目的：建立HPLC法同時測定引陽索中五味子醇甲、五味子乙素的含量。方法：采用AgilentExtendC18(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱；以甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液為流動相，流速為1.1mL·min^-1；梯度洗脫；進樣量為10μL；檢測波長為250nm；柱溫為32℃。結(jié)果：五味子醇甲、五味子乙素的線性范圍分別為7.013～175.3mg·L^-1(r=0.9998，n=7)和7.040-176.0mg·L^-1(r=0.9998，n=7)；提取回收率：五味子醇甲96.05%(RSD=0.7%，n=6)，五味子乙素96.48%(RSD=0.9%，n=6)。結(jié)論：本法操作專屬性強、快速、簡便、結(jié)果準確，可用于引陽索的質(zhì)量控制。
引陽索收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準》中藥成方制劑第三冊，由淫羊藿浸膏與五味子浸膏按2∶1混合制成顆粒劑，具有補腎壯陽，生津功能，用于陽痿早泄，腰膝酸軟，津虧自汗，頭暈?zāi)垦５劝Y。現(xiàn)行標準中缺少對處方中五味子浸膏質(zhì)量控制的方法，譚文明和孟淑智先后報道了引陽索中五味子浸膏指標成分五味子甲素和五味子醇甲的TLC鑒別方法，目前尚未有引陽索中五味子浸膏指標成分五味子醇甲和五味子乙素含量測定的報道，本文建立了同時測定引陽索中五味子醇甲和五味子乙素的含量方法，本研究專屬性強，可用于引陽索中五味子浸膏的質(zhì)量控制。

1儀器

Waters2695高效液相色譜儀(包括工作站、自動進樣、柱溫箱、2998型二極管陣列檢測器美國Waters公司)，XPE205電子天平(METTLERTOLEDO公司)，超聲波清洗機(HT300功率：40KHZ濟寧恒通超聲電子設(shè)備)，超純水機(Milli-QAdvantageA10默克密理博公司)。

2材料

五味子醇甲對照品(批號110857-201010含量99.4%)、五味子甲素對照品(批號110764-201010含量99.6%)、五味子乙素對照品(批號110765-200710)均購自中國藥品生物制品檢定所，引陽索藥品3批(批號：20170704，20180604，20191103，市售)，淫羊藿(批號：1910001，安國市聚藥堂藥業(yè)有限公司)，超純水(自制)，其他試劑(色譜純，市售)。

3方法和結(jié)果

3.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：AgilentExtendC18柱(250mm×4.6mm，5μm)；流動相：甲醇(A)-乙腈(B)-0.1%磷酸溶液(C)，梯度洗脫：0～24min為35%～55%A，30%～30%B；24～27min為55%～35%A，30%～30%B；27～30min為35%～35%A，30%～30%B；檢測波長：250nm；流速：1.1mL·min^-1；進樣量：10μL；柱溫：32℃。五味子醇甲、五味子乙素與相鄰色譜峰的分離度均大于1.5，理論板數(shù)均不低于5000。

3.2溶液的制備

3.2.1對照儲備液

取P2O5干燥13h的五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素對照品，分別精密稱取14.11mg、16.62mg、14.08mg置20mL量瓶中，加甲醇適量，超聲使溶解，用甲醇稀釋至刻度，作為對照品儲備液(五味子醇甲701.3mg·L^-1，五味子甲素827.7mg·L^-1，五味子乙素704.0mg·L^-1)。分別精密量取1mL，置同一10mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，得混合對照品溶液。

3.2.2供試品溶液

取供試品5袋，精密稱重，研細，精密稱取5g(相當(dāng)于1袋)，置100mL具塞錐形瓶中，加體積分數(shù)75%甲醇溶液50mL，密塞，稱重，超聲提取30min；放置至室溫，稱定重量，用上述甲醇溶液補足減失重量，用0.45μm微孔濾膜過濾，備用。

3.2.3陰性對照溶液
按引陽索處方，不加五味子浸膏，按“3.2.2”條方法制備陰性對照溶液。按“3.1”條色譜條件進樣，記錄色譜圖見圖1。

3.3線性關(guān)系考察

依次精密量取五味子醇甲、五味子乙素對照品儲備液各0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL，分別置10mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，得不同濃度系列混合對照溶液。按“3.1”條色譜條件，進樣10μL，以峰面積(Y)對質(zhì)量濃度X(mg·L^-1)進行回歸分析，得：五味子醇甲回歸方程Y=2.062×104X-7.829×104(r=0.9998，n=7)，在7.013～175.3mg·L-1內(nèi)，五味子醇甲線性良好；五味子乙素回歸方程Y=1.543×104X-6.039×104(r=0.9998，n=7)，在7.040～176.0mg·L-1內(nèi)，五味子乙素線性良好。

