米粉，以大米為主要原料，經(jīng)浸泡、蒸煮、壓條等工序制成的條狀、絲狀米制品，深受廣大消費(fèi)者的喜愛，歷史比較悠久，據(jù)傳是古代中國五胡亂華時期北方民眾避居南方而產(chǎn)生的食品。嬰幼兒米粉（又稱嬰幼兒米糊），以大米、小米為主要原料，添加適量的營養(yǎng)強(qiáng)化劑，加工制成的適合6個月以上嬰幼兒的補(bǔ)充營養(yǎng)的輔助食品，是嬰幼兒谷類輔助食品之一，品種繁多，是不少嬰幼兒比較喜愛和家庭常見的食物。作為人工合成的第一種香料，天然的香蘭素產(chǎn)量較低，且價格較貴，隨著科技的不斷進(jìn)步，香蘭素的產(chǎn)量每年都在增加，2019年全球香蘭素產(chǎn)量約2萬噸，其中中國約占70%，中國是目前世界上香蘭素和乙基香蘭素最大的生產(chǎn)國和消費(fèi)國，作為在食品生產(chǎn)中廣泛使用的可食用香料，香蘭素和乙基香蘭素主要作用是使食品產(chǎn)生獨(dú)特的奶香味及香子蘭的氣味，增進(jìn)人的食欲，提高食品質(zhì)量；恢復(fù)食品香味，強(qiáng)化特征味道；消殺食品中的不良味道。在國家標(biāo)準(zhǔn)GB2760—2014《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定，0～6個月的嬰幼兒配方食品不得添加任何食品用香料，香蘭素在嬰幼兒谷類輔助食品中可以使用，但最大使用量不得超過7mg/100g，美國食品香料與萃取物制造者協(xié)會（FEMA）建議軟飲料中的香蘭素的用量6.3mg/100g，目前對香蘭素和乙基香蘭素沒有相應(yīng)的國家檢測標(biāo)準(zhǔn)和方法，香蘭素和乙基香蘭素雖然是很安全的食品添加劑，但加了超量香蘭素的米粉可能會影響嬰幼兒對此類食品的依賴性，而且大劑量攝入香蘭素可能致人體肝腎損害，尤其是嬰幼兒。米粉中，尤其是嬰幼兒米粉中，不少生產(chǎn)企業(yè)為了產(chǎn)品有更好的口味，在產(chǎn)品中添加了香蘭素，生產(chǎn)企業(yè)能否嚴(yán)格按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定要求使用對整個食品行業(yè)的發(fā)展，也和我們每個人的身體健康密不可分。根據(jù)相關(guān)報道和文獻(xiàn)資料，目前對食品中香蘭素和乙基香蘭素檢測液相法或液質(zhì)法較多，而氣相法較少，液相法或液質(zhì)法中處理樣品所用的有機(jī)試劑較多是已烷或乙腈，本方法主要探討利用安捷倫7890B氣相色譜FID檢測器，用乙醇（相較于已烷或乙腈，更安全）為提取液，已酸乙酯作為內(nèi)標(biāo)，優(yōu)化色譜條件，實(shí)現(xiàn)了香蘭素和乙基香蘭素兩種物質(zhì)的分離，方法靈敏準(zhǔn)確、操作簡單，是定量檢測米粉中香蘭素和乙基香蘭素含量的理想方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

氣相色譜儀：安捷倫7890B（配有FID檢測器，7693液體自動進(jìn)樣器和150位進(jìn)樣盤）；旋渦混合器XW-80A：上海弛唐電子有限公司；旋渦混合器XW-80A：賽默飛世爾；分析天平ME204T/02：梅特勒儀器有限公司。

香蘭素（C₈H₈O₃，CAS：121-33-5，色譜純）、乙基香蘭素（C₉H₁₀O₃，CAS：121-32-4，色譜純）：上海易恩化學(xué)技術(shù)有限公司；已酸乙酯（C₈H₁₆O₂，CAS：125-66-0，色譜純）、乙醇（C₂H₄O，CAS號：64-17-5.色譜純）：上海麥克林生化科技有限公司；有機(jī)相相針式濾器（尼龍）：100只/罐，13mm，0.22μm，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技有限公司。

1.2 色譜條件

檢測器溫度：300℃，進(jìn)樣口溫度：270℃；進(jìn)樣量1µL（襯管為5190～2295），分流進(jìn)樣，分流比5∶1，色譜柱：DB-1（15m×0.32mm×5.0µm）；柱箱：90℃（2min）-10℃/min升至220℃（5min），后運(yùn)行280℃（1min）。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液

1.3.1 已酸乙酯、香蘭素、乙基香蘭素標(biāo)準(zhǔn)溶液儲備液（1000µg/mL）

分別準(zhǔn)確稱取0.1g已酸乙酯、香蘭素、乙基香蘭素至100mL容量瓶中，用乙醇定容至刻度，混勻，0～4℃低溫冰箱密封保存。

1.3.2 分別吸取香蘭素、乙基香蘭素標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液0.05、0.10、0.25、0.40、0.50mL

