二氫黃酮苷又名橙皮苷、柚皮苷，是一種黃酮類衍生物，其具有維持血管正常滲透壓、抗氧化、降血脂、抗炎、抗癌抗腫瘤等生理功效，在功能性食品、化妝品及醫(yī)藥等領(lǐng)域具有巨大的應(yīng)用價(jià)值；但是二氫黃酮苷難溶于水，這極大地限制了其應(yīng)用范圍。環(huán)糊精分子呈現(xiàn)出中空的錐形環(huán)狀結(jié)構(gòu)，具有外親水內(nèi)疏水的優(yōu)良特性，這主要?dú)w因于環(huán)糊精分子外部含有較多的極性羥基和內(nèi)部分子內(nèi)腔由于C-H鍵屏蔽而呈現(xiàn)出的疏水性。環(huán)糊精在食品領(lǐng)域有著廣泛地應(yīng)用，其可以作為主體分子包合疏水性客體分子，形成穩(wěn)態(tài)結(jié)構(gòu)，從而提高客體分子的溶解度和穩(wěn)定性等理化性質(zhì)，起到保護(hù)、穩(wěn)定藥物分子的作用。為了改善二氫黃酮苷的溶解性，提高其穩(wěn)定性及活性效率，擴(kuò)大二氫黃酮苷功效成分的使用范圍，制備不同用途的二氫黃酮苷功能性食品及藥品，本文采用相溶解度法研究了常用環(huán)糊精對(duì)二氫黃酮營的包合作用、增溶作用以及包合過程有關(guān)熱力學(xué)參數(shù)的變化，為二氫黃酮苷的開發(fā)利用及微膠囊化奠定基礎(chǔ)。

一、材料與方法

1、材料與試劑

二氫黃酮苷、α-環(huán)糊精(α-CD)、β-環(huán)糊精(β-CD)、)，γ-環(huán)糊精(γ-CD)、甲基-β-環(huán)糊精(M-β-CD)、2-羥丙基-β-環(huán)糊精(HP-β-CD)、麥芽糖基-β-環(huán)糊精(Mal-β-CD)，上海阿拉丁生化科技股份有限公司；羥乙基-β-環(huán)糊精(HE-β-CD)，上海源葉生物科技有限公司；甲醇，西隴科學(xué)股份有限公司，分析純。

2、儀器與設(shè)備

AL204電子分析天平：梅特勒一托利多儀器(上海)有限公司；UV-2600PC紫外/可見光分光亮度計(jì)：島津企業(yè)管理(中國)有限公司；QYC一200全溫培養(yǎng)搖床：上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司。

3、實(shí)驗(yàn)方法

（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

以甲醇做溶劑，配制濃度為100mg/L的二氫黃酮苷溶液作為儲(chǔ)備液，置于棕色試劑瓶中低溫下保存。分別吸取二氫黃酮苷儲(chǔ)備液0.4、0.6、0.8、1.0、2.0、3.0、5.0mL于7個(gè)10mL的比色管中，用甲醇定容至刻度，配制濃度為4～50mg/L的溶液。在波長284am處測定紫外吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

（2）不同環(huán)糊精濃度下的二氫黃酮苷的增溶試驗(yàn)

用蒸餾水做溶劑，分別配制濃度0、2、4、6、8mmol/L的7種環(huán)糊精溶液各5mL，加入過量的二氫黃酮苷于上述溶液中，分別在30℃、40℃、50℃避光條件下置于搖床中振搖48h，設(shè)置轉(zhuǎn)動(dòng)速度為200r/min，二氫黃酮苷溶解達(dá)平衡后，用孔徑為0.45μm的針筒過濾器過濾，將濾液稀釋一定倍數(shù)后測定284nm處的紫外吸光度，通過二氫黃酮苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線得出二氫黃酮苷的含量。

二、結(jié)果與分析

1、二氫黃酮苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線

按以甲醇做溶劑，配制濃度為100mg/L的二氫黃酮苷溶液作為儲(chǔ)備液，置于棕色試劑瓶中低溫下保存。分別吸取二氫黃酮苷儲(chǔ)備液0.4、0.6、0.8、1.0、2.0、3.0、5.0mL于7個(gè)10mL的比色管中，用甲醇定容至刻度，配制濃度為4～50mg/L的溶液。在波長284am處測定紫外吸光度，繪制二氫黃酮營的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示，由圖1可知，該標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程：y=0.0322x+0.0425，R²=0.9994；由此可推斷出在4～50mg/L濃度范圍內(nèi)，二氫黃酮苷的濃度與吸光度具有良好的線性關(guān)系。

2、相溶解度曲線

按用蒸餾水做溶劑，分別配制濃度0、2、4、6、8mmol/L的7種環(huán)糊精溶液各5mL，加入過量的二氫黃酮苷于上述溶液中，分別在30℃、40℃、50℃避光條件下置于搖床中振搖48h，設(shè)置轉(zhuǎn)動(dòng)速度為200r/min，二氫黃酮苷溶解達(dá)平衡后，用孔徑為0.45μm的針筒過濾器過濾，將濾液稀釋一定倍數(shù)后測定284nm處的紫外吸光度，通過二氫黃酮苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線得出二氫黃酮苷的含量。計(jì)算不同溫度下不同濃度環(huán)糊精溶液中的二氫黃酮苷含量，通過二氫黃酮苷與環(huán)糊精濃度的對(duì)應(yīng)關(guān)系，選擇合適的橫縱坐標(biāo)，繪制不同溫度下的相溶解度曲線，結(jié)果如圖2～4所示。當(dāng)不添加環(huán)糊精時(shí)，二氫黃酮苷在水中的溶解度很小。在30℃、40℃、50℃條件下二氫黃酮苷的溶解度均隨環(huán)糊精及其衍生物的濃度的增加而增加，這表明不同溫度下環(huán)糊精及其衍生物均增加了二氫黃酮苷在水中的溶解度，且增溶作用明顯。由圖2～4可知，甲基-β-糊精增溶效果最顯著，α-環(huán)糊精對(duì)二氫黃酮苷的溶解度影響很小，幾乎不起增溶效果；γ-環(huán)糊精、β-環(huán)糊精及其衍生物濃度與二氫黃酮苷溶解度之間呈現(xiàn)線性相關(guān)，說明二氫黃酮苷與這6種環(huán)糊精1:1進(jìn)行包合。

3、環(huán)糊精/二氫黃酮苷包合常數(shù)的測定

包合常數(shù)K是主客體相互作用中的重要參數(shù)，與包合物性質(zhì)密切相關(guān)，通過其數(shù)值可以判斷環(huán)糊精與難溶性物質(zhì)包合時(shí)相互作用力的大小，因此包合常數(shù)的測定在表征包合物性質(zhì)時(shí)具有十分重要的意義。通過AL型相溶解度圖得到的線性方程，結(jié)合K=斜率/[So×(1-斜率)](So：二氫黃酮苷在水中的固有溶解度)，可以計(jì)算出K值，結(jié)果見表1。

根據(jù)二氫黃酮苷在不同濃度下的包合常數(shù)K，結(jié)合方程：

可計(jì)算出熱力學(xué)參數(shù)△G。由方程式(1)和式(2)可得:

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