乳鼠灌胃試驗(yàn)檢測(cè)ST：將被檢菌種于Honda氏產(chǎn)毒肉湯內(nèi)，于36℃培養(yǎng)24h，以3000r/min離心30min，取上清液經(jīng)薄膜濾器過(guò)濾，加熱60⁰C30min，每毫升濾液內(nèi)加入2％伊文斯藍(lán)0.02mL，將此濾液用塑料小管注入1～4日齡的乳鼠胃內(nèi)O.1mL，同時(shí)接種3～4只，禁食3～4h后用三氯甲烷麻醉，取出全部腸管，稱量腸管(包括積液)質(zhì)量及剩余體重。腸管質(zhì)量及剩余體重之比大于0.09為陽(yáng)性，0.07～0.09為可疑。

二、結(jié)果分析判定

綜合以上生化試驗(yàn)、血清學(xué)試驗(yàn)、腸毒素試驗(yàn)作出報(bào)告。

三、培養(yǎng)基和試劑

(一)營(yíng)養(yǎng)肉湯

蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，蒸餾水1000mL，pH7.4。

按上述成分混合，溶解后校正pH，分裝三角瓶，每瓶225mL，121⁰C高壓滅菌15min。

(二)腸道增菌肉湯

(三)麥康凱瓊脂

蛋白胨17g，脲胨3g，豬膽鹽(或牛、羊膽鹽)5g，氯化鈉5g，瓊脂17g，蒸餾水1000mL，乳糖10g,0.01％結(jié)晶紫水溶液10mL,0.5％中性紅水溶液5mL。

將蛋白胨、脲胨、膽鹽和氯化鈉溶解于400mL蒸餾水中，校正至pH7．2。將瓊脂加入于600mL蒸餾水中，加熱溶解。將兩液合并，分裝于燒瓶?jī)?nèi)，121⁰C高壓滅菌15min備用。

臨用時(shí)加熱溶化瓊脂，趁熱加入乳糖。冷至50-55⁰C時(shí)，加入結(jié)晶紫和中性紅水溶液，搖勻后傾注平板。

結(jié)晶紫及中性紅水溶液配好后須經(jīng)高壓滅菌。

(四)伊紅美藍(lán)瓊(EMB)

蛋白胨10g,乳糖10g,磷酸氫二鉀2g，瓊脂17g，2％伊紅Y溶液20mL，0.65%美藍(lán)溶液10mL，蒸餾水1000mL，PH7.1。

將蛋白胨、磷酸鹽和瓊脂溶解于蒸餾水中，校正pH，分裝于燒瓶?jī)?nèi)，121C高壓滅菌15min備用。臨用時(shí)加入乳糖并加熱溶化瓊脂，冷至50-55⁰C，加入伊紅和美藍(lán)溶液，搖勻，傾注平板。

(五)克氏雙糖鐵瓊脂(K1)

上層培養(yǎng)基成分：

血消化湯(pH7.6)500mL，瓊脂6.5g，硫代硫酸鈉0.1g，硫酸亞鐵銨0.1g，乳糖5g，0.2％酚紅溶液5mL。

下層培養(yǎng)基成分：

血消化湯(pH7.6)500mL，瓊脂2g，葡萄糖 1g，0.2%酚紅溶液5mL。

取血消化湯，按上層和下層的瓊脂用量分別加入瓊脂，加熱溶解。

分別加入其他各種成分。將上層培養(yǎng)基分裝于燒瓶?jī)?nèi)；將下層培養(yǎng)基分裝于滅菌12mm×100mm試管內(nèi)，每管約2mL。115℃高壓滅菌10min。

將上層培養(yǎng)基放在56℃水浴箱內(nèi)保溫；將下層培養(yǎng)基直立放在室溫內(nèi)，使其凝固。俟下層培養(yǎng)基凝固后，以無(wú)菌手續(xù)將上層培養(yǎng)基分裝于下層培養(yǎng)基的上面，每管1.5mL，放成斜面。

(六)克氏雙糖鐵瓊脂(換用方法)

蛋白胨20g，牛肉膏3g，酵母膏3g，乳糖10g，葡萄糖1g，氯化鈉3g，檸檬酸鐵銨0.5g，硫代硫酸鈉0.5g，瓊脂12g，酚紅0.025g，蒸餾水1000mL，PH7.4。

將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中，校正pH。加入瓊脂，加熱煮沸，以溶化瓊脂。加入0.2％酚紅水溶液12.5mL，搖勻。分裝試管，裝量宜多些，以便得到比較高的底層，121℃高壓滅菌15min，放置高層斜面?zhèn)溆谩?/p>

(七)糖發(fā)酵管

牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化鈉3g，磷酸氫二鈉(Na₂HPO₄·12H₂O)2g，0.2％溴麝香草酚藍(lán)溶液12mL，蒸餾水1000mL，PH7.4。

葡萄糖發(fā)酵管按上述成分配好后，按0.5％加入葡萄糖，分裝于有一個(gè)倒置小管的小試管內(nèi)，121℃高壓滅菌15min。

其他各種糖發(fā)酵管按上述成分配好后，分裝每瓶100mL，121⁰C高壓滅菌15min。另將各種糖類分別配好10％溶液，同時(shí)高壓滅菌。將5mL糖液加入于100mL培養(yǎng)基內(nèi)，以無(wú)菌操作分裝小試管。

蔗糖不純，加熱后會(huì)自行水解者，應(yīng)采用過(guò)濾法除菌。

試驗(yàn)方法：從瓊脂斜面上挑取小量培養(yǎng)物接種，于36±1⁰C培養(yǎng)，一般觀察2～3d。遲緩反應(yīng)需觀察14-30d。

參考資料：食品衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)手冊(cè)

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