2恰瑪古中的有效成分提取

2.1黃酮提取

翟金蘭等探討了微波功率、料液比和微波處理時間對類黃酮提取效果的影響，微波輔助提取恰瑪古中類黃酮物質(zhì)較佳工藝參數(shù)為乙醇體積分數(shù)70%、輸出功率450 W、微波處理時間70 s、料液比1∶20(g/mL),在此條件下類黃酮物質(zhì)質(zhì)量分數(shù)為0。502%,微波法與常規(guī)的水浴加熱法比較可顯著縮短提取時間，提高提取效率。馬菁等以新疆恰瑪古為原料，使用微波乙醇萃取技術(shù)提取其中類黃酮成分，研究了乙醇濃度、料液比、微波功率和萃取時間4個因素對生物類黃酮含量的影響。以類黃酮的含量為指標，通過響應面分析，對提取工藝條件進行優(yōu)化，最優(yōu)條件為：乙醇體積分數(shù)72%,料液比1∶12(g/mL),微波功率435 w,萃取時間80 s,在此條件下恰瑪古中的類黃酮含量為0。636 8 g/100 g。帕麗達·阿布利孜等采用索氏提取恰瑪古種子中的黃酮類化合物，提取工藝為30倍原料質(zhì)量、體積分數(shù)75%乙醇、提取時間120 min提取的黃酮質(zhì)量分數(shù)2。805%。

2.2多糖提取

趙瀅等用響應面法優(yōu)化超聲輔助提取蔓菁多糖，其最優(yōu)提取條件為：液料比44∶1(mL/g)、提取溫度57℃、提取時間56 min、超聲功率180 W,在此條件下蔓菁多糖得率為65。43%。劉藝采用水提法提取陜西合陽恰瑪古多糖，工藝為料液比1∶2(g/mL)、溫度100℃、提取1 h、1次，并用3,5-二硝基水楊酸比色法測定含量，結(jié)果表明，合陽恰瑪古多糖的平均質(zhì)量分數(shù)為21。78%。高文軍等以葡萄糖為對照品，3,5-二硝基水楊酸用量2。0 mL,90℃水浴6 min,540 nm波長下測定蔓菁中還原糖和總糖質(zhì)量分數(shù)分別為5。86%～6。93%和44。65%～46。50%。

2.3硫代葡萄糖苷提取

目前，恰瑪古中硫代葡萄糖苷提取工藝主要為高溫水煎煮,而在此條件下，硫代葡萄糖苷極易發(fā)生降解，引起成分變化。張濤等應用溶劑法和酸性氧化鋁提取、分離、純化恰瑪古硫代葡萄糖苷，并優(yōu)選出最佳提取分離工藝，但其產(chǎn)率仍然偏低，但可以避免硫代葡萄糖苷在水提取過程中的降解損失問題。由此推測，可能是硫代葡萄糖苷在恰瑪古藥材中的含量較低，并且該成分以苯甲基硫代葡萄糖苷計算，得到的提取物為多種硫代葡萄糖苷混合物。目前大部分研究人員應用酸性氧化鋁填料來進行純化。

2.4脂肪酸提取

彭彤等利用氣質(zhì)聯(lián)用分析，恰瑪古揮發(fā)油中的化學成分，涵蓋了烷烴、烯烴、芳香環(huán)、脂肪酸類、酯類和硫醚類化合物。其中主要成分為丙酸異丙酯、辛烷、2-甲基庚烷、正壬烷、二甲基三硫醚、3-甲基庚烷、二甲基二硫醚、1-辛烯、乙酸異丁酯和油酸己酯等。王強等用GC與GC-MS聯(lián)用技術(shù)對恰瑪古子油中的脂肪酸成份進行了定性與定量的分析，共鑒定出7種脂肪酸：棕櫚酸、亞油酸、油酸(Z)、油酸(E)、16-甲基-十七烷酸、二十碳烯-11-酸和花生四烯酸。