3.4精密度試驗

取五味子醇甲、五味子乙素混合對照品儲備液，用0.45μm微孔濾膜濾過，按“3.1”條色譜條件，連續(xù)進樣5次，每次10μL，測得五味子醇甲峰面積分別為1386130、1413230、1416601、1409903、1398858，RSD為0.9%(n=5)；五味子乙素峰面積分別為1039735、1068231、1064348、1059376、1053065，RSD為1.1%(n=5)，結(jié)果表明儀器有良好的精密度。

3.5穩(wěn)定性試驗

取引陽索顆粒適量，按“3.2.2”條方法制備供試溶液，依次在0、2、6、10、18、24、48h，重復(fù)進樣，每次10μL，測得五味子醇甲峰面積分別為1439032、1428035、1419366、1418367、1421035、1416534、1403982，RSD為0.8%(n=7)；五味子乙素峰面積分別為505762、504927、506354、498756、492769、503262、491965，RSD為1.2%(n=7)，結(jié)果表明樣品在48h內(nèi)穩(wěn)定。

3.6重復(fù)性試驗

分別精密稱取同一批引陽索(批號20180604)5份，按“3.2.2”條方法制備供試溶液，測量五味子醇甲含量分別為3.63、3.68、3.67、3.69、3.64mg/袋，RSD為0.7%(n=5)，五味子乙素含量分別為1.82、1.81、1.79、1.83、1.84mg/袋，RSD為1.0%(n=5)，結(jié)果表明方法重復(fù)性良好。

3.7回收率試驗

分別精密稱取已知含量的引陽索(批號20180604)約2.5g，6份，分別置100mL錐形瓶中，分別精密加入對照溶液：五味子醇甲對照溶液(0.9165mg·mL^-1)、五味子乙素(0.9118mg·mL^-1)、各2.0、1.0mL，按“3.2.2”條方法制備供試溶液，進樣10μL，結(jié)果測得五味子醇甲、五味子乙素平均回收率分別為96.05%(RSD=0.7%，n=6)、96.48%(RSD=0.9%，n=6)，結(jié)果見表1。

3.8樣品含量測定
取引陽索10袋，按“3.2.2”條方法制備供試溶液，平行3份。按“3.2.1”條方法制備對照品溶液，按“3.1”條色譜條件，進樣10μL，用外標法測定3批引陽索樣品中五味子醇甲和五味子乙素的含量，結(jié)果見表2。

4討論

4.1測定波長的選擇

宣東平等報道了五味子醇甲和五味子乙素同時檢測的波長為254nm，《中國藥典》2015版五味子含量測定項下測定五味子醇甲的波長為250nm，綜合考慮被測物質(zhì)最大吸收波長、吸收強度，最終選定250nm作為檢測波長。

4.2流動相的選擇

流動相比較了甲醇-0.1%磷酸溶液(35：65)、乙腈-0.1%磷酸溶液(30：70)，發(fā)現(xiàn)被測成分可以達到基線分離，但五味子乙素保留時間超過60min，與楊立志等研究結(jié)果相同，最終選擇甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液三元系統(tǒng)為流動相，梯度洗脫，流動相通過引入乙腈縮短被測物質(zhì)保留時間，線性調(diào)整甲醇和0.1%磷酸溶液比例使3種木脂素與其他物質(zhì)有效分離，結(jié)果樣品中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素分離效果好，無雜質(zhì)干擾，且出峰快，保留時間分別為五味子醇甲5.18min、五味子甲素16.88min、五味子乙素20.35min。

4.3含量測定指標選擇

任偉光等報道了五味子醇甲、甲素、乙素是五味子中重要木脂素類化合物，有保護肝臟、中樞抑制、降糖、抗炎等藥理作用。馬瑩慧等報道了五味子醇甲、醇乙、酯甲、甲素、乙素為指標的含量分析方法，李寶等報道了五味子浸膏中五味子醇甲、甲素、乙素的含量測定方法，本研究發(fā)現(xiàn)引陽索樣品色譜圖中五味子甲素色譜峰峰面積較小，因此本文僅選擇了五味子醇甲和五味子乙素2個指標進行含量測定。五味子甲素色譜峰可作為特征峰之一，用于引陽索中五味子浸膏的定性鑒別。

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