能會(huì)使組分的保留時(shí)間發(fā)生明顯的變化。另外，使用該方法脫氣的流動(dòng)相只能滿足高壓梯度洗脫。

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