高效液相色譜以其靈敏、快捷、可分離大多數(shù)液體樣品等優(yōu)點，廣泛應(yīng)用于中藥有效成分含量測定、組分分析、指紋圖譜等方面。紫外檢測器（UV）具有高靈敏度和穩(wěn)定性，因此高效液相色譜中應(yīng)用較為廣泛，但是對于沒有紫外吸收或紫外末端吸收的有機化合物，其無法檢測。蒸發(fā)光散射檢測器（ELSD）彌補了上述紫外檢測器的不足，顯示出極大的優(yōu)越性。2020年版《中國藥典》已經(jīng)在黃芪、四季青、酸棗仁、山銀花等20種中藥材的含量測定項目中使用蒸發(fā)光散射檢測器。

北沙參是傘形科植物珊瑚菜（GlehnialittoralisFr.SchmidtexMiq.）的干燥根，為常用中藥，可緩解口燥咽干、肺熱咳嗽等病癥，其主要化學成分為糖類、香豆素類、磷脂、生物堿、氨基酸、揮發(fā)油、微量元素等。有研究表明，北沙參中的糖類成分含量最高，具有較好的抗腫瘤、抗氧化以及免疫調(diào)節(jié)活性。因此對北沙參中糖類成分進行測定，可以有效評價北沙參的質(zhì)量，保證臨床用藥有效性。中藥指紋圖譜是一種綜合的、可量化的鑒定手段，可從整體上鑒別評價中藥材及中藥制劑半成品質(zhì)量的真實性、優(yōu)良性、穩(wěn)定性。成分測定與指紋圖譜聯(lián)合使用，可以全面評價中藥的質(zhì)量。

目前法定標準中沒有北沙參的含量測定和指紋圖譜檢測項目，為了增強標準的可控性，筆者建立了北沙參的指紋圖譜測定方法和蔗糖的含量測定方法，以期為制訂北沙參質(zhì)量標準奠定基礎(chǔ)。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：Waters2695型，附帶Waters2420型蒸發(fā)光散射檢測器和Empower色譜工作站，美國waters公司。精密電子天平：AGBP210S型，感量為0.00001mg，德國Sartorius公司。乙腈：色譜純，美國賽默飛世爾公司。實驗所用其余試劑均為分析純。實驗用水為超純水。蔗糖對照品：50mg，編號為1507–200001，中國藥品生物制品檢定研究院。

北沙參藥材編號和來源見表1。

1.2 對照品溶液的制備

取蔗糖對照品10mg，精密稱定，加水定容至10mL的量瓶中，配制成1mg/mL的蔗糖對照品溶液，搖勻，用0.45µm微孔濾膜濾過，即得。

1.3 樣品溶液的制備

取北沙參樣品粉末（過0.42mm篩）4g，精密稱定，加40%乙醇240mL，超聲提?。üβ?50W，頻率53kHz）30min，濾過，取續(xù)濾液100mL，濃縮至10mL，0.45µm微孔濾膜濾過，即得。

1.4 色譜條件

譜柱：InnovalNH₂色譜柱（250mm×4.6mm，5µm，北京艾杰爾科技有限公司）；流動相：乙腈-水（80∶20），等度洗脫；流量：1mL/min；柱溫：30℃；ELSD的漂移管溫度：60℃；噴霧器加熱級別：100%；氣體壓力：137.90kPa。

2 結(jié)果與討論

2.1 蒸發(fā)光散射檢測器系統(tǒng)條件的優(yōu)選

2.1.1 正交試驗因素、水平設(shè)計

蒸發(fā)光散射檢測器的系統(tǒng)條件由噴霧器加熱級別、漂移管溫度、氣體壓力和增益4個條件組成，由于增益值僅影響信號放大的程度，對檢測結(jié)果沒有影響，所以本試驗以漂移管溫度A、噴霧器加熱級別B、氣體壓力C為3個考察因素，每個因素分別設(shè)有三個水平，通過正交試驗對檢測器條件進行優(yōu)選，因素水平見表2。

2.1.2 正交試驗方法與結(jié)果

精密吸取對照品溶液10µL，注入高效液相色譜儀進行檢測。以蔗糖的峰面積作為評價指標，優(yōu)選條件。結(jié)果見表3～表5。

由表5可知，A、C兩個因素P值均小于0.05，說明漂移管溫度、氣體壓力這兩個因素對蔗糖的測定均具有顯著性意義；B因素的P值大于0.05，說明噴霧器加熱級別對蔗糖的測定不具有顯著性意義。根據(jù)試驗結(jié)果進行直觀分析，A1B3C1為最佳選擇，即漂移管溫度為60℃，噴霧器加熱級別為100%，氣體壓力為137.90kPa。

2.2 色譜條件選擇與色譜圖

氨基柱其固定相是以超純?nèi)嗫浊蛐喂枘z為基質(zhì)，通過采用獨有的固定相鍵合技術(shù)，使用含有氨基丙基官能團的有機硅烷鍵合而成，能比硅膠柱更快達到平衡，對流動相的水含量沒有硅膠柱敏感。氨基柱可用于極性化合物的正相分析，弱陰離子交換以及含水的反相液相分析。氨基柱柱被廣泛應(yīng)用于木糖、乳糖、葡萄糖等糖類的反相分析模式中。故本實驗選用氨基柱作為色譜柱。

實驗選用氨基柱作為色譜柱。分別吸取蔗糖對照品溶液和樣品溶液各10µL，注入高效液相色譜儀檢測，開啟ELSD采集信號，得到蔗糖對照品和樣品的蒸發(fā)光檢測色譜圖，見圖1、圖2。由圖1、圖2可知，對照品圖譜和樣品圖譜中，ELSD檢測到蔗糖峰在11.5min附近。

2.3 線性關(guān)系與檢出限

取蔗糖對照品溶液，分別進樣2.5、5、10、15、20、25µL，經(jīng)ELSD檢測，以蔗糖進樣質(zhì)量的自然對數(shù)值為橫坐標X，以蔗糖峰面積的自然對數(shù)值為縱坐標Y，進行線性回歸計算得線性回歸方程為Y=1.1180X+11.86（r=0.9997），結(jié)果表明，蔗糖進樣質(zhì)量在7.30～72.95µg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。將蔗糖對照品溶液逐級稀釋，分別進樣分析，以3倍信噪比計算檢出限，計算得檢出限為0.02mg/mL。

相關(guān)鏈接：乙腈，蔗糖，木糖，氨基酸

聲明：本文所用圖片、文字來源《化學分析計量》，版權(quán)歸原作者所有。如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請與本網(wǎng)聯(lián)系