3、單體化合物的結(jié)構(gòu)鑒定結(jié)果與分析

陳皮乙酸乙酯提取物經(jīng)柱層析分為三個極性洗脫物，其中石油醚：乙酸乙酯=1∶1的洗脫物和乙酸乙酯洗脫物經(jīng)制備薄層層析法各得到三個主要化合物，而抗氧化作用較強且含量較高的化合物1為淡黃色結(jié)晶狀粉末，熔點為151.7℃～153.4℃，高效液相色譜圖(HPLC圖，見圖7)結(jié)果顯示其純度較好。
 

該化合物的紅外光譜圖(IR圖，見圖8)顯示其母體結(jié)構(gòu)為黃酮。

該化合物的高分辨質(zhì)譜(HR—MS圖，見圖9)顯示其[M+H]+為373.1262。

該化合物的核磁共振譜(NMR圖)見圖10，其中a圖為核磁共振氫譜圖，b圖為核磁共振碳譜圖。從圖10中的a圖可以看出該化合物中共有20個氫原子，其中化學位移值為7.92、7.90、7.05、7.04處各有1個氫，為苯環(huán)上的氫；化學位移值為6.60處有1個氫，為雙鍵上的氫；化學位移值為4.08、3.99、3.91、3.87、3.86處各有3個氫，為甲氧基上的氫。從b圖可以看出該化合物共有20個碳原子，化學位移值為164.27、1 63.72、1 53.28、149.35、149.1 3、145.60、139.65、129.04(3C)、124.51、115.67(3C)、115.40、62.64、62.59、62.20、62.15、56.06。
 

質(zhì)譜結(jié)合核磁共振譜可以看出該化合物的分子式應為C20H20O7，經(jīng)過與文獻對照，可以確定該化合物為5，6，7，8，4’-五甲氧基黃酮，結(jié)構(gòu)見圖11。
 

三、結(jié)論

目前抗氧化實驗中，多數(shù)文獻是先提取再分離，然后測試活性，這種研究過程實驗量大、周期長、所耗試劑多、針對性較差，實驗效果不明顯。本研究以清除DPPH自由基活性實驗、亞油酸過氧化抑制實驗、卵黃脂蛋白脂質(zhì)過氧化抑制實驗和大豆油氧化抑制實驗作為抗氧化模型，遞進篩選活性部位，逐步縮小活性范圍，得到陳皮中抗油脂氧化作用較好的單體化合物。結(jié)果表明陳皮乙酸乙酯提取物和無水乙醇提取物對DPPH清除作用較顯著，且清除率與濃度呈量效關(guān)系；將這兩種提取物分別經(jīng)柱層析分為三個洗脫部分后，由乙酸乙酯提取物所得到的三個部分對DPPH自由基的清除作用較強，并且對亞油酸過氧化具有抑制作用；這兩種洗脫物經(jīng)制備薄層層析法各得到三個主要化合物，由洗脫物1所得到的2個化合物及洗脫物3所得到的1個化合物對亞油酸過氧化抑制作用比其它化合物強，并且對卵黃脂蛋白脂質(zhì)過氧化具有抑制作用；該化合物對DPPH、亞油酸過氧化、卵黃脂質(zhì)過氧化及食用油氧化均表現(xiàn)出較顯著的抑制效果，并與濃度呈較好的量效關(guān)系，當濃度為2.00mg／mL時，對DPPH自由基的清除率為72.36％，對亞油酸過氧化的抑制率為56.12％，對卵黃脂蛋白過氧化的清除率為49.21％，對大豆油氧化的抑制率為42.54％。該化合物經(jīng)IR、NMR和MS等儀器分析方法鑒定為5，6，7，8，4’-五甲氧基黃酮。該化合物具有較好的抗油脂氧化活性，有望作為食品抗氧化劑應用于油脂工業(yè)中。將抗氧化活性較好的單體化合物添加到油脂中，不僅可以延緩油脂氧化，還可以提高油脂的營養(yǎng)價值，在人體內(nèi)發(fā)揮多種生理功能，降低疾病風險，具有非常廣闊的應用前景。

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