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1、免疫球蛋白的類型與結(jié)構(gòu):免疫球蛋白分子由4條多肽鏈組成,兩條短鏈稱為輕鏈(1ight chain,L),分子質(zhì)量約為25ku。兩條長鏈稱為重鏈(heavy chain,H),分子質(zhì)量為50~75 ku。輕鏈有2種:κ和λ。在同一免疫球蛋白分子中,兩條輕鏈是同型(isotype)的。重鏈有5種:α、γ、δ、ε和μ。根據(jù)免疫球蛋白重鏈的種類不同,可將其分為5類:IgA(α鏈)、IgD(δ鏈)、IgE(ε鏈)、IgG(γ鏈)和IgM(μ鏈)。肽鏈間通過二硫鍵(disulfide b()nd)連接,單個Ig分子呈“Y”狀結(jié)構(gòu)。
免疫球蛋白分子分為恒定區(qū)(constant reglon,C)和可變區(qū)(variable region,V)兩部分。對于不同的免疫球蛋白分子,輕鏈N端的一半和重鏈N端的1/4這一區(qū)域的氨基酸序列有較大的變化,稱為可變區(qū);其余部分氨基酸序列趨于保守,稱為恒定區(qū)??勺儏^(qū)某些部位氨基酸序列變化非常大,故稱為高變區(qū)(hyperlvariable regk)n,HvR)。高變區(qū)只占v區(qū)的20%~25%;其余75%~80%則相對保守,稱為框架區(qū)(fraHlework regiorl)。輕鏈(light chain,L)和重鏈(heavy chain,H)各含有3個高變區(qū),其表面為抗原結(jié)合部位(antigen binding site)。由于高變區(qū)氨基酸序列與結(jié)合的抗原形成了結(jié)構(gòu)互補的三維空間結(jié)構(gòu),所以高變區(qū)也被稱為互補決定區(qū)(complementary_determining regiorL,CDR)。γ重鏈、α重鏈和δ重鏈含有1個非球形片斷,位于C區(qū)的第1個(CH1)和第2個(CH2)結(jié)構(gòu)域之間,氨基酸殘基數(shù)少至10個多至60個以上。該區(qū)稱為鉸鏈區(qū)(hinge regiorl)。當抗體與抗原結(jié)合時,鉸鏈區(qū)可自由轉(zhuǎn)動,以適應(yīng)不同距離的抗原決定簇。抗體可憑借鉸鏈區(qū)的彈性與某一獨特抗原的1個以上位點結(jié)合,與更多的抗原結(jié)合點接觸可增加結(jié)合的強度。
2、抗體的類型:按制備方法、產(chǎn)生途徑和特點,抗體分為多克隆抗體、單克隆抗體和基因工程抗體。
(1)多克隆抗體:多克隆抗體(polyclonal antibody,PcAb)是指由多株B細胞產(chǎn)生的、針對不同抗原決定簇的抗體的混合物。其制備方法是用抗原直接免疫兔、羊等動物制備抗血清,再從抗血清中分離抗體。多克隆抗體與抗原的親和力強、穩(wěn)定性好,但抗體的均一性和特異性不如單克隆抗體,來源間斷,存在批間差異。
(2)單克隆抗體:單克隆抗體(monoclonal antibody,McAb)是指由某一個抗原決定簇刺激單株B細胞所產(chǎn)生的抗體。單克隆抗體是通過雜交瘤技術(shù)(又稱為無性繁殖細胞技術(shù))制備的。單克隆抗體均質(zhì)性好、特異性強,可在體外培養(yǎng)液中連續(xù)批量培養(yǎng),無批間差異。
(3)基因工程抗體基因工程抗體(genetic engineering antibody)是通過對抗體可變區(qū)的基因進行克隆或部分片段改造,利用DNA分子重組技術(shù),再經(jīng)過表達而產(chǎn)生的具有免疫學活性的特異性多肽。基因工程抗體技術(shù)的發(fā)展使人工設(shè)計和制備具有特殊性質(zhì)、特殊功能的抗體成為可能。
