一、志賀氏菌屬各菌型與生化型鑒別

志賀氏菌屬的各個(gè)菌，除各自具有能識(shí)別的抗原成分外，還具有一些不同的生化學(xué)特征，有一定的鑒別意義，可供菌型鑒定時(shí)的參考。

二、制法

(一)緩沖蛋白胨水

成分：蛋白胨10g，氯化鈉5g，磷酸氫二鈉(Na₂HPO₄·12H₂0)9g，磷酸二氫鉀1.5g，蒸餾水1000mL，PH7.2。

按上述成分配好后，裝入大燒瓶，121⁰C高壓滅菌，臨用時(shí)無菌分裝每瓶225mL，供沙門氏菌前增菌用。

(二)氯化鎂孔雀綠(MM)增菌液

成分：甲液：胰蛋白胨5g，氯化鈉8g，磷酸二氫鉀1.6g，蒸餾水1000mL。

乙液：氯化鎂(化學(xué)純)40g，蒸餾水100mL，丙液：O.4%孔雀綠水溶液。

制法：分別按上述成分配好，121⁰C高壓滅菌15min備用，臨用時(shí)取甲液90mL，乙液9mL，丙液0.9mL，以無菌操作混合即可。

(三)四硫磺酸鈉煌綠(TTB)增菌液

成分：多胨或所胨5g，膽鹽lg，碳酸鈣10g，硫代硫酸鈉30g，蒸餾水1000mL。

制法：將上述各成分加入蒸餾水中，加熱溶解，分裝每瓶：100mL中加入碘溶液2mL，0．1％煌綠溶液1mL。

碘溶液配制：碘6g，碘化鉀5g，蒸餾水20mL。

(四)亞硒酸鹽胱氨酸(SC)增菌液

成分：蛋白胨5g，乳糖4g，亞硒酸氫鈉4g，磷酸氫二鈉5.5g，磷酸二氫鉀4.5g，L-胱氨酸O.01g，蒸餾水1000mL。

制法：將除亞硒酸氫鈉和L-胱氨酸以外的各成分溶解于900mL蒸餾水中，加熱煮沸，俟冷備用，另將亞硒酸氫鈉溶解于100mL蒸餾水中，加熱煮沸，俟冷，以無菌操作與上液混合。再加入1％L-胱氨酸-氫氧化鈉溶液：1mL。分裝于滅菌瓶中，每瓶100mL，pH應(yīng)為7.O±O.1。

1%L-胱氨酸-氫氧化鈉溶液的配法：稱取L-胱氨酸O.1g(或DL-胱氨酸O.2g)，加1N氫氧化鈉1.5mL，使溶解，再加入蒸餾水8.5mL即成。

(五)亞硫酸鉍瓊脂(BS)

成分：蛋白胨10g，

牛肉膏5g，葡萄糖5g，硫酸亞鐵O.3g，磷酸氫二鈉4g，煌綠O.025g，檸檬酸鉍銨2g，亞硫酸鈉6g，瓊脂18-20g，蒸餾水1000mL，pH7.5。

制法：將前5種成分溶解于300mL蒸餾水中，將檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉另用50mL蒸餾水溶解，將瓊脂于600mL蒸餾水中煮沸溶解，冷至80℃，將以上三液合并，補(bǔ)充蒸餾水至1000mL，校正pH，加O.5％煌綠水溶液5mL搖勻，冷至50～55℃傾注平板。

注：此培養(yǎng)基不需高壓滅菌，制備過程中不宜過分加熱，以免降低其選擇性，應(yīng)在臨用前一天制備，貯存于室溫暗處，超過48h，不宜使用。

(六)DHL瓊脂(Deoxycholate Hydrogen Sulfide Laetose Agar)

成分：蛋白胨20g

牛肉膏3g，乳糖lOg，蔗糖10g，去氧膽酸鈉1g，硫代硫酸鈉2.3g，檸檬酸鈉1g，檸檬酸鐵銨1g，中性紅0.03g，瓊脂18～20g，蒸餾水1000mL。

制法：除中性紅和瓊脂以外的成分溶解于400mL蒸餾水中，校正pH為7.3，再將瓊脂于600 mL蒸餾水中煮沸溶解，兩液合并，加入0.5%中性紅水溶液6mL，待冷至50-55⁰C傾注平板。

(七)HE瓊脂(Hektoen Enteric Agar)

成分：脈胨12g，牛肉膏3g，乳糖12g，蔗糖12g，水楊素2g，膽鹽20g，氯化鈉5g，瓊脂18～20g，蒸餾水1000mL，0.4％溴麝香草酚藍(lán)溶液16mL，Andrade指示劑20mL，甲液20mL，乙液20mL，PH7.5。

制法：將前7種成分溶解于400mL蒸餾水內(nèi)為基礎(chǔ)液，將瓊脂加入于600 mL蒸餾水內(nèi)，加熱溶解，加入甲液和乙液于基礎(chǔ)液內(nèi)，校正pH，再加入指示劑，并與瓊脂合并，待冷至50-55⁰C傾注平板。

注：①此培養(yǎng)基不可高壓滅菌。

②甲液的配制：

硫代硫酸鈉34g，檸檬酸鐵銨4g，蒸餾水100mL。

③乙液的配制：

去氧膽酸鈉lOg，蒸餾水100mL。

④Andrade指示劑：

酸性復(fù)紅0.5g，1N氫氧化鈉溶液16mL，蒸餾水lOOmL。

將復(fù)紅溶解于蒸餾水中，加入氫氧化鈉溶液，數(shù)小時(shí)后如復(fù)紅褪色不全，再加氫氧化鈉溶液1～2 mL。

參考資料：食品衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)手冊(cè)

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