2.5其他成分提取

海仁古麗·麥麥提等采用超聲波提取恰瑪古中總多酚，工藝為固液比1∶30、乙醇體積分數(shù)40%、時間30 min、功率159 W,并用紫外分光光度計法測定總多酚含量為13。09 mg/g。周芳對阿克蘇恰瑪古體積分數(shù)75%乙醇提取物乙酸乙酯部位、水飽合正丁醇部位的化學成分進行分離。綜合利用硅膠、葡聚糖凝膠(Sephadex LH-20)柱色譜、重結(jié)晶等方法，分離得到5個單體化合物，利用1H-NMR,13C-NMR并結(jié)合化學方法對4個單體化合物結(jié)構(gòu)進行解析，鑒定的化合物為：槲皮素、β-谷甾醇、蔗糖和正二十四烷，其中槲皮素、正二十四烷為首次從該植物中分離得到。馬彥玲將恰瑪古干燥種子用95%乙醇提取，浸膏通過不同極性的溶劑萃取，再將得到的石油醚部位、乙酸乙酯部位、及正丁醇部位分別采用硅膠柱層析、大孔吸附樹脂、Sephadex LH-20、制備薄層色譜和重結(jié)晶等方法進行分離純化，從恰瑪古種子萃取后的各部位分離并鑒定了8個化合物的結(jié)構(gòu)，分別為：齊墩果酸、β-谷甾醇、軟脂酸單甘油脂、鄰苯二甲酸二丁酯、熊果酸、槲皮素、山萘酚-3-O-蕓香糖苷和5-羥基-3′,4′,6,7-四甲氧基黃酮，其中化合物齊墩果酸、軟脂酸單甘油脂、鄰苯二甲酸二丁酯、熊果酸、槲皮素、山萘酚-3-O-蕓香糖苷和5-羥基-3′,4′,6,7-四甲氧基黃酮為首次從恰瑪古種子中得到。

3恰瑪古的藥理研究

3.1歷代文獻

縱觀歷代文獻，其運用豐富多彩，蕪菁根《食療本草》:“主消渴，治熱毒風腫”;《肘后方》:“搗敷豌豆瘡，有根丁瘡，卒腫毒起急痛和犬咬傷瘡”;《千金方》:“和鹽搗敷一切熱腫毒，研末酒后服以辟酒氣”;《兵部手集方》:“搗敷乳癰痛寒熱者”;《本草從新》:“末服解酒毒”。

蕪菁子《名醫(yī)別錄》:“主明目”;《本草綱目》:“辛、苦、平，無毒，可升可降，能汗能吐，能下能利小便，又能明目解毒，其效甚偉”。

《大醫(yī)典》:“生發(fā)烏發(fā)，潤喉順氣，滋補腎臟，通利關(guān)節(jié)等，治喉燥氣短，腎臟瘦虛，骨節(jié)不利等”;《藥物寶庫》:“潤肺止咳，軟腸通便，開胃增食，溶石排石，通利小便等”。

當代《維吾爾藥志》中記載：蕪菁味甘、辛、苦，性溫。入胃、肝、腎三經(jīng)。開胸順氣、健胃消食、解毒，用于胸悶腹胃脹痛、食欲不振、瘡癤腫毒等疾。鮮品、搗汁、干品均可用：內(nèi)服6～19 g,外用適量。

