為探究水冬瓜根皮中的化學(xué)成分，本文基于HPLC-HESI-HRMS方法對(duì)水冬瓜根皮中化學(xué)成分進(jìn)行了分析與推測(cè)。采用ThermoFisher Hypersil GOLD aQ C18色譜柱(100 mm×2.1 mm,1.9 μm)，以0.1%甲酸水-乙腈(0.1%甲酸)為流動(dòng)相梯度洗脫，體積流量為0.3 mL·min-1，柱溫:40 ℃；質(zhì)譜使用HESI離子源，正離子和負(fù)離子模式下采集數(shù)據(jù)，質(zhì)量掃描范圍m/z:100~1500 Da，結(jié)合Compound Discoverer 3.0數(shù)據(jù)庫(kù)及相關(guān)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)分析水冬瓜根皮的主要化學(xué)成分。結(jié)果表明，通過(guò)高分辨質(zhì)譜正、負(fù)離子質(zhì)譜信息及相關(guān)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)對(duì)照，共推斷出36個(gè)化合物，包括10個(gè)有機(jī)酸類化合物，4個(gè)生物堿類化合物，1個(gè)氨基酸類化合物，2個(gè)苯丙素類化合物，2個(gè)酯類化合物，2個(gè)萜類化合物，2個(gè)芳香含氧衍生物類化合物，4個(gè)酰胺類化合物，9個(gè)其他類化合物。HPLC-HESI-HRMS方法為水冬瓜根皮藥材的質(zhì)量控制提供技術(shù)支持，為闡明水冬瓜根皮藥材的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供了有力的數(shù)據(jù)依據(jù)。

水冬瓜根皮來(lái)源于山茱萸科植物有齒鞘柄木Toricellia Angulata Oliv.var.intermedia (Harms) Hu的干燥根皮，別名大接骨丹。中華本草(苗藥卷)記載山茱萸科植物有齒鞘柄木Toricellia Angulata Oliv.var.intermedia (Harms) Hu來(lái)源于根、根皮、樹皮和葉，以根皮入藥，該藥材同時(shí)被諸多本草所收載。相關(guān)研究表明，大接骨丹藥材中主要含有β-谷甾醇、7-羥基-3-乙基苯酚、3β-甲氧基-豆甾-7-烯、谷甾烷、(E)-對(duì)甲基苯丙烯醛、豆甾-7-烯-3-醇、鄰,對(duì)-二甲氧基苯甲酸、β-胡蘿卜苷、熊果酸、正十八烷酸、二十二烷酸、7-羥基-6-甲氧基香豆素、硬脂酸、軟脂酸、syringo ylglycerol、2H-1-benzopyr-an-2-one、3,5-二甲氧基苯甲醛、9H-pyrano[2,3-f]-1,4-benzodio xin-9-one、7-羰基-β-胡蘿卜苷、10-griselinosidic acid、丁香樹脂酚、豆甾醇、3,4,5,7-四羥基-苯乙酸、豆甾-5,11-二烯-3β-醇、22,23-二氫豆甾醇、26,27-dinor-4,4-dimethyl-cholesta-8,14-dien-3-ol、4-羥基-3,5-二甲氧基苯甲醛、Griselinoside、紫丁香苷、Coniferin、Quercetin-3-O-glucoside、Astragalin、Phytol。

液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)，在快速推斷中藥、民族藥化學(xué)成分具有快速、科學(xué)、可靠、綠色等優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)，也被廣泛應(yīng)用于食品中農(nóng)殘快速檢測(cè)、水產(chǎn)品安全監(jiān)測(cè)、保健功能食品活性成分快速分析等。當(dāng)前，針對(duì)貴州特色民族藥水冬瓜根皮研究，除上述化學(xué)成分外，主要集中在生物活性、工藝優(yōu)化、近紅外快速檢測(cè)、質(zhì)量分析及指紋圖譜等，尚未針對(duì)水冬瓜根皮藥材化學(xué)成分LC-HRMS相關(guān)研究，因此，本試驗(yàn)擬以水冬瓜根皮藥材為研究樣本，采用HPLC-HESI-HRMS技術(shù)，對(duì)水冬瓜根皮藥材甲醇提取物中的主要化學(xué)成分進(jìn)行推斷分析，為闡明水冬瓜根皮的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供參考。

