1.3數(shù)據(jù)處理

采用美國鍆金埃爾默公司Simplicioy3Q數(shù)據(jù)分析軟件。

2結(jié)果與分析

2.1色譜條件優(yōu)化

采用BrownleeSPPC₁₈柱(2.1mm×50mm，1.7μm)進(jìn)行分離，該色譜柱對極性和非極性化合物均有較好的保留，由于C₁₈柱可能對含有長鏈烷基的季銨鹽保留作用較強(qiáng)，洗脫所需時問較長，容易引起色譜峰形拖尾。為了改善色譜峰形，實(shí)驗(yàn)時在流動相中加入了乙酸銨，為了驗(yàn)證這一猜想，本實(shí)驗(yàn)同時考察了日標(biāo)分析物在甲醇-水、甲醇-5mmol/L乙酸銨水溶液、5mmo1/L乙酸銨甲醇溶液-5mm01/L乙酸銨水溶液等三種流動相體系下的色譜分離效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)未加入乙酸銨時，含有長鏈的季銨鹽均有不同程度的拖尾，僅在水相中加入乙酸銨時也存在輕微的拖尾現(xiàn)象，同時在水相和甲醇相中加入乙酸銨時月標(biāo)物的峰形對稱。實(shí)驗(yàn)繼續(xù)考察了加入乙酸銨量分別為2.5、5、7.5、10mmo1/L時色譜分離的效果，結(jié)果表明當(dāng)乙酸銨在濃度為5和7.5mmol/L時，各季銨鹽均能得到良好分離，且色譜峰尖銳，響應(yīng)最為靈敏，最終選擇了5mmol/L乙酸銨甲醇溶液和5mmol/L乙酸銨水溶液作為流動相。

適當(dāng)?shù)奶荻攘芟闯绦蚰軌蚴鼓繕?biāo)物在最短的時問內(nèi)得到更好的分離，優(yōu)化后的梯度程序見BrownleeSPPC₁₈柱(2.1mm×50mm，1.7μm)。梯度淋洗：A-5mmol/L乙酸銨水溶液，B-5mmol/L乙酸銨甲醇溶液；0.00～0.50min，30％A；0.50～3.00min，30％～10％A；2.00～4.00min，10％～2％A；4.00～6.50min，2％～0A；6.50～6.60min，0～30％A；6.60～7.00min30％A；柱溫箱溫度：40℃的色譜條件。實(shí)驗(yàn)同時考察了柱溫箱溫度為20、30、40、50℃時的情況，未能使實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)明顯變化，考慮到實(shí)驗(yàn)需要保持各項參數(shù)的穩(wěn)定，故選擇接近室溫的20℃作為柱溫箱溫度。

2.2質(zhì)譜條件優(yōu)化

季銨鹽易失去鹵素離子得到正離子，故選擇EST+模式進(jìn)行掃描。將配制好的各季銨鹽抑菌劑標(biāo)準(zhǔn)溶液通過針泵引入的方式注入離子源進(jìn)行離子化，先用Ql全掃捕確定標(biāo)準(zhǔn)品中目標(biāo)物的[M-X]⁺的母離子峰，調(diào)整流速、入口電壓(entrancevo1tage，EV)、電離電壓等參數(shù)使母離子峰達(dá)到最大值，再用子離子掃描模式，改變碰撞電壓(co11isionvo1tage，CE)值，選擇兩對信號最強(qiáng)、最穩(wěn)定的子離子作為定性定量離子，優(yōu)化其碰撞能量，使離子對的信號強(qiáng)度達(dá)到最大值，確定好以上參數(shù)后，采用多反應(yīng)監(jiān)測模式(multiplereactionmonitoring，MRM)進(jìn)行檢測，各子離子的駐留時問為100ms。最終在優(yōu)化的色譜、質(zhì)譜條件下，得到如圖1所示的各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度為10μg/L時的多反應(yīng)監(jiān)測色譜圖。TAC出峰快，保留時間0.74min，BDAB保留時間2.71min，DTAC保留時間2.42min，TDBAC保留時間3.19min，BDHAC保留時問3.74min，DDAC保留時問3.30min，六種季銨鹽類抑菌劑在優(yōu)化的條件下分離效果好，峰形對稱。

留時問3.74min，DDAC保留時問3.30min，六種季銨鹽類抑菌劑在優(yōu)化的條件下分離效果好，峰形對稱。

2.3提取溶劑優(yōu)化和體積優(yōu)化

通過對6種季銨鹽類抑菌劑的極性考察，試驗(yàn)了水、乙腈、甲醇和乙醇4種極性溶劑對目標(biāo)物的提取效果。結(jié)果如圖2所示，其中水和乙醇的提取效果相對不佳，乙腈的提取能力優(yōu)于水和乙醇，甲醇對6種季銨鹽抑菌劑的提取效果最佳，可能是甲醇自身良好的滲透性和合適的極性使得其對目標(biāo)物提取能力較強(qiáng)。

本研究同時考察了提取劑體積對目標(biāo)物提取效果的影響，選取了5、7.5、10、12.5、15mL不同體積的甲醇作為實(shí)驗(yàn)條件。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3所示，甲醇的提取能力隨著體積的增加而增強(qiáng)，于10mL處趨于飽和，隨著體積的繼續(xù)增加，部分目標(biāo)物如BDAB、DDAC的相對豐度反而下降，可能是過量甲醇提取引起的基質(zhì)效應(yīng)導(dǎo)致。綜上所述，本研究最終選取10mL甲醇作為本方法的最終優(yōu)化條件。

2.4提取時間優(yōu)化

提取時問是指提取劑和樣品接觸后從超聲開始到結(jié)束的時間，提取時問過短，提取小夠充分；提取時問過長會帶入過多干擾物質(zhì)同時甲醇可能揮發(fā)較多，降低提取效率，耗費(fèi)的時間和能量過多。本研究考察了提取時問為1、2、3、4和5min時的提取效果，結(jié)果如圖4所示。，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)當(dāng)提取時問為3min時效果最佳。綜上所述，選取3min為最佳提取時間。

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