目的：對(duì)參柏洗劑原有定性和定量方法進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)提高研究。方法：在原標(biāo)準(zhǔn)定性方法基礎(chǔ)上，增加苦參堿和氧化苦參堿、鹽酸小檗堿對(duì)照品鑒別及地骨皮薄層色譜鑒別；增加高效液相色譜法測(cè)定方中君藥苦參所含有效成分苦參堿和氧化苦參堿含量。結(jié)果：薄層色譜法定性鑒別中，苦參、苦參堿、槐定堿、黃柏、鹽酸小檗堿、地骨皮斑點(diǎn)清晰且對(duì)應(yīng)良好，陰性無(wú)干擾；苦參堿和氧化苦參堿分別在0.545 μg～5.45 μg（苦參堿r=0.99988）、0.2226 μg～2.226 μg（氧化苦參堿r=0.99993）濃度范圍內(nèi)，與色譜峰面積線性關(guān)系均良好；苦參堿平均回收率99.27%（n=9），RSD為2.11%、氧化苦參堿平均回收率103.07%（n=9），RSD為1.68%。結(jié)論：本研究所完善、建立的定性和定量分析方法簡(jiǎn)便，重復(fù)性好，準(zhǔn)確可靠，可用于參柏洗劑的質(zhì)量控制。

參柏洗劑為我院多年的經(jīng)驗(yàn)方，主要是由苦參、黃柏、地骨皮等中藥制成的洗劑，具有清熱祛濕，殺菌止癢的功效，臨床上主要用于濕疹、癬、疥瘡及蟲咬皮疹?？鄥⒕哂星鍩嵩餄?、殺蟲等功效，在方中為君藥，主要用治濕疹、濕瘡、皮膚瘙癢、疥癬麻風(fēng)等病癥，是許多外用復(fù)方制劑的重要組成藥味?？鄥⒅饕猩飰A類、黃酮類、脂肪酸類、苯丙素類等多種成分，其中生物堿類和黃酮類是其主要藥理活性成分。生物堿主要含有苦參堿、氧化苦參堿、槐定堿等，具有抗炎鎮(zhèn)痛、抗菌、抗心律失常、抗腫瘤、抗病毒等多方面藥理作用。黃柏具有清熱燥濕，解毒療瘡的功效，可用治濕疹濕瘡，瘡瘍腫毒。黃柏主含生物堿和黃酮類成分，其中生物堿類成分含量最高，是其主要有效成分，以鹽酸小檗堿含量最高。黃柏在皮膚科疾病治療方面應(yīng)用廣泛，有抗炎抗菌、抗過(guò)敏和抗氧化、抗痛風(fēng)等作用，在方中為君藥。地骨皮在方中為臣藥，主含生物堿、有機(jī)酸及其酯類、蒽醌類等化合物，藥理研究表明其具有降血壓、降血糖、降血脂、抑菌抗炎等作。參柏洗劑現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)鑒別項(xiàng)中只用了苦參、黃柏對(duì)照藥材鑒別，無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)，缺乏定量控制指標(biāo)。為提升和完善該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，確保臨床用藥的安全、穩(wěn)定，本研究擬采用薄層色譜法增加苦參堿、槐定堿、鹽酸小檗堿的對(duì)照品鑒別和臣藥地骨皮的對(duì)照藥材鑒別；增加主要藥理活性成分苦參堿和氧化苦參堿含量測(cè)定方法。

1實(shí)驗(yàn)器材

1.1儀器

澳華HH-2恒溫水浴鍋（常州金壇良友儀器有限公司）；RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上?？婆d儀器有限公司）；卡瑪ATS4自動(dòng)點(diǎn)樣器（瑞士CAMAG公司）；卡瑪TLC成像系統(tǒng)（瑞士CAMAG公司）；雙杰JJ500電子天平（常熟市雙杰測(cè)試儀器廠）；TLE-204梅特勒托利多分析天平（瑞士梅特勒托利多公司）；安捷倫高效液相色譜儀（型號(hào)：1260/1200，美國(guó)安捷倫公司）。

1.2材料

苦參對(duì)照藥材（121019-201407）、苦參堿（110805-200306）、氧化苦參堿（110780-201007，以92.3%計(jì)）、槐定堿（110784-201706）、黃柏對(duì)照藥材（121510-201606）、鹽酸小檗堿（110713-201613）、地骨皮對(duì)照藥材（121087-201707），均購(gòu)買自中國(guó)食品藥品檢定研究院。參柏洗劑（250 mL/瓶，批號(hào)分別為20190102、20191103、20200501），均由廣東省第二中醫(yī)院藥劑科制劑室生產(chǎn)提供。乙腈、乙醇為Merck色譜純?cè)噭?，液相用水為屈臣氏飲用水，三氯甲烷、濃氨試液、甲醇等其他試劑為分析純?/p>

