(八)SS瓊脂

1、基礎(chǔ)培養(yǎng)基

成分：牛肉膏5g，脈胨5g，三號(hào)膽鹽3.5g，瓊脂17g，蒸餾水1000mL。

制法：將牛肉膏、脲胨和膽鹽溶解于400mI，蒸餾水中，將瓊脂加入于600mL蒸餾水中，煮沸，使其溶解，再將兩液混合，121℃高壓滅菌15min，保存?zhèn)溆谩?/p>

2、完全培養(yǎng)基

成分：基礎(chǔ)培養(yǎng)基1000mL，

乳糖10g，檸檬酸鈉8.5g，硫代硫酸鈉8.5g，10％檸檬酸鐵溶液10mL，1％中性紅溶液2.5mL，O.1％煌綠溶液O.33mL。

制法：加熱溶化基礎(chǔ)培養(yǎng)基，按比例加入上述染料以外的各成分，充分混合均勻，校正pH至7.0，加入中性紅和煌綠溶液，傾注平板。

注：①制好的培養(yǎng)基宜當(dāng)日使用，或保存冰箱內(nèi)于48h內(nèi)使用。

②煌綠溶液配好后應(yīng)在lOd以?xún)?nèi)使用。

③可以購(gòu)用SS瓊脂的干燥培養(yǎng)基。

(九）三糖鐵瓊脂

成分：蛋白胨20g，牛肉膏5g，乳糖lOg，蔗糖lOg，葡萄糖1g，氯化鈉5g，硫酸亞鐵銨(Fe(NH₄)₂(SO₄)₂·6H₂0］0.2g，硫代硫酸鈉0.2g，瓊脂12g，酚紅0.025g，蒸餾水1000mL，pH7.4。

制法：將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中，校正pH，加入瓊脂煮沸溶化，加入0.2％酚紅水溶液12.5mL，搖勻，分裝試管，121℃高壓滅菌15min，放置高層斜面?zhèn)溆谩?/p>

(十)蛋白胨水(靛基質(zhì)試驗(yàn)用)

成分：蛋白胨(或胰蛋白胨)20g，氯化鈉5g，蒸餾水1000mL，pH7.4。

制法：按上述成分配制，分裝小試管，121℃高壓滅菌15min。

靛基質(zhì)試劑：

柯凡克試劑：將5g對(duì)二甲氨基苯甲醛溶于75mL戊醇中，然后緩慢加入濃鹽酸25mL。

歐-波試劑：將1g對(duì)二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95％酒精內(nèi)，然后緩慢加入濃鹽酸20mL。

試驗(yàn)方法：接種培養(yǎng)物36±1℃培養(yǎng)1～2d，加柯凡克試劑約0.5 mL，輕搖試管，陽(yáng)性者于試劑層呈深紅色?；蚣託W一波試劑約0.5mL，沿管壁流下覆蓋于培養(yǎng)基表面，陽(yáng)性者于液面接觸處呈玫瑰紅色。

注：蛋白胨中應(yīng)含有豐富的色氨酸，每批蛋白胨應(yīng)先用已知菌種鑒定后方可使用。

(十一)尿素瓊脂(pH7.2)

成分：蛋白胨1g，氯化鈉1g，葡萄糖5g，磷酸二氫鉀1g，O.4％酚紅溶液2g，瓊脂3mL，蒸餾水20g，20％尿素溶液1000mL，pH7.2。

制法：將除尿素和瓊脂以外的成分配好，校正pH，加入瓊脂煮沸溶化，分裝燒瓶，121⁰C高壓滅菌15min，冷至50～55℃加入經(jīng)除菌過(guò)濾的尿素溶液，分裝于滅菌試管內(nèi)，放成斜面?zhèn)溆谩?/p>

試驗(yàn)方法：接種培養(yǎng)物36±1℃培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果，尿素酶陽(yáng)性者，由于產(chǎn)堿而使培養(yǎng)基變?yōu)榧t色。

(十二)氰化鉀(KCN)培養(yǎng)基

成分：蛋白胨1g，氯化鈉5g，磷酸二氫鉀0.225g，磷酸氫二鈉5.64g，蒸餾水1000mL，O.5％氰化鉀溶液20mL，pH7.6。

制法：將除氰化鉀以外的成分配好，分裝燒瓶，121℃高壓滅菌15min，放在冰箱內(nèi)使其充分冷卻，每100mL培養(yǎng)基加入0.5％氰化鉀溶液2mL(最后濃度為1:10000)，分裝滅菌試管，每管約4mL，立刻用滅菌橡皮塞塞緊，放4℃冰箱保存，同時(shí)將不加氰化鉀的培養(yǎng)基作為對(duì)照培養(yǎng)基，分裝試管備用。

(十三)氨基酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基

成分：蛋白胨5g，酵母浸膏3g，葡萄糖1g，蒸餾水1000mL，1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，L-氨基酸或DL氨基酸0.5或1g／100mL。

制法：除氨基酸以外的成分加熱溶解后，分裝每瓶100mL，分別加入各種氨基酸：賴(lài)氨酸、精氨酸和鳥(niǎo)氨酸。L-氨基酸按0.5%加入，DL-氨基酸按1％加入，校正pH至6.8，對(duì)照培養(yǎng)基不加氨基酸，分裝于滅菌的小試管內(nèi)，每管0.5mL，上面加一層液體石蠟，115℃高壓滅菌10min。

