石榴（Punicagranatum）屬石榴科植物，是中國(guó)的特色果品，因適應(yīng)性強(qiáng)、好管理，在我國(guó)中部、東部、西部地區(qū)均有栽培。石榴皮中含有很多具有營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和藥物價(jià)值的有效成分，如生理活性十分廣泛的黃酮類化合物、多元酚類化合物鞣質(zhì)、生物堿類有機(jī)化合物和一些酸性有機(jī)化合物的多種有效成分。黃酮類化合物的生理活性十分廣泛，具有抑菌、抗炎、降血壓等多種在醫(yī)學(xué)上十分重要的功能，特別是具有抗自由基、抗癌、防癌的作用，使得黃酮類化合物在醫(yī)學(xué)、保健食品、天然食品添加劑，特別是天然的抗氧化劑的研究和應(yīng)用上有著十分重要的地位。近年來，黃酮的需求量越來越大，不同的學(xué)者從很多類型的原材料上提取黃酮類化合物，但是已研究與開發(fā)的黃酮類產(chǎn)品仍屬極少數(shù)。黃酮類產(chǎn)品具有非常大的市場(chǎng)需求空間。超聲提取技術(shù)主要是利用超聲波的空化作用加速植物細(xì)胞中有效成分的溶出，超聲波提取具有省時(shí)、節(jié)能、提取率高等優(yōu)點(diǎn)，在工業(yè)生產(chǎn)上已經(jīng)有比較普遍的應(yīng)用。

四川的攀西會(huì)理地區(qū)，擁有十分豐富的石榴資源，當(dāng)?shù)鬲?dú)特的南亞氣候使該地區(qū)的石榴獨(dú)一無二。在對(duì)石榴進(jìn)行加工的同時(shí)，會(huì)留下大量的石榴皮。隨著會(huì)理石榴銷售量的日益增加，石榴副產(chǎn)物也在日益增加。這些遺留下來的石榴皮不僅造成了巨大的資源浪費(fèi)，而且給環(huán)境帶來嚴(yán)重威脅。本試驗(yàn)以四川會(huì)理石榴皮作為研究材料，采用超聲波輔助提取工藝，研究石榴皮中總黃酮的最佳提取工藝，以期為四川攀西地區(qū)石榴皮的精深加工提供理論依據(jù)。

二、材料與方法

1、材料與試劑

試驗(yàn)所用石榴采自四川會(huì)理。蘆丁化學(xué)對(duì)照品（標(biāo)準(zhǔn)品，成都瑞芬思生物科技有限公司）；亞硝酸鈉（分析純，成都市科龍化工試劑廠）；硝酸鋁（分析純，科龍化工試劑廠）；氫氧化鈉（分析純，成都市科龍化工試劑廠）。

2、儀器

電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司）；萬分之一電子天平；XL-10B500克密封型搖擺式粉碎機(jī)（廣州市旭朗機(jī)械設(shè)備有限公司）；KH3200V型超聲波清洗器（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）；TDL-6A離心機(jī)（上海菲恰爾分析儀器有限公司）；L2S可見光分光光度計(jì)（上海儀電分析儀器有限公司）。

3、試驗(yàn)材料的處理

將會(huì)理石榴手工剝皮，將皮切碎成小顆粒（約0.5×0.5×0.5cm大小），置于白色磁盤中鋪平，放入70℃的恒溫鼓風(fēng)干燥箱中干燥至全干。用超微粉碎機(jī)將石榴皮粉碎，過60目篩，將石榴皮細(xì)粉末裝入不透光的密封樣品袋中，存放在干燥器中待用。

4、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精確稱取蘆丁化學(xué)對(duì)照品20mg，用濃度為30%的乙醇溶液將其溶解、定容于50mL容量瓶中，充分搖勻，最終得到濃度為0.4mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，避光保存待用。

精確吸取上述配置好的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分別置于10mL試管中，分別加入30%乙醇至5mL，編號(hào)為1、2、3、4、5、6。再各加入5%的NaNO₂溶液0.3mL，混勻，無顏色變化，靜置6min，然后分別加入0.3mL10%的Al（NO₃）₃溶液，搖勻，靜置6min。再分別加入4%的NaOH溶液1mL，搖勻，顏色加深，最后用30%乙醇溶液稀釋至刻度，靜置20～25min，并于30min后在蘆丁的最大吸收峰510nm處測(cè)定光密度值。

5、黃酮類化合物的提取方法

精確稱取過篩后的會(huì)理石榴皮粉0.5000g于25mL比色管中，加入一定濃度的乙醇提取液，搖勻，密封。在一定溫度下（且需保持此溫度）進(jìn)行超聲波提取一段時(shí)間后取出。將超聲處理后的樣品靜置冷卻至室溫，然后進(jìn)行過濾，取濾液2mL于25mL比色管中，加入對(duì)應(yīng)乙醇溶液至10mL，加入5%NaNO2溶液0.6mL，搖勻后靜置6min，然后分別加入0.6mL的10%的Al（NO3）3溶液，搖勻后靜置6min后加入4%的NaOH溶液2mL，搖勻后用對(duì)應(yīng)乙醇溶液稀釋至20mL，靜置20～25min后，以5000r/min的速度離心8min后在510nm下測(cè)定其吸光值，以對(duì)應(yīng)乙醇溶液作為空白對(duì)照。

6、提取率的計(jì)算方法

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出蘆丁含量，按下式求出樣品中的黃酮含量。

式中：X—樣品總黃酮提取率；

m₁—被測(cè)溶液的總黃酮含量，mg；

m—試樣的質(zhì)量，g；

v₁—待測(cè)液分取的體積，mL；

v₂—待測(cè)液的總體積，mL；

注：結(jié)果精確至小數(shù)點(diǎn)后2位。

二、結(jié)果與分析

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線

按精確稱取蘆丁化學(xué)對(duì)照品20mg，用濃度為30%的乙醇溶液將其溶解、定容于50mL容量瓶中，充分搖勻，最終得到濃度為0.4mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，避光保存待用。按照這個(gè)的方法，繪制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1。運(yùn)用最小二乘法經(jīng)線性回歸，求出蘆丁濃度與吸光度值關(guān)系曲線的回歸方程y=0.1194x-0.0005，R²=0.9995，說明蘆丁在此范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2、不同乙醇濃度對(duì)石榴皮總黃酮提取率的影響
 

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