2.2食品樣品中測(cè)量OPEs的凈化技術(shù)

在食品基質(zhì)中痕量分析有機(jī)污染物殘留時(shí)，常伴隨脂質(zhì)以及其他有機(jī)物的干擾，為消除該干擾通常采用強(qiáng)酸或強(qiáng)堿對(duì)樣品進(jìn)行處理，但OPEs在強(qiáng)酸堿條件下易降解，因此儀器分析之前采用合適的凈化方法成為必須。對(duì)食品基質(zhì)提取液中OPEs凈化時(shí)，常用Florisil、Al2O3、C18為填料的SPE柱，其中Florisil易從非極性基質(zhì)中吸附極性化合物，Al2O3具相對(duì)溫和的去脂能力，而C18對(duì)非極性和中等極性的組分均具有吸附作用。Santín等采用LC-MS/MS分析測(cè)定魚(yú)肉中16種OPEs，考察了5gFlorisil、中性Al2O3、堿性Al2O3分別與2gC18混合制備SPE柱的凈化效果，結(jié)果表明，5g堿性Al2O3和2gC18回收率為48%~113%，RSD<10%，而中性Al2O3和C18、Florisil和C18，回收率分別為23%~120%和1.6%~101%。Zhang等對(duì)常用的固體和液體食品分別進(jìn)行MAE和UAE提取，均通過(guò)4gFlorisil、4g中性硅膠和2g無(wú)水硫酸鈉為填料的SPE柱凈化，選用甲醇和正己烷分別對(duì)所制備的SPE進(jìn)行淋洗，上樣后用丙酮-乙酸乙酯(3∶7，v/v)洗脫，提取液經(jīng)氮吹丙酮復(fù)溶后進(jìn)行GC-MS/MS檢測(cè)，分析測(cè)定6種OPEs，獲得滿(mǎn)意回收率。

也有報(bào)道采用SPE技術(shù)結(jié)合d-SPE或GPC凈化技術(shù)，最大程度去除脂質(zhì)及其他物質(zhì)的干擾。Liu等選用傳統(tǒng)的索氏技術(shù)提取后，將提取液分別經(jīng)過(guò)OasisHLBSPE柱以及Z-Sep和C18混合分散固相萃取吸附劑進(jìn)行兩步凈化，采用GC-MS對(duì)魚(yú)肉中12種OPEs進(jìn)行測(cè)定，檢出限為0.004~0.059ng/g，回收率為56%~108%。Xu等將多種肉類(lèi)食品提取液分別通過(guò)FlorisilSPE柱、C18和Z-Sep混合分散固相萃取吸附劑、丙氨基SPE柱多步凈化，有效去除脂質(zhì)，降低了基質(zhì)效應(yīng)。采用GC-MS測(cè)定肉類(lèi)樣品中OPEs，定量限為1.400~3.700ng/g，平均RSD值為7%。Ma等利用GC-MS方法測(cè)定家禽類(lèi)食品中14種OPEs，通過(guò)MAE提取，將SPE和GPC凈化技術(shù)相結(jié)合，有效去除脂質(zhì)并降低了共萃取物的干擾。方法檢出限為0.006~0.021ng/g，回收率為70%~111%，重現(xiàn)性良好。

3分離與檢測(cè)技術(shù)

選擇合適的分離和檢測(cè)方法，可以降低相互干擾和基質(zhì)效應(yīng)，進(jìn)而提高檢測(cè)靈敏度和選擇性，實(shí)現(xiàn)食品中痕量OPEs的測(cè)定。以GC、LC為基礎(chǔ)的色譜分離、質(zhì)譜及選擇性檢測(cè)器在食品中OPEs檢測(cè)中均有應(yīng)用，如氣相色譜-電子轟擊源/化學(xué)電離源/負(fù)電子捕獲電離源-質(zhì)譜(GC-EI/CI/ENCI-MS)、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜、氣相色譜-高分辨質(zhì)譜(GC-HRMS)、液相色譜-電噴霧電離源/大氣壓化學(xué)電離源-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-ESI/APCI-MS/MS)、超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜(UPLC-HRMS)、氣相色譜-氮磷檢測(cè)器以及氣相色譜-火焰光度檢測(cè)器(GC-FPD)等。相關(guān)信息見(jiàn)表2，其中氣相色譜-質(zhì)譜應(yīng)用更為普遍，其方法檢出限和定量限相對(duì)于液相色譜-質(zhì)譜低1~2個(gè)數(shù)量級(jí)。

3.1氣相色譜法

由于大部分OPEs具有一定揮發(fā)性，因此GC最常用，鑒于化合物具有較寬的極性和沸點(diǎn)范圍，(5%苯基)-甲基聚硅氧烷(DB-5MS)作為通用型色譜柱應(yīng)用最廣，柱長(zhǎng)從15~30m不等，常用規(guī)格為30m×0.25mm×0.25μm。Rodriguez等比較了相同規(guī)格(30m×0.25mm×0.25μm)的DB-5以及14%氰基-苯基-甲基-聚硅氧烷(SPB-1701)色譜柱對(duì)OPEs分離的影響。結(jié)果表明，SPB-1701色譜柱對(duì)互為同分異構(gòu)體的TCPP和TCIPP分離效果較差，DB-5色譜柱分離TBOEP和TPHP受溫度影響大導(dǎo)致選擇性較差。通過(guò)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，確定起始溫度在50℃保持1min，以15℃/min升至260℃保持10min，進(jìn)樣量1μL，不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣口和檢測(cè)器溫度分別為270℃和320℃，使用GC-NPD對(duì)水樣中OPEs分析測(cè)定。方法檢出限為4μg/mL，線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)為0.9970，RSD為2%~3%。

