1.4.4 肉桂醛縮氨基脲對(duì)小鼠血尿酸質(zhì)量濃度、血清XOD活性和肝臟XOD活性的影響

參照文獻(xiàn)方法，用氧嗪酸鉀和尿酸腹腔注射小鼠。連續(xù)2天，造成小鼠高尿酸血癥模型。雄性昆明種小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，隨機(jī)分成正常對(duì)照組、高尿酸模型組、別嘌呤醇組、肉桂醛縮氨基脲組、肉桂醛組共5組，每組10只。正常對(duì)照組和高尿酸模型組，每天按20mL/kg劑量灌胃生理鹽水，持續(xù)6天。別嘌呤醇組每天按10mg/kg劑量灌胃1次，持續(xù)6天。肉桂醛組、肉桂醛縮氨基脲組小鼠每天按0.1g/kg劑量灌胃6天。從給藥第5天開始，除正常對(duì)照組外，其他各組每天灌胃前1h均要腹腔注射0.3g/kg氧嗪酸鉀和0.25g/kg尿酸，每天1次，連續(xù)2天進(jìn)行造模。在第6天灌胃1h后，小鼠進(jìn)行斷頭采血，血樣分別置于1.5mL離心管中，在4℃冰箱中凝固2h，在4℃下3000r/min離心5min。每份血清進(jìn)行血尿酸和血清XOD活性測(cè)定。采血后，取出肝臟，勻漿處理，離心取上清，測(cè)XOD活性。

用尿酸測(cè)定試劑盒測(cè)定血尿酸質(zhì)量濃度,用試劑盒法測(cè)定小鼠血清XOD和肝臟XOD活性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSSl9.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，組間比較用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 化合物結(jié)構(gòu)表征

化合物a(肉桂醛縮氨基脲，cinnamicaldehydesemicarbazone，CAS)：無(wú)色針晶(CH₃0H)；UV(MeOH)λ_max308，306nm；IR(KBr)ν_max3282，1644，1604cm^-1；¹H-NMR(400MHz，DMSO-d6)；δ10.174(s，1H，NH)7.653(s，1H，CH=N)，7.49(d，2H，Ph-H)，7.345(t，2H，Ph-H)，7.265(t，1H，Ph-H)，6.852(d，2H，CH=CH)，6.26(s，2H，NH₂)；ESI-MS，m/z=189.23，[M+H]⁺(C₁₀H₁₁N₃₀)。其IR、¹H-NMR、ESI-MS數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致。

化合物b(肉桂醛縮氨基硫脲，cinnamaldehvdethiosemicarbazide，CT)：淺黃色菊花晶(CH₃0H)；UV(MeOH)λ_max352，348nm；IR(KBr)ν_max3262，1592cm^-1；¹H-NMR(400MHz，DMS0-d6)：δ11.350(s，1H，NH)，8.123(s，1H，CH=N)，7.859(d，1H，Ph-H)，7.539(d，2H，NH₂)，7.541(d，1H，Ph-CH=)，7.341(t，3H，Ph-H)，6.998(d，1H，Ph-H)，6.838(q，1H，=CH-)；ESI-MS，m/zMr=205.3，[M+H]⁺(C₁₀H₁₁N₃S)。其IR、¹H-NMR、ESI-MS數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致。

化合物c(肉桂醛縮甲基氨基硫脲，cinnamaldehvdeshrinkagemethvlthiosemicarbazide，CSMT)：黃色粉末(CH₃0H)；UV(Me0H)λ_max305，358nm；IR(KBr)ν_max3362，1552cm^-1；¹H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ11.401(s，1H，NH)，8.24(s，1H，CH=N)，7.87(d，1H，CH=)，7.521(d，2H，Ph-H)，7.36(t，2H，Ph-H)，7.294(t，1H，Ph-H)，6.988(d，1H，CH=)，6.833(m，1H，NH)，2.942(d，3H，CH3)；ESI-MS，m/zMr=219.32，[M+H]⁺(C₁₁H₁₃N₃S)。

化合物d(肉桂醛縮4-苯基氨基硫脲，cinnamaldehvdeshrinkagephenvlthiosemicarbazide，CSPT)：無(wú)色針晶(CH₃0H)；UV(MeOH)λ_max305，350nm；IR(KBr)ν_max3313，1594cm^-1；¹H-NMR(400MHz，DMS0-d6)：δ11.79(s，1H，NH)，9.89(s，1H，NH-Ph)，7.98(s，1H，CH=N)，6.96(dd，1H，=CH-)，7.05(d，1H，Ph-CH=)，7.15(d，1H，Ph-H)，7.35(m，5H，Ph-H)，7.58(dd，4H，Ph-H)；ESI-MS，m/zMr=281.39，[M+H]⁺(C₁₆H₁₅N₃S)。其IR、¹H-NMR、ESI-MS數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致。

2.2 化合物對(duì)XOD抑制活性

肉桂醛及其席夫堿衍生物對(duì)XOD的抑制率見圖2。其中各折線依次代表抑制劑別嘌呤醇、肉桂醛縮氨基脲、肉桂醛、肉桂醛縮苯基氨基硫脲、肉桂醛縮甲基氨基硫脲、肉桂醛縮氨基硫脲。由圖2可知，同一種抑制劑，濃度越大，酶活性越低。別嘌呤醇、肉桂醛縮氨基脲、肉桂醛、肉桂醛縮苯基氨基硫脲、肉桂醛縮甲基氨基硫脲、肉桂醛縮氨基硫脲抑制XOD的IC₅₀值分別是(7.05±0.14)、(55.48±0.54)、(90.93±0.72)、(122.48±0.65)、(201.29±0.88)、(241.57±1.32)μmol/L(n=3)。各化合物活性順序是別嘌呤醇＞肉桂醛縮氨基脲＞肉桂醛＞肉桂醛縮苯基氨基硫脲＞肉桂醛縮甲基氨基硫脲＞肉桂醛縮氨基硫脲。

肉桂醛縮氨基脲對(duì)XOD抑制活性比肉桂醛強(qiáng)，且活性接近陽(yáng)性藥別嘌醇。肉桂醛縮氨基脲抑制XOD活性比肉桂醛縮氨基硫脲類化合物強(qiáng)，可能與氨基脲上的羰基能與XOD酶上的氨基酸殘基形成氫鍵，而硫脲不能形成氫鍵有關(guān)。抑制XOD活性，苯基取代硫脲＞甲基取代硫脲＞硫脲。這可能與疏水性有關(guān)，苯基的疏水性最大，其次是甲基，然后是無(wú)取代基。即疏水性基團(tuán)越大，抑制活性越好。由于肉桂醛縮氨基脲抑制XOD活性最強(qiáng)，以下測(cè)定抑制機(jī)理和抑制類型就只研究肉桂醛縮氨基脲。

2.3 肉桂醛縮氨基脲對(duì)XOD抑制類型

在測(cè)活體系中，固定底物黃嘌呤濃度，改變XOD酶的質(zhì)量濃度，測(cè)定不同濃度的抑制劑肉桂醛縮氨基脲(0、50、75、100μmol/L)對(duì)XOD酶活性的影響。由圖3可知，以酶促反應(yīng)的速度對(duì)酶質(zhì)量濃度作圖，為一組通過(guò)原點(diǎn)的直線，由此判斷肉桂醛縮氨基脲對(duì)XOD抑制機(jī)理為可逆抑制。

 相關(guān)鏈接：肉桂醛，黃嘌呤，尿酸，硫脲

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