4、掃描電鏡形貌分析

用掃描電鏡觀察川木瓜多糖與羧甲基川木瓜多糖的外表形貌，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖6所示。a、b是川木瓜多糖放大5×10³倍和10⁴倍的形貌，c、d是羧甲基川木瓜多糖放大5×10³倍和10⁴倍的形貌。在相同的放大倍數(shù)下對(duì)比a、c及b、d，反應(yīng)前后呈現(xiàn)出不同的形貌。川木瓜多糖的外面光滑，表面基本無(wú)孔洞，而羧甲基川木瓜多糖外表疏松多孔，呈碎屑狀堆積，有明顯的溝槽結(jié)構(gòu)。上述結(jié)果表面羧甲基反應(yīng)改變了原多糖的形貌及結(jié)構(gòu)。

5、X-衍射分析

川木瓜多糖與羧甲基川木瓜多糖的X-衍射分析譜圖如圖7所示。從圖7可知川木瓜多糖與羧甲基川木瓜多糖均為衍射寬峰，無(wú)衍射銳峰，可以認(rèn)定二者皆為無(wú)定型的結(jié)構(gòu)。川木瓜多糖在衍射角為12^o和21^o分別有較大衍射強(qiáng)度，而羧甲基川木瓜多糖在衍射角為12^o處的衍射峰消失，只剩12^o處的衍射峰，這是因?yàn)轸燃谆氪竟隙嗵侵衅茐牧嗽嗵欠肿渔溨械臍滏I。

6、不同取代度羧甲基川木瓜多糖對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制作用

為了考察羧甲基川木瓜多糖對(duì)α-葡萄糖昔酶的抑制作用，從前面的單因素和正交試驗(yàn)中選取三組典型的呈梯度增長(zhǎng)的1～3號(hào)羧甲基多糖。1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)羧甲基川木瓜多糖的取代度分別為0.324、0.532、0.721。

不同取代度羧甲基川木瓜多糖對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制作用如圖8所示。從圖8可知，羧甲基川木瓜多糖對(duì)、阿卡波糖和原川木多糖均對(duì)α-葡萄糖苷酶有一定抑制作用，且抑制率隨濃度的增大而增強(qiáng)，即呈量效關(guān)系。1～3號(hào)羧甲基多糖對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制作用要強(qiáng)于原川木瓜多糖，說(shuō)明羧甲基化能增強(qiáng)其抑酶活性。與陽(yáng)性對(duì)照阿卡波糖相比，三種取代度的羧甲基多糖在低濃度范圍明顯弱于阿卡波糖，而中等取代度的多糖在濃度大于0.5mg·mL^-1后與阿卡波糖的抑制作用較接近。三種不同取代度的羧甲基多糖在濃度小于0.3mg·mL^-1時(shí)抑制作用沒(méi)有較大差異，當(dāng)濃度增大后中等取代度的羧甲基多糖有較好的抑制效果，而高取代度和低取代的抑制效果較相當(dāng)。取代度為0.532的羧甲基多糖當(dāng)濃度為0.9mg·mL^-1時(shí)抑制率可達(dá)88.6％。由試驗(yàn)結(jié)果可知，羧甲基川木瓜多糖的取代度對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制能力有一定的影響。多糖結(jié)構(gòu)復(fù)雜，取代度對(duì)分子的結(jié)構(gòu)產(chǎn)生了較大的影響，從而影響其抑制α-葡萄糖苷酶的活性，但取代度的大小也不是影響活性的唯一因素，可能與多種效應(yīng)有關(guān)。

三、結(jié)論與討論

臨床上常用的口服降血糖藥物主要有硫脲類(lèi)、雙胍類(lèi)、苯甲酸衍生物類(lèi)、噻唑烷二酮類(lèi)和葡萄糖苷酶抑制劑類(lèi)。α-葡萄糖苷酶抑制劑也已廣泛應(yīng)用于臨床，主要有奧利司他、阿卡波糖、拜糖平等，但此類(lèi)化學(xué)類(lèi)降糖藥物有一定副作用，因此尋找高效低副作用的口服α-葡萄糖苷酶抑制劑成為醫(yī)藥研究領(lǐng)域的一個(gè)重要方向。

本研究通過(guò)化學(xué)修飾制備得羧甲基木瓜多糖，以取代度為工藝指標(biāo)，通過(guò)單因素和正交試驗(yàn)優(yōu)化制備工藝，對(duì)羧甲基多糖分別進(jìn)行紅外光譜、掃描電鏡、x一衍射表征，再測(cè)試不同取代度的羧甲基川木瓜多糖對(duì)僅一葡萄糖苷酶的抑制作用。

試驗(yàn)結(jié)果表明，制備高取代度的羧甲基川木瓜多糖的最佳工藝條件為：NaOH濃度為4mol／L，氯乙酸用量為2g，反應(yīng)溫度為60℃、反應(yīng)時(shí)間3h，在該條件下取代度可達(dá)0.747。紅外光譜、掃描電鏡、X-衍射表征等表征手段均顯示川木瓜多糖已成功進(jìn)行了羧甲基化修飾。羧基甲基修飾后的川木瓜多糖對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制作用強(qiáng)于原多糖，中等取代度的羧甲基川木瓜多糖抑酶活性比低、高取代度的作用要強(qiáng)。由此可知，取代度對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制能力有一定的影響，但并未找到最佳抑酶活性的取代度。取代度可能對(duì)多糖分子鏈構(gòu)象、分子間距、分子量有較大影響，從而影響活性，其構(gòu)效關(guān)系有待研究。

后續(xù)研究可以酶活抑制率作為指標(biāo)，深入探討?hù)燃谆椒ā⑷〈鹊纫蛩貙?duì)抑制作用的影響，篩選出對(duì)α-葡萄糖苷酶具有較好抑制作用的羧甲基多糖。羧甲基川木瓜多糖對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制作用為體外試驗(yàn)，其降血糖活性還需要體內(nèi)降血糖模來(lái)一進(jìn)步驗(yàn)證。

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