1材料與方法

1.1材料與儀器

乙腈(色譜純500 mL，西隴化工股份有限公司)，甲酸(AR500 mL，天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司)，甲醇(AR500 mL，重慶江川化工(集團(tuán))有限公司)，水為超純水(自制)，其他試劑均為分析純。水冬瓜根皮藥材自采于貴州省都勻市杉木湖溝渠(經(jīng)度:26°15′46.16″N；緯度:107°30′52.33″E，海拔807 m)，藥材經(jīng)筆者推斷出為山茱萸科植物有齒鞘柄木Toricellia Angulata Oliv.var.intermedia (Harms) Hu的根皮。

Thermo Scientific Q Exactive Focus高分辨Orbitrap質(zhì)譜儀(Thermo Fisher Scientific)，Dionex Ultimate 3000 RSLC液相儀(Thermo Fisher Scientific)，分析軟件:Compound Discoverer 3.0，Sartorius BT25S電子天平(十萬(wàn)分之一，德國(guó)塞多利斯公司)，烘箱(天津市泰斯特101-3AB型)，水浴鍋等。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 供試品溶液的制備

自采藥材烘箱60℃下烘干，粉碎機(jī)粉碎后過(guò)65目篩[篩孔平均內(nèi)經(jīng)(250±9.9)μm]，混勻，備用。稱取藥材粉末約0.5 g，精密稱定，置100 mL圓底燒瓶中，精密加入甲醇100 mL，回流提取1 h，放冷，過(guò)濾于100 mL量瓶中，用甲醇補(bǔ)足濾液至刻度，搖勻。濾液用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，即得。

1.2.2 液相檢測(cè)條件

色譜柱:ThermoFisher Hypersil GOLD aQ C18色譜柱(100 mm×2.1 mm,1.9 μm)，流速:0.3 mL.min-1，柱溫:40 ℃，進(jìn)樣量:5μL，采用梯度洗脫，流動(dòng)相B為0.1%甲酸水溶液，C相為乙腈(0.1%甲酸)，具體洗脫條件:0~2min:95%B；2~42min:95%~5% B；42~47min:5% B；47~47.1min:5%~95% B；47.1%~50min:95% B。

1.2.3 HRMS質(zhì)譜條件

采用熱電噴霧離子源(HESI)；掃描模式:正負(fù)離子模式同時(shí)采集Full MS-ddms2；質(zhì)量掃描范圍m/z :100Da~1500 Da；頻譜數(shù)據(jù)類型(Spectrum data type):Profile；數(shù)據(jù)分辨率(Resolution):Full MS: 70000；MS/MS: 17500；自動(dòng)增益控制數(shù)量(AGC target):Full MS:1e6，MS/MS:2e5；最小注入時(shí)間(Maximum IT):100 ms(Full MS)，50 ms(MS/MS)；循環(huán)計(jì)數(shù)(Loop count):3；MSX計(jì)數(shù)(MSX count):1；隔離寬度(Isolation width):1.5m/z；NCE(階梯NCE):20，40，60；最小AGC目標(biāo)(Minimum AGC target):8e3；強(qiáng)度閾值(Intensity Threshold):1.6e5；噴霧電壓:正離子3.0kV；負(fù)離子2.5 kV；鞘氣(sheath gas flow rate):35；輔助氣(aux gas flow rate):10；吹掃氣(sweep gas flow rate):0；離子傳輸管溫度(capillary temp):320℃。

1.3數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采集通過(guò)賽默飛世爾U3000UPL液相色譜串聯(lián)Q Exactive Focus Orbitrap高分辨質(zhì)譜儀，并采用Thermofish Scientific公司化合物分析軟件 Compound Discoverer 3.0進(jìn)行定性分析，通過(guò)軟件內(nèi)中藥材數(shù)據(jù)庫(kù)及mZcloud數(shù)據(jù)庫(kù)匹配可推測(cè)化合物的類型。

2結(jié)果與分析

2.1 LC-MS成分檢測(cè)
采用HPLC-HESI-HRMS對(duì)苗藥水冬瓜葉藥材中的化學(xué)成分進(jìn)行定性分析，(+)HESI-MS和(-)HESI-MS的質(zhì)譜總離子圖(TIC)見圖1。

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