分別準(zhǔn)確稱取于10mL的容量瓶中，加入0.2mL已酸乙酯，以乙醇定容至刻度，依次配制成香蘭素、乙基香蘭素標(biāo)準(zhǔn)溶液為5、10、25、40、50µg/mL系列混合系列內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.4 試樣制備及測定

稱取混合均勻的米粉樣品2g（精確至0.001g）于15mL離心管中，加入10mL乙醇，加入0.2mL已酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)溶液儲備液，渦旋混勻2min，10000r/min離心5min，再用0.22µm氣相濾頭過濾于進(jìn)樣瓶中，待測。同時做空白試驗(yàn)。

2 結(jié)果和分析

2.1 實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化

2.1.1 氣相色譜條件的選擇

氣相色譜條件的選擇和優(yōu)化主要涉及到儀器的檢測器、進(jìn)樣口和毛細(xì)管柱及其升溫程序、柱流速，目前實(shí)驗(yàn)室常用的安捷倫氣相檢測器有4種分別是FPD、NPD、ECD、FID、FPD、NPD檢測器主要檢測農(nóng)藥殘留，故未考慮，經(jīng)過試驗(yàn)和查找相關(guān)資料，ECD檢測器對香蘭素、乙基香蘭素的響應(yīng)值很低，基本不出峰，而FID檢測器對香蘭素、乙基香蘭素響應(yīng)值很高，選擇檢測器溫度250℃、300℃、320℃和選擇進(jìn)樣口溫度200℃、250℃、270℃進(jìn)行多次試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)檢測器溫度300℃和進(jìn)樣口溫度270℃時三種物質(zhì)峰形最好且分離效果最好。

本試驗(yàn)主要考察了毛細(xì)管柱DB-FAAP（50m×0.32mm×0.50µm）、DB-1（15m×0.32mm×5.0µm）、HP-1（25m×0.32mm×0.25μm）、HP-5（30m×0.25mm×0.25μm）、DB-1701（30m×0.32mm×0.25μm等毛細(xì)管柱的分離效果，尤其對DB-1（15m×0.32mm×5.0µm）、DB-1（30m×0.25mm×0.25µm）、HP-1（25m×0.32mm×0.25μm）三種規(guī)格的毛細(xì)管柱進(jìn)行多次實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)毛細(xì)管柱的膜厚對峰形有較大的影響，5.0µm膜厚的峰形更尖銳對稱且分離時間更短，結(jié)果表明選擇極性柱和中極柱時，三種組分基本不出峰或峰形很差，針對DB-1（15m×0.32mm×5.0µm）毛細(xì)管柱進(jìn)行程序升溫和恒溫設(shè)置，以及不同柱流速下的出峰情況進(jìn)行多次驗(yàn)證，恒溫120℃、180℃、210℃、時間30min以及程序升溫90℃（2min）-10℃/min升至220℃（5min）等條件下和柱流速為0.5、1.0、1.5、2.0mL/min幾種情況下的標(biāo)樣的色譜圖，發(fā)現(xiàn)恒溫條件下三種物質(zhì)的分離不是太好，且需要較長時間，而程序升溫明顯提高色譜柱的分離度，當(dāng)柱流速大于1.5mL/min，由于毛細(xì)柱為15m，溶液出峰時間過于靠前，峰形不太好，當(dāng)柱流速小于0.5mL/min，就降低了工作效率，出峰時間過長，所以最終選擇色譜條件為1.2.1。

2.1.2 內(nèi)標(biāo)物的選擇

內(nèi)標(biāo)法與外標(biāo)法相比，主要優(yōu)點(diǎn)是消減了儀器進(jìn)樣過程中進(jìn)樣體積的變化對檢測結(jié)果的影響，能提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確度，選擇實(shí)驗(yàn)室常用的有機(jī)試劑乙腈、甲醇、已酸乙酯作為內(nèi)標(biāo)物，經(jīng)過多次實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)已酸乙酯為內(nèi)標(biāo)物最好，20µg/mL已酸乙酯時，峰面積為83.6；25µg/mL香蘭素峰面積為119.6；25µg/mL乙基香蘭素峰面積為107.8，而且三者的化學(xué)性質(zhì)相似，三者互溶，已酸乙酯是米粉中不可能存在的物質(zhì)，內(nèi)標(biāo)物已酸乙酯的量接近于被測組分香蘭素、乙基香蘭素，但不會發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，所以最終選擇已酸乙酯作為內(nèi)標(biāo)物。在1.2條件下25µg/mL香蘭素、乙基香蘭素混合內(nèi)標(biāo)液中，已酸乙酯的塔板數(shù)為128499，分離度為34.54，香蘭素的塔板數(shù)為268807，分離度為54.37，乙基香蘭素的塔板數(shù)為236058，分離度為8.63，三者完全分離且效果很好，能滿足標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的要求，三組分在20min內(nèi)完成分離，分離效果最理想。

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