目的：探討不同國(guó)產(chǎn)新型冠狀病毒（以下簡(jiǎn)稱“新冠病毒”）IgG抗體檢測(cè)試劑盒（膠體金法）的陽(yáng)性符合率、陰性符合率及檢出限的差異。方法：選擇具有代表性的6種國(guó)產(chǎn)新冠病毒IgG抗體檢測(cè)試劑盒，嚴(yán)格按照其說(shuō)明書，對(duì)15例臨床確診的陽(yáng)性滅活樣本進(jìn)行陽(yáng)性符合率測(cè)試。并通過(guò)20例同期健康體檢者陰性滅活樣本和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（稀釋成不同梯度）比較6種試劑盒的陰性符合率及檢出限。分析影響試劑盒檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性符合率、陰性符合率及檢出限的因素。結(jié)果：6種試劑盒中，陽(yáng)性符合率在90.0%～100.0%的有3種，在80.0%～<90.0%的有1種，在70.0%～<80.0%的有2種；6種試劑盒的陰性符合率均為100.0%;6種試劑盒的檢出限呈梯度分布。結(jié)論：試劑盒的特異性識(shí)別位點(diǎn)、蛋白表達(dá)系統(tǒng)以及說(shuō)明書的規(guī)范程度等因素都會(huì)影響試劑盒的檢測(cè)結(jié)果。

0引言

新型冠狀病毒肺炎（以下簡(jiǎn)稱“新冠肺炎”）疫情自發(fā)生以來(lái)在全國(guó)迅速蔓延，嚴(yán)重威脅人民的生命安全和身體健康。面對(duì)新冠肺炎疫情，只有做到早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療，才能進(jìn)一步控制疾病的傳播。目前，臨床診斷新冠肺炎主要采用病毒核酸檢測(cè)，但由于該方法受到操作環(huán)境、儀器設(shè)備和操作人員等因素的限制，血清學(xué)檢測(cè)越來(lái)越引起人們的重視。目前，基于抗體的診斷指標(biāo)已經(jīng)被歸入《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案（試行第7版）》，以實(shí)現(xiàn)對(duì)核酸檢測(cè)的有效補(bǔ)充，這大大提升了新冠肺炎早期確診的準(zhǔn)確率，可為后期臨床治療進(jìn)行輔助判定。截至2020年7月，在國(guó)家藥品監(jiān)督管理局網(wǎng)站可查到的取得注冊(cè)證的新型冠狀病毒（以下簡(jiǎn)稱“新冠病毒”）檢測(cè)試劑盒為44種，其中抗體檢測(cè)試劑盒21種，占47.7%；核酸檢測(cè)試劑盒23種，占52.3%；新冠病毒免疫類試劑盒中膠體金法抗體檢測(cè)試劑盒取得注冊(cè)證的為7種，占15.9%；無(wú)抗原檢測(cè)試劑盒獲批。膠體金法抗體檢測(cè)試劑盒憑借其耗時(shí)較短、成本低、不易受到環(huán)境限制且操作簡(jiǎn)便快捷等優(yōu)點(diǎn)在此次疫情防控中發(fā)揮了重要作用，但特異性差、陽(yáng)性檢出率低、陰性樣本易出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果、檢出限高是這類試劑盒的主要問題。本研究選擇具有代表性的6種國(guó)產(chǎn)IgG抗體檢測(cè)試劑盒（膠體金法），測(cè)試15例陽(yáng)性樣本，比較其陽(yáng)性符合率，并通過(guò)20例陰性樣本和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)來(lái)比較試劑盒陰性符合率和檢出限。

1材料與方法

1.1樣本及標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

根據(jù)國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)發(fā)布的《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案（試行第七版）》中確診病例判斷標(biāo)準(zhǔn)，選擇感染1周后的陽(yáng)性滅活樣本15例以及同期健康體檢者陰性滅活血清樣本20例。

采用新冠病毒刺突糖蛋白（S蛋白）人源IgG單克隆抗體溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)編號(hào)：GBW(E)091109。使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)說(shuō)明書中推薦的0.01mol/L磷酸緩沖鹽溶液（phosphatebuffersaline,PBS)(pH=7.4）將標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分別按照1∶2、1∶4、1∶8、1∶12、1∶16的比例稀釋，加上原倍液，共6個(gè)水平。本研究采用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是以新冠病毒重組刺突糖蛋白（S蛋白）為免疫原篩選出的IgG單克隆抗體進(jìn)行人源化改造的模擬人血清。而6種試劑盒均為定性檢測(cè)，未規(guī)定檢出限。因此用不同梯度稀釋國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)測(cè)試檢出限時(shí)，不對(duì)具體濃度進(jìn)行關(guān)注，只橫向比較稀釋度。

1.2試劑及儀器

新冠病毒IgG抗體檢測(cè)試劑盒分別來(lái)自于A、B、C、D、E、F6個(gè)國(guó)內(nèi)生產(chǎn)廠家。檢測(cè)原理：在膠體金試條的檢測(cè)線位置包被重組新冠病毒抗原（S蛋白），當(dāng)樣本中含有新冠病毒IgG抗體時(shí)，檢測(cè)線處的抗原與其結(jié)合，同時(shí)，該抗體與被膠體金標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體結(jié)合，則在檢測(cè)線處形成肉眼可見的條帶。當(dāng)質(zhì)控線處和檢測(cè)線處均顯示條帶時(shí)，則判為陽(yáng)性；當(dāng)質(zhì)控線處顯示條帶，而檢測(cè)線處無(wú)條帶時(shí)，則判為陰性。

所需儀器和設(shè)備為生物安全柜、移液器（德國(guó)Eppendorf公司，規(guī)格為2～20μL）。

1.3方法

1.3.1試劑盒檢測(cè)方法

應(yīng)嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書的要求操作，注意說(shuō)明書中對(duì)環(huán)境條件的要求。具體操作過(guò)程見表1,6個(gè)生產(chǎn)廠家說(shuō)明書中對(duì)檢測(cè)條件的要求基本相同，其中有1個(gè)廠家沒有明確上樣量。

1.3.2陽(yáng)性符合率

按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作，分別取6種檢測(cè)試劑盒測(cè)試15例滅活的臨床陽(yáng)性樣本，每個(gè)樣本檢測(cè)1次。

1.3.3陰性符合率

按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作，分別取6種檢測(cè)試劑盒測(cè)試20例滅活的臨床陰性樣本，每個(gè)樣本檢測(cè)1次。

1.3.4檢出限

按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作，分別取6種檢測(cè)試劑盒測(cè)試國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稀釋液，每個(gè)水平檢測(cè)3次，共6個(gè)水平。

1.4數(shù)據(jù)分析

計(jì)算試劑盒的陽(yáng)性符合率和陰性符合率，對(duì)照檢出限結(jié)果，比較6種試劑盒之間的差異。

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