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近日,中科院大連化學(xué)物理研究所與中國疾病預(yù)防控制中心營養(yǎng)所合作,開發(fā)了一種新的液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用方法用于人乳寡糖高通量絕對定量分析,并應(yīng)用此方法開展了不同民族的人乳寡糖分析。相關(guān)研究成果發(fā)表于《食品化學(xué)》期刊。
母乳對嬰兒的生長發(fā)育有著作用,不僅提供了必要的營養(yǎng)物質(zhì),還能幫助嬰兒完善免疫系統(tǒng),建立健康的腸道菌群。人乳寡糖(HMOs)是母乳中的重要成分,僅次于脂質(zhì)和乳糖,在嬰兒腸道菌群和免疫屏障的建立中發(fā)揮著重要作用,此外還能夠促進嬰兒腦發(fā)育、抵抗病毒侵染等。因此人乳寡糖受到越來越多的關(guān)注,尤其是在嬰兒配方食品的研發(fā)生產(chǎn)中。
但是人乳寡糖結(jié)構(gòu)復(fù)雜,存在組成變化、序列變化和多種連接異構(gòu)體,不同個體的人乳寡糖種類和含量差異很大。因此對包括多種異構(gòu)結(jié)構(gòu)的復(fù)雜人乳寡糖進行絕對定量的高通量方法很重要,也非常具有挑戰(zhàn)性。
研究團隊在此前已經(jīng)利用在線前處理-液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用方法成功表征了人乳和動物乳中寡糖的差異性,并且通過排斥親水作用色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法實現(xiàn)了不同血型母親母乳中寡糖差異性的分析。但是上述方法不能進行高通量檢測,因而無法開展大規(guī)模調(diào)查。
為實現(xiàn)大規(guī)模的人乳寡糖表達情況調(diào)查,研究團隊在已有方法的基礎(chǔ)上,將超高效親水相互作用液相色譜與碰撞誘導(dǎo)解離二級質(zhì)譜相結(jié)合,發(fā)展出新的分析方法。超高效親水相互作用液相色譜具有高效的空間分辨能力,而碰撞誘導(dǎo)解離二級質(zhì)譜可以進行可靠的結(jié)構(gòu)識別,再加上質(zhì)譜多反應(yīng)檢測的掃描模式,研究團隊成功實現(xiàn)了人乳寡糖的高通量絕對定量分析,定量分析人乳中23種高含量代表性的寡糖用時不到15分鐘。
研究團隊利用這種方法分析了來自中國4個不同地理區(qū)域的5個不同種族的251名母親的母乳樣品中的寡糖成分,并研究了這251名母親的分泌狀態(tài)和Lewis血型表型。研究發(fā)現(xiàn),不同民族在寡糖的種類和含量差異性較大。
該項研究為人乳寡糖的大規(guī)模群體研究提供了新的方法,有利于更深入地了解不同地理區(qū)域、不同種族之間人群的人乳寡糖差異性。
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為進一步分析殼寡糖抗腫瘤活性及其機制,采用酶法制備工藝獲取組分清晰的殼寡糖,化酶解條件為酶解時間4h、加酶量120U/g,結(jié)合乙醇沉淀、超濾和納濾聯(lián)用的工藝獲得聚合2~4的殼寡糖。比較評價殼寡糖及其與阿霉素聯(lián)用對3種腫瘤細胞的抑制效果,其中作用最明顯的人乳腺癌MDA-MB-231的細胞生存率降低20%。利用細胞遷移實驗和激光共聚焦分析機制,得出殼寡糖可抑制MDA-MB-231細胞遷移并促進阿霉素入核。
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