醬腌菜，在GB2760-2014中的分類為腌漬的蔬菜，是我國傳統(tǒng)的消費食品，也是廣大消費者比較喜歡的食品之一。食品添加劑在醬腌菜的加工過程中已經(jīng)廣泛使用，最常用的添加劑為防腐劑（苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸）和甜味劑（糖精鈉、安賽蜜）。添加防腐劑能夠抑制產(chǎn)品中腐敗微生物的生長，延長醬腌菜產(chǎn)品的保質(zhì)期；添加甜味劑則是為了增加產(chǎn)品的風(fēng)味口感。過量的食品添加劑會對人體健康造成危害，雖然GB2760-2014已經(jīng)規(guī)定了醬腌菜中這些添加劑的使用限量，但不排除個別生產(chǎn)企業(yè)為了延長產(chǎn)品保質(zhì)期等目的而超量使用食品添加劑，因此有必要對醬腌菜中的添加劑含量進行檢測。國標(biāo)方法GB5009.28-2016能夠同時檢測食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉含量，而且方法比較簡單，適用于醬腌菜產(chǎn)品。

檢測脫氫乙酸的國標(biāo)方法有GB5009.121-2016、GB/T23377-2009，而檢測安賽蜜的國標(biāo)方法GB/T5009.140-2003僅適用于飲料產(chǎn)品的檢測，并不適用于醬腌菜產(chǎn)品。目前報道的安賽蜜檢測方法有離子色譜法、液質(zhì)聯(lián)用法、超高效液相色譜法和液相色譜法。離子色譜法的前處理比較繁瑣、液質(zhì)聯(lián)用法儀器比較昂貴、超高效液相法對色譜柱要求較高，而高效液相色譜儀為檢測機構(gòu)的基礎(chǔ)設(shè)備，又能滿足安賽蜜的檢測。因此擬采用高效液相色譜法測定醬腌菜中的安賽蜜，而脫氫乙酸也可以用高效液相色譜法測定，本研究建立了一種變波長高效液相色譜法同時測定醬腌菜中安賽蜜和脫氫乙酸的方法。該方法前處理簡單、回收率高、精密度高，可用于醬腌菜中甜味劑安賽蜜和防腐劑脫氫乙酸的檢測。

一、材料與方法

1、材料與試劑

醬腌菜樣品（榨菜、雪菜、蘿卜干、乳黃瓜等）購于無錫市各超市；安賽蜜、脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)品購于德國Dr.Ehrenstorfer公司，純度大于99.5%；
甲醇（色譜純，迪馬科技）；氫氧化鈉、硫酸鋅、乙酸銨（分析純，國藥集團）；微孔濾膜（0.45µm，上海安譜）；實驗用超純水為實驗室Mili-Q超純水機制備。

2、儀器與設(shè)備

1260型高效液相色譜儀：配有二極管陣列檢測器（DAD）（美國安捷倫公司）；IKA旋渦混勻器（廣州艾卡）；超聲波清洗機（無錫思耐德）；CT14D離心機（南京瑞蘭達(dá)）；ME204E分析天平、pH計（瑞士梅特勒公司）。

3、實驗方法

（1）溶液配制

氫氧化鈉溶液：稱取20g氫氧化鈉，加水溶解并定容至1000mL；硫酸鋅溶液：稱取120g硫酸鋅，加水溶解并定容至1000mL；乙酸銨溶液（0.02mol/L）：稱取1.54g乙酸銨，加水溶解并定容至1000mL；安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：稱取安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)品0.10g（精確至0.0001g），用水溶解并定容至100mL，標(biāo)準(zhǔn)儲備液的濃度為1000mg/L，貯存于4℃冰箱中。使用時根據(jù)需要用水稀釋成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)使用液，現(xiàn)配現(xiàn)用。脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：稱取脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)品0.10g（精確至0.0001g），用10mL氫氧化鈉溶液溶解并用水定容至100mL，標(biāo)準(zhǔn)儲備液的濃度為1000mg/L，貯存于4℃冰箱中。使用時根據(jù)需要用水稀釋成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)使用液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

（2）樣品前處理

稱取2.50g經(jīng)粉碎、混勻的樣品至25mL比色管中，加入10mL水、5mL硫酸鋅溶液，渦旋混勻，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.5，用水定容至25mL，超聲提取10min，轉(zhuǎn)移至50mL離心管內(nèi)，5000r/min離心10min，上清液經(jīng)0.45μm濾膜過濾作為測定液，用高效液相色譜儀測定。

（3）高效液相色譜條件

色譜柱：AgilentZORBAXXDB-C18（250×4.6mm，5μm，美國安捷倫公司）；流動相：90%0.02mol/L乙酸銨溶液+10%甲醇；流速：1.0mL/min；柱溫：30℃；進樣量：10μL；檢測波長程序：0～8min，226nm；8～12min，293nm。

二、結(jié)果與分析

1、樣品前處理條件的優(yōu)化

GB5009.121-2016樣品中脫氫乙酸是以水來提取的，考慮到安賽蜜（乙?；前匪徕洠┮兹苡谒?，所以以水來提取醬腌菜中的安賽蜜和脫氫乙酸。醬腌菜中含有少量的蛋白質(zhì)等成分，如果不去除將這些成分將會干擾測定。本實驗采用加標(biāo)回收實驗比較了兩類沉淀劑（亞鐵氰化鉀和乙酸鋅、氫氧化鈉和硫酸鋅）的沉淀分離效果。經(jīng)氫氧化鈉與硫酸鋅沉淀后，對樣品中的安賽蜜和脫氫乙酸的測定均無影響，加標(biāo)回收率接近100%；而經(jīng)亞鐵氰化鉀和乙酸鋅沉淀后，對樣品中安賽蜜的測定無影響，但對脫氫乙酸的測定有影響，加標(biāo)回收率僅為80%左右，可能是因為脫氫乙酸在水中的溶解度較低，隨著蛋白質(zhì)等雜質(zhì)一起沉淀下來。因而，實驗采用氫氧化鈉與硫酸鋅作為沉淀劑。

2、變波長檢測條件的確定

將適當(dāng)濃度的安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液、脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液分別采用DAD進行光譜掃描，以確定其最佳吸收波長。由圖1可知，安賽蜜的最佳吸收波長為226nm。由圖2可知，脫氫乙酸的最佳吸收波長有兩個，分別為230nm和293nm?？紤]到對羥基苯甲酸酯類、苯甲酸、山梨酸等防腐劑在230nm處也有較大吸收，選擇293nm作為脫氫乙酸的特異檢測波長。

在選定的色譜條件下，安賽蜜的出峰時間在6min左右，脫氫乙酸的出峰時間為10min左右，所以選定變波長檢測程序為：0～8min，226nm；8～12min，293nm。

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