使用GC-MS測(cè)定OPEs時(shí)，常用EI源、CI源、ECNI源。其中EI源具有較高的電離效率，通過(guò)豐富的碎片離子以及較完善的譜圖庫(kù)，利于結(jié)構(gòu)鑒定。Gustavsson等比較了GC-EI-MS、GC-CI-MS、GC-EI-MS/MS3種檢測(cè)方法，GC-EI-MS對(duì)OPEs定性選擇能力較強(qiáng)。Ma和Hites等比較了EI源、ECNI源、正化學(xué)電離(PCI)源3種電離源對(duì)13種OPEs裂解規(guī)律、定量及定性能力。結(jié)果表明，根據(jù)化合物結(jié)構(gòu)，EI源主要產(chǎn)生H4PO+4、[M-Cl]+、[M-CH2Cl]+或[M]+離子碎片;ECNI源通常生成碎片[M-R]-;PCI源主要產(chǎn)生質(zhì)子化的分子離子碎片[M+H]+。當(dāng)選用EI源作電離源時(shí)應(yīng)注意，對(duì)于大多烷基類(lèi)和鹵化類(lèi)的OPEs均會(huì)生成m/z99的質(zhì)子化磷酸基團(tuán)H4PO+4，該基團(tuán)沒(méi)有保留任何OPEs斷裂丟失基團(tuán)的信息，選該基團(tuán)作為定量離子時(shí)同位素稀釋質(zhì)譜法將不再適用。因此在定量分析時(shí)，應(yīng)盡量選取m/z99以外的其他特征離子，這也使得分析測(cè)定OPEs具有一定難度。

在分析基質(zhì)復(fù)雜的食品時(shí)，GC-MS/MS相對(duì)于GC-MS表現(xiàn)出更好的選擇性、準(zhǔn)確度以及更低的定量限。Poma等利用QuEChERS結(jié)合SPE前處理方法和GC-EI-MS/MS檢測(cè)技術(shù)，以TCEP-d12、TDCIPP-d15、TPHP-d15作為內(nèi)標(biāo)，測(cè)定雞蛋、魚(yú)肉、谷物、土豆等多種食品中14種OPEs，方法的定量限達(dá)到0.001~61.970ng/g，并表現(xiàn)出較好的回收率。Liu等等使用索氏提取，OasisHLBSPE柱和Z-Sep-C18(質(zhì)量比1∶1)多步凈化，以TnPP-d21、TnBP-d27、TCPP-d18、TPHP-d15為內(nèi)標(biāo)，GC-EI-MS/MS同時(shí)測(cè)定魚(yú)肉中12種OPEs，檢出限為0.005~0.810ng/g。

3.2液相色譜法

LC-MS/MS測(cè)定沸點(diǎn)高、不易揮發(fā)、相對(duì)分子質(zhì)量大的OPEs具有較高的靈敏度，但卻常伴隨基質(zhì)效應(yīng)以及分離困難等不足。LC分離OPEs通常選用C18或C8為固定相色譜柱(UPLCBEHC18、LunaC8、WatersXteraC18等)，甲酸水溶液、甲醇、乙腈或其混合溶液作為梯度洗脫流動(dòng)相，大多選用正離子模式、電噴霧電離(ESI+)源，并結(jié)合多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式進(jìn)行信息采集。

Ding等采用QuEChERS前處理方法，以WatersBEHC18柱(100mm×2.1mm，1.7μm)作分析柱，0.1%甲酸水溶液和乙腈溶液作流動(dòng)相，UPLC-MS/MS(ESI+)方法測(cè)定了蔬菜、牛奶、谷物等食品中10種OPEs，方法檢出限為0.020~0.240ng/g，定量限為0.050~0.420ng/g，回收率為73%~106%;OPEs在食品中總含量為1.100~9.600ng/g，谷物中OPEs的殘留量相對(duì)較高，其中TEHP含量最高。Tokumura等比較了GC-EI-MS、GC-NCI-MS、LC-ESI-MS/MS、LC-APCI-MS/MS4種檢測(cè)技術(shù)分析14種OPEs純品，研究發(fā)現(xiàn)LC-ESI-MS/MS和LC-APCI-MS/MS(0.810~970pg)的定量限比GC-EI-MS和GC-NCI-MS(2.300~3900pg)低1~2個(gè)數(shù)量級(jí)。Chen等利用LC-ESI-MS/MS測(cè)定了鯡鷗蛋中12種OPEs，優(yōu)化條件下基質(zhì)效應(yīng)為86%~99%，定量限為0.060~0.200ng/g。Han等分析肉類(lèi)和魚(yú)類(lèi)樣品，GC-MS/MS和UPLC-MS/MS分別測(cè)定8種和14種OPEs化合物。除TiBP和TnPP外，GC-MS/MS定量限更低;兩種方法測(cè)定大多OPEs的基質(zhì)效應(yīng)均在±20%范圍內(nèi)，但UPLC-MS/MS測(cè)定鮭魚(yú)中OPEs時(shí)，基質(zhì)抑制效應(yīng)明顯，為40%~79%。

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