1.2.4 前處理方法

采用固相萃取法。

1.2.4.1 溶油試劑種類及料液比

稱取0.5 g梔子油于燒杯中 ，分別加入5 mL正己烷、DMF、石油醚、氯仿，將油完全溶解。活化：分別連續(xù)用5 mL甲醇和5 mL正己烷過(guò)二醇基SPE小柱。上樣：將油溶液過(guò)柱，此時(shí)待測(cè)物保留在固相上。用5 mL正己烷潤(rùn)洗燒杯2次，并將潤(rùn)洗液過(guò)柱。

淋洗：先用6 mL正己烷分2次清洗，再用4 mL正己烷-乙酸乙酯（90：10）過(guò)柱。洗脫：最后用10 mL 100%的甲醇洗柱子。收集洗脫液，用甲醇定容到25 mL容量瓶中。分別取2 mL樣液，經(jīng)0.45 μm尼龍66濾膜過(guò)濾后，進(jìn)行液相分析。選擇好溶油試劑之后，再對(duì)料液比進(jìn)行優(yōu)化：分別加入2.5、5、7.5、10、12.5 mL的正己烷。

1.2.4.2 洗脫劑種類及濃度

固相萃取的洗脫劑種類選擇及洗脫劑濃度優(yōu)化方法，參照超聲輔助液液萃取中的萃取試劑種類及濃度方法進(jìn)行。

2 結(jié)果與討論

2.1 藏紅花酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線

準(zhǔn)確吸取藏紅花酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.05、0.1、0.2、0.5、1.0 mL于10 mL容量瓶中，用甲醇定容，混勻，過(guò)膜，10 μL進(jìn)樣，分別測(cè)定其在440 nm檢測(cè)波長(zhǎng)的峰面積。以藏紅花酸的濃度C為橫坐標(biāo)、該檢測(cè)波長(zhǎng)下測(cè)得的峰面積A為縱坐標(biāo)，獲得藏紅花酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，在上述濃度范圍內(nèi)線性良好，回歸方程y=115356x—26489，R2=0.9996，按S/N=3計(jì)算，得到檢出限為0.21 μg/mL，按S/N=10計(jì)算，得到定量限為0.7 μg/mL。

2.2 不同溶油試劑對(duì)提取梔子油中藏紅花酸的影響

首先，在預(yù)實(shí)驗(yàn)中，無(wú)論是超聲輔助液液萃取還是固相萃取都出現(xiàn)了一個(gè)共同現(xiàn)象，即石油醚和氯仿雖然都能溶油，但在液相檢測(cè)時(shí)沒(méi)有藏紅花酸的信號(hào)峰。正己烷、石油醚、氯仿以及DMF的極性排序?yàn)椋篋MF>氯仿>石油醚>正己烷。這表明溶油試劑極性的大小并不是決定梔子油中藏紅花酸提取效率的唯一因素，具體原因有待進(jìn)一步研究。因此選擇正己烷和DMF[18]進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。對(duì)超聲輔助液液萃取，正己烷和DMF都有溶油效果，結(jié)果如圖1所示，藏紅花酸的出峰時(shí)間都在14.1 min附近，峰形良好且與周圍雜峰都能較好分離。

此外，以DMF為溶油試劑得到的藏紅花酸的信號(hào)峰比用正己烷得到的更高。經(jīng)換算，用DMF溶解梔子油，檢測(cè)得到的藏紅花酸含量平均值為69.65 μg/g，比用正己烷為溶油試劑時(shí)獲得的平均值（60.67 μg/g）高出8.98 μg/g。因此，對(duì)超聲輔助液液萃取，DMF為最優(yōu)溶油試劑。

實(shí)驗(yàn)未對(duì)固相萃取SPE小柱的填料進(jìn)行優(yōu)化，而是直接選擇了二醇基SPE小柱。這是因?yàn)椋菏紫韧ㄟ^(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索不同SPE填料的檢測(cè)效果（C18、硅膠、二醇基），發(fā)現(xiàn)二醇基的檢測(cè)效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于其他材料。其次，通過(guò)查閱文獻(xiàn)，丁明等采用固相萃取測(cè)定茶油中總酚，比較不同的固相萃取小柱（C18、硅膠、弗羅里硅土以及二醇基），結(jié)果發(fā)現(xiàn)二醇基SPE小柱最好;羅凡等采用固相萃取/高效液相色譜法測(cè)定茶油中的多種天然酚類物質(zhì)，直接采用了二醇基SPE小柱。

而藏紅花酸和酚酸的性質(zhì)類似，均為極性化合物，猜測(cè)其SPE的最優(yōu)填料也為二醇基。綜合考慮，實(shí)驗(yàn)中未對(duì)固相萃取的填料類型進(jìn)行優(yōu)化，而是直接選用了最優(yōu)填料。對(duì)于固相萃取，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：以DMF為溶油試劑，在洗脫液中檢測(cè)不到藏紅花酸的信號(hào)峰;以正己烷為溶油試劑時(shí)，可以檢測(cè)到藏紅花酸。這是因?yàn)?，使用DMF為溶油試劑時(shí)，洗脫液的顏色幾乎為透明，二醇基填料由原本的白色變?yōu)辄S色，藏紅花酸為黃色，所以它被大量吸附在二醇基填料中，幾乎沒(méi)有被洗脫下來(lái)。

推測(cè)其原因，可能是由于二醇基和DMF的極性都很強(qiáng)，二者之間具有強(qiáng)烈的相互作用，經(jīng)過(guò)DMF溶解的梔子油，其中的藏紅花酸與二醇基的相互作用變強(qiáng)，以至于不能被甲醇洗脫下來(lái)，液相上檢測(cè)不到信號(hào)峰。因此，固相萃取選擇正己烷為溶油試劑。

2.3 料液比對(duì)提取梔子油中藏紅花酸的影響

超聲輔助液液萃取的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：隨DMF體積逐漸增加，溶液逐漸渾濁，7.5 mL及其以上的溶液清澈度很低，不具有透光性。DMF體積在12.5 mL時(shí)，溶液離心后不分層。因此，DMF體積為7.5、10 mL和12.5 mL的樣品不能進(jìn)行液相分析。對(duì)2.5 mL DMF和5 mL DMF的梔子油萃取物進(jìn)行液相分析，結(jié)果如圖2所示：5 mL DMF時(shí)藏紅花酸濃度平均值為69.65 μg/g，高于2.5 mL DMF時(shí)藏紅花酸濃度平均值為59.93 μg/g。因此，在超聲輔助液液萃取條件下，最優(yōu)料液比選擇0.5 g油：5 mL DMF。

如圖3所示，固相萃取的結(jié)果表明：當(dāng)料液比為油：正己烷=0.5 g：5 mL時(shí)，固相萃取得到藏紅花酸濃度最高，為61.27 μg/g。

聲明：本文所用圖片、文字來(lái)源《食品科技》，版權(quán)歸原作者所有。如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問(wèn)題，請(qǐng)與本網(wǎng)聯(lián)系刪除

相關(guān)鏈接：萃取，正己烷，石油醚