2 TLC法定性鑒別

2.1苦參定性鑒別

取參柏洗劑20 mL，加濃氨試液調(diào)節(jié)溶液呈堿性后，用三氯甲烷振搖提取2次，30 mL/次，合并兩次三氯甲烷提取液，回收溶劑至干，殘?jiān)? mL三氯甲烷溶解，制得供試品溶液；另外取苦參對(duì)照藥材1.00 g，加水100 mL，煮沸并保持微沸30分鐘，煎液濃縮至約20 mL，自“加濃氨試液調(diào)節(jié)溶液呈堿性后”起，同法制成苦參對(duì)照藥材溶液；再取苦參堿、槐定堿對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇分別制成每1 mL各含0.5 mg的對(duì)照品溶液；按照參柏洗劑處方比例和工藝，制得苦參陰性樣品，再按供試品溶液制備方法操作，制得苦參陰性對(duì)照溶液。依照《中國(guó)藥典》2015版通則薄層色譜法指導(dǎo)原則[21]操作，吸取上述參柏洗劑供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各5 μL、苦參對(duì)照藥材溶液10 μL、對(duì)照品溶液各10 μL，分別點(diǎn)樣在2%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G堿板上，使成條帶狀，配制甲苯-丙酮-甲醇體積比為（16∶6∶1）的展開劑，展開至約8 cm，取出展開后的薄層板，晾干，再配制甲苯-甲醇-乙酸乙酯-水體積比為（4∶4∶8∶2）的溶液，在10 ℃以下放置使之分層，再取上層溶液作為展開劑，展開，將薄層板晾干，用碘化鉍鉀試液作為顯色劑。結(jié)果顯示，參柏洗劑供試品色譜圖中，在與苦參堿對(duì)照藥材色譜和苦參堿及槐定堿對(duì)照品色譜圖對(duì)應(yīng)Rf值處，斑點(diǎn)均對(duì)應(yīng)良好，且苦參陰性無(wú)干擾，見圖1。

2.2黃柏定性鑒別

取苦參鑒別項(xiàng)下供試品溶液作為黃柏鑒別供試品溶液。另取黃柏對(duì)照藥材0.10 g，加水100 mL，煮沸并保持微沸30min，煎液濃縮至約20 mL，自“2.1”項(xiàng)下“加濃氨試液調(diào)節(jié)溶液呈堿性后”起，同法制成黃柏對(duì)照藥材溶液；再取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的對(duì)照品溶液；按照參柏洗劑處方比例和工藝，制得黃柏陰性樣品，再按供試品溶液制備方法操作，制得黃柏陰性對(duì)照溶液。依照《中國(guó)藥典》2015版通則薄層色譜法指導(dǎo)原則[21]操作，吸取上述參柏洗劑供試品溶液、陰性對(duì)照溶液、對(duì)照品溶液各1 μL、黃柏對(duì)照藥材溶液2 μL，分別點(diǎn)樣在硅膠G薄層板上，使成條帶狀，配制乙酸乙酯-冰乙酸-甲酸-水體積比為（15∶1∶1∶2）的展開劑[21]，展開并晾干，置波長(zhǎng)為365 nm的紫外光燈下觀察。結(jié)果顯示，參柏洗劑供試品色譜圖中，在與黃柏對(duì)照藥材和鹽酸小檗堿對(duì)照品色譜圖對(duì)應(yīng)Rf值處，顯相同的亮黃色熒光斑點(diǎn)，且黃柏陰性無(wú)干擾，見圖2。

2.3地骨皮定性鑒別

取苦參鑒別項(xiàng)下的供試品溶液作為地骨皮鑒別供試品溶液。另取地骨皮對(duì)照藥材1.00 g，加水100 mL，煮沸并保持微沸30min，煎液濃縮至約20 mL，自“2.1”項(xiàng)下“加濃氨試液調(diào)節(jié)溶液呈堿性后”起，同法制成地骨皮對(duì)照藥材溶液；按照參柏洗劑處方比例和工藝，制得地骨皮陰性樣品，再按供試品溶液制備方法操作，制得地骨皮陰性對(duì)照溶液。依照《中國(guó)藥典》通則薄層色譜法指導(dǎo)原則[21]操作，吸取上述參柏洗劑供試品溶液、陰性對(duì)照溶液、地骨皮對(duì)照藥材溶液各5 μL，分別點(diǎn)樣在硅膠G薄層板上，使成條帶狀，配制甲苯-丙酮-甲酸體積比為（10∶3∶0.3）的展開劑，展開并晾干，置波長(zhǎng)為365 nm的紫外光燈下觀察。結(jié)果顯示，參柏洗劑供試品色譜圖中，在與地骨皮對(duì)照藥材色譜圖對(duì)應(yīng)Rf值處，顯相同的藍(lán)色熒光斑點(diǎn)，且地骨皮陰性無(wú)干擾，見圖3。

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