試驗(yàn)方法：接種培養(yǎng)物于36±1℃培養(yǎng)18-24h，觀察結(jié)果，氨基酸脫羧酶陽(yáng)性者，由于產(chǎn)堿培養(yǎng)基應(yīng)呈紫色，陰性者無(wú)堿性產(chǎn)物，但因葡萄糖產(chǎn)酸而使培養(yǎng)基變?yōu)辄S色，對(duì)照管應(yīng)為黃色。

(十四)糖發(fā)酵管

成分：牛肉膏5g，蛋白胨lOg，氯化鈉3g，磷酸氫二鈉2g，0.2％溴麝香草酚藍(lán)溶液12mL，蒸餾水1000mL，pH7.4。

制法：葡萄糖發(fā)酵管按上述成分配好后，按0.5％加入葡萄糖，分裝于有倒管的試管內(nèi)，121℃高壓滅菌15min。其他各種糖發(fā)酵管，可按上述成分配好后分裝每瓶100 mL，121⁰C高壓滅菌15 min，另將各種糖類(lèi)分別配成10％溶液，同時(shí)高壓滅菌，將5mL糖溶液加入于100mL培養(yǎng)基內(nèi)，以無(wú)菌操作分裝小試管。

注：蔗糖不純，加熱后會(huì)自行水解者，應(yīng)采用過(guò)濾法除菌。

(十五)ONPG培養(yǎng)基

成分：鄰硝基酚β-D半乳糖苷(O-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside ONPG) 60mg，0.01mol／L磷酸鈉緩沖液(pFl7.5) 10mL，1％蛋白胨水(pI-17.5) 30mL。

制法：將ONPG溶于緩沖液內(nèi)，加入蛋白胨水，以過(guò)濾法除菌，分裝試管，每管O.5mL，用橡皮塞塞緊。

試驗(yàn)方法：由瓊脂斜面上挑取培養(yǎng)物1滿(mǎn)環(huán)接種，于361℃培養(yǎng)1～3h或24h觀察結(jié)果，如果β-半乳糖苷酶產(chǎn)生，則于1-3h變黃色，如無(wú)此酶則24h不變色。

(十六)半固體瓊脂

成分：蛋白胨lg，牛肉膏0.3g，氯化鈉O.5g，瓊脂O.35～0.4g，蒸餾水100mL。

制法：按上述成分配好，煮沸溶解，校pH為7.4，分裝小試管，121⁰C高壓滅菌15min，直立凝固備用。

(十七)緩沖葡萄糖蛋白胨水(MR和V-P試驗(yàn)用)

成分：磷酸氫二鉀5g，多胨7g，葡萄糖5g，蒸餾水1000mL，pH7.O。

制法：溶化后校iE pH，分裝試管，每管1-2mL，121⁰C高壓滅菌15min。

甲基紅試驗(yàn)：接種培養(yǎng)物于36±1℃培養(yǎng)2-4天，滴加試劑一滴，立即觀察結(jié)果，鮮紅色為陽(yáng)性，黃色為陰性。

甲基紅試劑配法：10mg甲基紅溶于30mL，乙醇中，然后加入20mL蒸餾水。

V—P試驗(yàn)：接種培養(yǎng)物予36±1℃培養(yǎng)2～4天，加入6％α-萘酚酒精溶液0.5mL和40％氫氧化鉀溶液0.2mL，充分振搖觀察結(jié)果，陽(yáng)性者立刻或數(shù)分鐘呈紅色，如陰性時(shí)應(yīng)于36℃培養(yǎng)4h再進(jìn)行觀察。

(十八)丙二酸鈉培養(yǎng)基

成分：酵母膏1g，硫酸銨2g，磷酸氫二鉀0.6g，磷酸二氫鉀0.4g，氯化鈉2g，丙二酸鈉3g，0.2%溴麝香草酚藍(lán)溶液12mL，蒸餾水1000mL，pH6.8。

制法：先將酵母浸膏和鹽類(lèi)溶解于水，校正pH后再加指示劑，分裝試管，121℃高壓滅菌15min。

接種培養(yǎng)物于36±1℃培養(yǎng)48h，陽(yáng)性者由綠色變?yōu)樗{(lán)色。

(十九)氧化酶試驗(yàn)

1％鹽酸二甲基對(duì)苯二胺溶液：小量新鮮配制，于冰箱內(nèi)避光保存。

1％α-萘酚乙醇溶液。

試驗(yàn)方法：取白色潔凈濾紙沾取菌落，加鹽酸二甲基對(duì)苯二胺溶液一滴，陽(yáng)性者呈現(xiàn)粉紅色，并逐漸加深，再加α-萘酚溶液一滴，陽(yáng)性者于半分鐘內(nèi)呈現(xiàn)鮮藍(lán)色，陰性于2min內(nèi)不變。

以毛細(xì)吸管吸取試劑，直接滴加于菌落上，其顯色反應(yīng)與以上相同。

(二十)WS瓊脂

成分：

豚胨12g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，乳糖12g，蔗糖12g，十二烷基硫酸鈉2g，瓊脂15g，Andrade指示劑20mL，O.4％溴麝香草酚藍(lán)溶液16mL，甲液20mL，蒸餾水1000mL，pH7.0。

制法：

除指示劑和甲液外，將其他成分加熱溶解，不需消毒，校正pH后加入指示劑和甲液，傾注平板，應(yīng)呈草綠色。

注：①供沙門(mén)氏菌分離用。

②Andrade指示劑和甲液的配制均見(jiàn)HE瓊脂。

參考資料：食品衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)手冊(cè)

相關(guān)鏈接：硫酸亞鐵銨，培養(yǎng)基，丙二酸鈉，十二烷基硫酸鈉