目的

建立同時測定氫溴酸右美沙芬糖漿中主成分氫溴酸右美沙芬、雜質5-羥甲基糠醛及防腐劑苯甲酸、羥苯乙酯含量的高效液相色譜方法。

方法

色譜柱為PhenomenexLunaC18（250mm×4.6mm，5μm），流動相為甲醇-0.1mol·L-1磷酸二氫銨溶液，梯度洗脫，體積流量為1.0mL·min-1，柱溫為30℃，檢測波長為279nm，進樣體積為20μL。結果：氫溴酸右美沙芬、5-羥甲基糠醛、苯甲酸、羥苯乙酯的線性范圍分別為29.21～876.2、1.94～58.29、27.08～812.4、5.85～175.4μg·mL-1（r≥0.9997）。4種成分的平均加樣回收率分別為99.23%、98.86%、100.3%、98.51%，RSD分別為1.03%、1.52%、1.11%、1.64%（n=6）。

結論

該方法簡便、準確，可用于測定氫溴酸右美沙芬糖漿中氫溴酸右美沙芬、5-羥甲基糠醛、苯甲酸和羥苯乙酯的含量。

氫溴酸右美沙芬糖漿為中樞性鎮(zhèn)咳藥，可抑制延腦咳嗽中樞而產(chǎn)生鎮(zhèn)咳作用，長期服用無成癮性和耐受性。該藥現(xiàn)行質量標準為國家藥品標準WS1-（X-341）-2003Z，收載于《國家食品藥品監(jiān)督管理局國家藥品標準新藥轉正標準》（第45冊），該標準中只有主成分氫溴酸右美沙芬的含量測定，并未對雜質和防腐劑進行質量控制。

《中國藥典》2015年版四部規(guī)定糖漿劑中含蔗糖量應不低于45%，因此本品中含有高濃度的蔗糖，極易產(chǎn)生糖的降解雜質5-羥甲基糠醛（5-HMF）。5-HMF屬于2類遺傳毒性雜質，具有致突變性、致敏性和遺傳毒性等多種毒副作用。目前遺傳毒性雜質已成為藥品監(jiān)管機構、制藥企業(yè)和醫(yī)療機構關注的焦點。

氫溴酸右美沙芬糖漿處方中還含有防腐劑苯甲酸或羥苯乙酯，防腐劑雖能夠抑制微生物在糖漿劑中生長和繁殖，但過量攝入對人體也會有一定的毒性，尤其是兒童用藥，如苯甲酸會損害神經(jīng)系統(tǒng)、具有細胞毒性和致癌等。羥苯酯類影響男性生殖系統(tǒng)和誘發(fā)女性乳腺癌等，故有必要對氫溴酸右美沙芬糖漿中的降解雜質和防腐劑的含量進行質量控制。本研究建立HPLC法同時測定氫溴酸右美沙芬糖漿中的氫溴酸右美沙芬、5-羥甲基糠醛、苯甲酸和羥苯乙酯的含量，有利于提高本制劑的質量控制標準。

1儀器與藥品、試劑

1.1儀器

Waters2695高效液相色譜儀（含二極管陣列檢測器）；WatersEmpower色譜工作站；SartoriusBP211D型電子分析天平；KH-700DE型數(shù)控超聲波清洗器。

1.2藥品與試劑

氫溴酸右美沙芬、5-羥甲基糠醛、苯甲酸、羥苯乙酯對照品（純度分別為94.8%、99.2%、99.9%、99.9%，批號分別為100201-201204、111626-201912、100419-201703、100847-201604）；氫溴酸右美沙芬糖漿（廠家A，190202、190602、190802、200103，規(guī)格0.15%；廠家B，190205、190301、190411、190502，規(guī)格0.2%）；甲醇為色譜純；磷酸二氫銨、磷酸為分析純；水為超純水。

2方法與結果

2.1色譜條件

色譜柱：PhenomenexLunaC18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇（A）-0.1mol·L-1磷酸二氫銨溶液（取磷酸二氫銨11.5g，加磷酸1mL，用水稀釋至1000mL）（B）；梯度洗脫（0～10min，15%A；10～11min，15%A→50%A；11～26min，50%A；26～27min，50%A→15%A；27～35min，15%A）；檢測波長：279nm；柱溫：30℃；體積流量：1.0mL·min-1；進樣體積：20μL。

2.2溶液的配制

2.2.1混合對照品溶液

分別精密稱取氫溴酸右美沙芬、5-羥甲基糠醛、苯甲酸、羥苯乙酯對照品適量，用甲醇-水（1∶1）溶解配制成1.4604、0.09715、1.3540、0.2924mg·mL-1的混合對照品儲備液；精密量取該儲備液2mL，置10mL量瓶中，甲醇-水（1∶1）定容至刻度，搖勻，制成每毫升分別含上述成分0.2921、0.01943、0.2708、0.05848mg的混合對照品溶液。

2.2.2供試品溶液

精密量取供試品5mL，置25mL量瓶中，加甲醇-水（1∶1）適量，超聲處理10min，使溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過即得。

2.2.3陰性樣品溶液

以溶劑甲醇-水（1∶1）作為陰性樣品溶液。

2.3專屬性考察

取上述混合對照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，結果見圖1。

檢測表明，5-羥甲基糠醛、苯甲酸、氫溴酸右美沙芬、羥苯乙酯均能達到基線分離，待測成分色譜峰的理論塔板數(shù)均大于3000，各成分之間無干擾，證明該方法專屬性良好。

2.4線性關系考察

精密量取混合對照品儲備液0.2、0.5、1、2、4、6mL，分別用甲醇-水（1∶1）定容于10mL量瓶中，搖勻，即得系列混合對照品溶液。按“2.1”項的色譜條件對上述系列混合對照品溶液進行測定，并繪制出橫、縱坐標分別為質量濃度（μg·mL-1）和峰面積（Y）的標準曲線，得氫溴酸右美沙芬、5-羥甲基糠醛、苯甲酸和羥苯乙酯的回歸方程及線性范圍（n=6），分別為Y=6.6002×103X-2.2593×104（r=0.9998，29.21～876.2μg·mL-1）；Y=1.3768×105X-3.2880×104（r=0.9997，1.94～58.29μg·mL-1）；Y=7.3378×103X-1.8058×104（r=0.9998，27.08～812.4μg·mL-1）；Y=3.2497×104X-2.3063×104（r=0.9997，5.85～175.4μg·mL-1）。

2.5進樣精密度試驗

取混合對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積，結果氫溴酸右美沙芬、5-羥甲基糠醛、苯甲酸和羥苯乙酯峰面積的RSD分別為0.32%、0.46%、0.26%、0.37%，表明儀器精密度良好。

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