(三)抗原抗體反應(yīng)
抗原與抗體的特異性結(jié)合稱為抗原抗體反應(yīng)(antigen-antibody reaction)。脊椎動物機體具有免疫系統(tǒng),在受到進入體內(nèi)的細菌、病毒、細胞、組織、蛋白質(zhì)等外源性物質(zhì)(抗原)刺激的時候能發(fā)生保護性應(yīng)答反應(yīng),產(chǎn)生特異性的保護物質(zhì)(抗體)來識別該外源性物
質(zhì)并與之相結(jié)合,從而“鈍化”該物質(zhì)以排除其干擾??乖贵w的識別和結(jié)合反應(yīng)不僅可以在體內(nèi)進行,也可以在體外適當條件下進行,符合質(zhì)量作用定律。這種反應(yīng)在體內(nèi)作為體液免疫應(yīng)答的效應(yīng)機制自然發(fā)生,在體外作為免疫學實驗的結(jié)果而出現(xiàn)。由于傳統(tǒng)免疫學技術(shù)多以人或動物的血清作為抗體的來源,所以體外實驗中的抗原抗體反應(yīng)習慣上稱為血清學反應(yīng)(serological reaction)。但是現(xiàn)代的抗原抗體反應(yīng)早已突破了血清學時代的概念。
1、抗原抗體的結(jié)合力:抗原與抗體的結(jié)合具有高度的特異性,主要依靠抗原與抗體結(jié)合位點空間結(jié)構(gòu)的精密“契合”和范德華(van der Waals)力等非共價鍵力的維系。抗原與抗體的結(jié)合雖然是互補性的特異性結(jié)合,但不形成牢固的共價鍵(共價鍵鍵能為209.2~418.4 kJ/m01),而是以復(fù)雜的非共價鍵結(jié)合在一起,這種較弱的結(jié)合力至少包括以下4個方面。
(1)靜電引力:抗原和抗體分子上帶有相反電荷的基團之間可以發(fā)生靜電引力,又稱為庫侖力。例如抗體分子上堿性氨基酸的游離氨基(一NH3+)和酸性氨基酸的游離羧基(-COO一),可與抗原分子上帶相反電荷的對應(yīng)基團相互吸引。這種引力的大小與兩電荷間距離的平方成反比,平均鍵能約為20.9 kJ/mol。
(2)范德華力:抗原和抗體相互接近時,由于分子或原子的瞬間偶極作用而出現(xiàn)的引力稱為范德華力,它可使對應(yīng)的抗原與抗體相互吸引。范德華力的構(gòu)成與計算比較復(fù)雜,大致與兩個相互作用基團的極化程度的乘積成正比,與它們之間距離的7次方成反比,鍵能為4.2~12.5 kJ/mol。
(3)疏水作用力:兩個疏水基團在水溶液中相互接觸時,由于對水分子排斥而趨向聚集的力稱為疏水作用力,亦稱為疏水鍵??乖贵w反應(yīng)時可提供疏水性基團的氨基酸殘基有亮氨酸、異亮氨酸、丙氨酸、脯氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸、色氨酸等。抗原與抗體由于疏水作用而凝聚成復(fù)合物,這樣就使其與水接觸的表面積縮小,親水性降低。
(4)氫鍵:供氫體上的氫原子與受氫體原子間的引力構(gòu)成氫鍵。供氫體和受氫體的原子都是電負性很強的原子。在抗原抗體反應(yīng)中,羧基、氨基和羥基是主要供氫體,而羧基氧、羧基碳、肽鍵氧等原子是主要受氫體。氫鍵具有方向性,因此比范德華力更具有特異性。氫鍵結(jié)合力與供氫體和受氫體之間距離的6次方成反比,鍵能約為20.9 kJ/mol。
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