2 結(jié)果與分析

2.1 工業(yè)大麻葉不同餾分對(duì)S.aureus的抑菌活性

表1顯示了不同餾分對(duì)S.aureus的最低抑制濃度(質(zhì)量濃度)。在供試范圍內(nèi)Frl-Fr4對(duì)S.aureus無(wú)抑菌作用，說(shuō)明Frl-Fr4餾分內(nèi)可能不含或含有很少量的活性化合物。Fr5和Fr6對(duì)S.aureus的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，最低抑菌濃度(質(zhì)量濃度)分別為31.25μg/mL和500μL，其中Fr5的抑菌效果與氨芐青霉素鈉的31.25μg/mL相當(dāng)，此結(jié)果與Chakrabortv等的研究結(jié)果接近，較柱分離前最低抑菌濃度(質(zhì)量濃度7.53mg/mL)顯著提高，說(shuō)明抑菌活性成分大部分富集于Fr5餾分。以此為依據(jù)，選擇n5分析其化學(xué)組成并探討其抑菌機(jī)理。

2.2 工業(yè)大麻葉Fr5餾分的GC-MS結(jié)果

由表2可知，工業(yè)大麻葉Fr5餾分，經(jīng)GC-MS分析，共鑒定出24種化合物，其中包括酯類(lèi)14個(gè)，醇類(lèi)3個(gè)，酚類(lèi)3個(gè)，烯烴類(lèi)2個(gè)。主要成分為亞麻酸甲酯(相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)40.79％)、棕櫚酸甲酯(相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)13.12％)、9-順，11-反-癸二烯酸甲酯(相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)4.55％)。說(shuō)明工業(yè)大麻葉Fr5餾分的抗菌活性可能與酯類(lèi)、醇類(lèi)、酚類(lèi)及其他微量化合物有關(guān)，不同成分也可能產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)。

2.3 工業(yè)大麻葉提取物的抑菌機(jī)理

2.3.1 工業(yè)大麻葉Fr5餾分對(duì)S.aureus生長(zhǎng)曲線的影響

OD_600nm的大小可間接反應(yīng)細(xì)菌的生長(zhǎng)情況，圖1為添加了0MIC、0.5MIC、1MIC3種質(zhì)量濃度的Fr5后S.aureus的生長(zhǎng)曲線。對(duì)照組在培養(yǎng)后快速繁殖，2h進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，14h進(jìn)入穩(wěn)定期，0D_600nm為1.156±0.029。在0.5MIC處理組，菌液0D_600nm增長(zhǎng)緩慢，對(duì)數(shù)增長(zhǎng)階段被推遲至6h，并于12h進(jìn)入穩(wěn)定階段，OD_600nm為0.427±0.023，說(shuō)明抑菌作用延緩對(duì)數(shù)生長(zhǎng)進(jìn)程。減少微生物數(shù)量。而當(dāng)菌液中Fr5質(zhì)量濃度為1MIC時(shí)，曲線平緩，細(xì)菌生長(zhǎng)被嚴(yán)重抑制，不能進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。因此，工業(yè)大麻葉Fr5餾分對(duì)S.aureus正常生長(zhǎng)有抑制作用，且隨著藥物質(zhì)量濃度增加，對(duì)生長(zhǎng)曲線影響增大。

2.3.2 工業(yè)大麻葉Fr5餾分對(duì)菌體細(xì)胞壁的影響

正常情況下AKP存在于細(xì)菌的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜之間，當(dāng)菌體細(xì)胞壁被破壞，AKP大量外泄，使培養(yǎng)液中AKP活力升高，因此可通過(guò)檢測(cè)胞外AKP活力的變化問(wèn)接反映菌體細(xì)胞壁完整性例。細(xì)菌細(xì)胞壁的主要功能是：維持細(xì)菌固有形態(tài)，保護(hù)細(xì)菌免受低滲環(huán)境侵襲，起到屏障作用。一旦細(xì)胞壁功能被破壞，細(xì)菌會(huì)很快死亡。如圖2所示，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，對(duì)照組AKP活力始終處于相對(duì)較低水平，但經(jīng)過(guò)1MIC處理后的菌液，在2h內(nèi)AKP活力迅速上升至較高水平(0.548±0.039U/L)，之后趨于平穩(wěn)狀態(tài)，而0.5MIC處理的AKP活力在8h達(dá)到最大值(0.335±0.020U/L)遠(yuǎn)低于1MIC處理。這表明工業(yè)大麻葉Fr5餾分短時(shí)間內(nèi)能有效破壞S勰陽(yáng)獬細(xì)胞壁的完整性。其中1MIC的Fr5對(duì)菌體細(xì)胞壁完整性的破壞程度較0.5MIC更明顯。

2.3.3 工業(yè)大麻葉Fr5餾分對(duì)細(xì)胞膜通透性的影響

細(xì)胞膜是菌體的保護(hù)屏障。其選擇性透過(guò)K⁺、Na⁺、H⁺等，可維持適合細(xì)菌生存的穩(wěn)定內(nèi)環(huán)境、胞膜功能、酶活性和菌體正常代謝剛。當(dāng)細(xì)胞膜遭到破壞，通透性增加，內(nèi)部的電解質(zhì)會(huì)外泄至細(xì)胞外，進(jìn)而使培養(yǎng)液電導(dǎo)率提高，因此菌液電導(dǎo)率的變化反映了細(xì)胞膜通透性的變化圜。如圖3所示，第0小時(shí)，添加抑菌物質(zhì)的菌液電導(dǎo)率有一定程度的下降，可能是藥物與外泄的離子發(fā)生了靜電結(jié)合，從而導(dǎo)致離子濃度降低，電導(dǎo)率下降。隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，對(duì)照組電導(dǎo)率呈現(xiàn)穩(wěn)定上升的趨勢(shì)，但變化幅度較小，這可能是菌液中菌體濃度增加和正常的裂解所致。當(dāng)加入工業(yè)大麻葉Fr5后，在短時(shí)間內(nèi)菌液電導(dǎo)率明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)，尤其是1MIC工業(yè)大麻葉提取物作用后2h，培養(yǎng)液電導(dǎo)率提高12％。這說(shuō)明工業(yè)大麻葉Fr5可對(duì)S.aureus細(xì)胞膜造成損傷。且損傷程度與Fr5的濃度呈正相關(guān)關(guān)系。

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