2、胰蛋白酶響應(yīng)面優(yōu)化設(shè)計(jì)

（1）響應(yīng)面設(shè)計(jì)及結(jié)果

響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果見表4，采用Des遠(yuǎn)nExpert8.0.6軟件對表4中數(shù)據(jù)進(jìn)行方差、顯著性分析，結(jié)果見表5。

以酶解時(shí)間、pH、溫度、加酶量為響應(yīng)變量，α-淀粉酶活性抑制率為響應(yīng)值，通過響應(yīng)面回歸方程分析可知，藜麥多肽液具有α-淀粉酶活性抑制率的多元二次擬合回歸方程為：

Y=44.09+2.53A一1.87B+4.39C+4.47D+1.86AB+1.61AC+7.67AD+9.20BC+1.90BD一4.19CD一9.11A²—12.84B²—1.78C²—9.79D²。

19CD一9.11A2—12.8482—1.78C2—9.79D2。

由表5可知，模型的P＜0.0001，表示模型回歸差異極顯著，失擬項(xiàng)P=0.8453＞0.05，不顯著，說明擬合程度良好，能真實(shí)反映實(shí)際情況，模型可靠；模型回歸決定系數(shù)R²=0.9728＞0.9，說明α-淀粉酶活性抑制率結(jié)果與方程預(yù)測結(jié)果具有一致性，模型相關(guān)度好。試驗(yàn)?zāi)Ｐ托Ｕ禂?shù)R_Adj²=0.9457，表明模型擬合程度較高。說明有94.57％試驗(yàn)結(jié)果值可以用此模型來解釋，因此結(jié)果可靠，模型可以對α-淀粉酶活性抑制率值進(jìn)行分析和預(yù)測。由回歸方程式中一次項(xiàng)系數(shù)可知，各因素對α-淀粉酶活性抑制率作用大小順序?yàn)?；加酶?D)＞溫度(C)＞酶解時(shí)問(A)＞pH(B)。

（2）響應(yīng)面分析與條件優(yōu)化

響應(yīng)面曲線分析，各因素問等高線圖和交互作用見圖6。

由圖6可知，pH與時(shí)間、溫度與pH、加酶量與溫度交互作用的顯著性與表5中交互項(xiàng)P值的分析結(jié)果一致。a，c，e均呈橢圓形，表明因素問交互作用顯著，等高線的形狀可以判斷交互作用的強(qiáng)弱，3組等高線圖中加酶量與溫度交互作用最好，等高線中的曲線圍繞著響應(yīng)面在中問處形成頂點(diǎn)，即抑制率最大值。a，c，e響應(yīng)面圖開口都朝下，隨著每個(gè)因素值的增加而響應(yīng)值增大，在達(dá)到響應(yīng)值最高點(diǎn)后，隨著因素值的增大而響應(yīng)值減小，響應(yīng)面的頂點(diǎn)即為最大響應(yīng)值。

經(jīng)DesignExpert8.0.6軟件分析得到優(yōu)化條件為：酶解時(shí)間2.22h、pH8.95、溫度60℃、加酶量0.53×10⁴U／g，在此條件下，曠淀粉酶活性抑制率的理論最大值為47.82％，采用這一結(jié)果并結(jié)合實(shí)際條件，將酶解條件改為：酶解時(shí)間2h、pH9.0、溫度60℃、加酶量0.5×10⁴U／g，得到的試驗(yàn)結(jié)果為45.54％，與理論預(yù)測值基本一致，建立的模型可以較好地反映藜麥多肽液具有抑制α-淀粉酶活性的能力，同時(shí)多肽得率為63.54％。

三、結(jié)論

以藜麥蛋白為試驗(yàn)材料，研究酶解后的多肽對α-淀粉酶活性的抑制率，篩選出最適用酶。在單因素酶解條件下，選擇酶解時(shí)間、pH、溫度、加酶量進(jìn)行Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)，優(yōu)化結(jié)果顯示：加酶量和酶解溫度對α-淀粉酶活性的抑制作用比pH和酶解時(shí)間要強(qiáng)。試驗(yàn)結(jié)果表明：制備藜麥多肽的最佳提取工藝為：酶解時(shí)問2h、pH9、溫度60℃、加酶量0.5×10⁴U／g，在此條件下α-淀粉酶活性抑制率為45.54％。為了提高多肽液對α-淀粉酶的活性抑制作用，還需對酶解多肽液進(jìn)行進(jìn)一步的純化處理。

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