收集液使用旋轉蒸發(fā)儀濃縮至盡干，氮氣吹干，用2mL 88％乙腈水溶液準確定容，超聲溶解，樣品液使用一次性注射器過0.22μm濾膜，裝小瓶進樣檢測。

（3）葡萄籽提取物和綠咖啡豆提取物

精確稱取0.3～0.59樣品(精確至0.00019)于10mL試管中，依次加入3mL超純水和0.5mL色譜純乙醇溶液，渦旋、超聲使其溶解，再加入2mL色譜純正己烷，渦旋混勻。在4000r／min、15℃條件下離心5min。

綠咖啡豆提取物用移液槍將上層正己烷轉移至圓底燒瓶中，葡萄籽提取物用60℃～80℃水浴加熱溶液，使正己烷層溶解，再用移液槍將上層正己烷轉移至圓底燒瓶中，用正己烷重復萃取1次，合并正己烷溶液。氮氣將正己烷吹干，用2mL88％乙腈水溶液準確定容，超聲溶解，樣品液使用一次性注射器過0.22μm濾膜，裝小瓶進樣檢測。

（4）姜黃提取物

精確稱取0.4～0.59姜黃素樣品(精確至0.000lg)于10mL試管中，用5mL丙酮溶液渦旋提取2min后，用1mL移液槍將上清液轉移至100mL圓底燒瓶中，再用5mL丙酮渦旋提取1min，用1mL移液槍將上清液轉移至100mL圓底燒瓶中，旋轉蒸發(fā)儀濃縮至盡干，氮氣吹干，3mL正己烷和0.5mL丙酮溶解，樣品液待凈化。

依次用5mL二氯甲烷、5mL正己烷活化SPE小柱；將待凈化液加入SPE小柱，再用2mL正己烷蕩洗圓底燒瓶后繼續(xù)加入；用3mL正己烷淋洗，待淋洗液流完之后繼續(xù)加人3mL正己烷淋洗；用10mL二氯甲烷洗脫。

收集洗脫液，旋轉蒸發(fā)儀濃縮至近干，氮氣吹干，用2mL 88％乙腈水溶液準確定容，超聲溶解，樣品液使用一次性注射器過0.22μm濾膜，裝小瓶進樣檢測。

5、標準溶液配制

（1）多環(huán)芳烴標準儲備液配制

將多環(huán)芳烴標準品配制成濃度約為40mg/kg的標準儲備液，—20℃冷凍保存，有效期3年。

（2）多環(huán)芳烴標準工作溶液配制

通過多次稀釋將多環(huán)芳烴標準儲備液稀釋成濃度約為1.6μg／kg的標準工作液，冷藏保存，有效期1年。

6、結果計算

分別檢測標準工作液、樣品液和空白試樣溶液，積分記錄峰面積，采用外標單點定量法，計算得到樣品中四種多環(huán)芳烴的含量，計算結果保留到小數(shù)點后兩位。

二、結果與分析

1、儀器方法建立和優(yōu)化

參照《GB 5009．265—2016食品安全國家標準食品中多環(huán)芳烴的測定》中液相色譜條件，通過多波長掃描方式確定四種目標成分最大吸收波長，并運行檢測多環(huán)芳烴標準品溶液和樣品溶液，確定色譜分離效果。結果表明：國標方法梯度洗脫程序能滿足四種多環(huán)芳烴成分分離的要求，但各組分的檢測波長未達到最優(yōu)，因此對四種多環(huán)芳烴檢測波長進行了優(yōu)化，最終能夠實現(xiàn)在滿足分離效果的前提下，提高靈敏度。流動相梯度條件如表1所示時，4種多環(huán)芳烴標準溶液色譜圖，見圖1，標準品成分及保留時間見表2。因此色譜柱

Agilent Eclipse PAH C18(4.6×250mm，5μm)；柱溫：40℃；檢測波長：?：激發(fā)波長270nm，發(fā)射波長385m；苯并(b)熒蒽、苯并(a)蒽、苯并(a)芘：激發(fā)波長288nm，發(fā)射波長430nm；進樣量：100μL；流速：1.5mL／min；運行時間：40min；流動相A：水；流動相B：乙腈。使用表1所示的流動相梯度條件。

2、線性關系,檢出限和定量限

按照1.5配制成系列標準工作溶液，按照1.3所述條件進行檢測。用分析物峰面積對被測組分的濃度作圖，結果見表2。由表2可知，4種多環(huán)芳烴在0.0lμg/kg～8.0μg/kg范圍內呈良好線性關系，相關系數(shù)R²為1.0000。

以3倍和10倍的信噪比(S/N)分別確定了儀器方法的檢出限(LODs)和定量限(LOQs)，結果列于表3。4種多環(huán)芳烴的儀器方法定量限為0.04μg/kg。

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