3.2當代研究

3.2.1降血糖作用

采用常規(guī)的水提法從恰瑪古中提取出粗多糖，并用Sevag法對其脫去蛋白，再通過回流、透析等方法把粗多糖純化得到精制多糖，進而用恰瑪古精制多糖進行小白鼠血糖試驗。首先對恰瑪古精制多糖進行DEAE-52離子交換柱層析純化，對第一個洗脫得到組分BRPS1進行葡聚糖凝膠(Sephadex G-200)柱層析純度鑒定。然后，采用紅外光譜法分析BRPS1,并且對離子交換柱層析法洗脫得到的7種組分分別進行GC-MS分析。當劑量為400 mg/kg體質(zhì)量時，3 d后的受試小鼠血糖值下降差異顯著(P<0。05);6 d和9 d后的血糖值下降差異極顯著(分別是P<0。01和P<0。001),說明恰瑪古多糖具有顯著的降血糖效果。海仁古麗·麥麥提等研究發(fā)現(xiàn)，恰瑪古中性多糖對糖尿病模型有降血糖作用，高劑量組(0。20 g/kg)降血糖效果略強于中(0。10 g/kg)、低劑量組(0。05 g/kg)。

3.2.2增強免疫作用

通過紫外分光光度法測定小鼠血清中IgM抗體的水平和小鼠單核巨噬細胞對血流中碳粒的清除能力；測定小鼠耳廓腫脹度來考察恰瑪古蜜膏對二硝基氯苯誘導的小鼠遲發(fā)型超敏反應的作用；采用鏡檢計數(shù)觀察小鼠腹腔巨噬細胞吞噬紅細胞的能力，以研究恰瑪古蜜膏對小鼠免疫功能的影響。試驗結(jié)果顯示，恰瑪古蜜膏有提高小鼠腹腔巨噬細胞吞噬作用的能力，可明顯增強皮膚試驗所引起的遲發(fā)型超敏反應，還有増強小鼠單核巨噬細胞清除血液中碳粒的功效，并能提升小鼠血清中IgM抗體水平。因此，根據(jù)試驗結(jié)果可判定恰瑪古蜜膏具有良好的增強免疫功能的作用，是一種良好的免疫促進劑。恰瑪古內(nèi)富含的硫化葡萄糖苷物質(zhì)，水解后可產(chǎn)生芥子油，其具有增進食欲、促進腸胃蠕動、幫助消化和稀釋毒素等作用,此有效成分能改善患者的消化道功能，降低藥物引起的毒副作用，降低患者不良反應出現(xiàn)頻率，促進體內(nèi)吸收營養(yǎng)物質(zhì)的功能，使得患者營養(yǎng)狀況趨向改善。此外，恰瑪古富含鈣、磷、鐵等元素，本身也有入胃、肝、腎三經(jīng)，開胸順氣、健胃消食、解毒等藥理作用，可調(diào)節(jié)人體電解質(zhì)平衡，具有調(diào)節(jié)免疫的功效。恰瑪古膠囊可提高FOLFIRI患者的KPS評分，改善其體力狀態(tài)，對其免疫系統(tǒng)有正向調(diào)節(jié)作用。

3.2.3抗輻射作用

安熙強等用總劑量為6 Gy的60Co-γ輻射制備小鼠損傷模型，恰瑪古粉灌胃恰瑪古密膏口服給藥，測定小鼠質(zhì)量、外周血象、脾指數(shù)、胸腺指數(shù)以及骨髓嗜多染紅細胞(Polychromatic erythrocytes,PCE)微核率的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，一定濃度的恰瑪古粉對小鼠輻射后免疫系統(tǒng)和造血系統(tǒng)的損傷具明顯防護和修復作用；與模型組比較，給藥各組PCE微核率明顯下降(P<0。05),恰瑪古粉和蜜膏具有一定的抗突變作用。恰瑪古粉和恰瑪古蜜膏抗輻射效果近似。

3.2.4抗癌作用

候?qū)毩盅芯堪l(fā)現(xiàn)，恰瑪古多糖能明顯抑制肺腫瘤細胞生長，延長小鼠的存活時間，并指出恰瑪古多糖配合環(huán)磷酰胺聯(lián)合用藥可提高療效：恰瑪古多糖高劑量組抑瘤率為55%,配合環(huán)磷酰胺聯(lián)合用藥組抑瘤率為71%。國外流行病學研究證實了蔬菜對預防某些腫瘤發(fā)生有顯著的效果。有研究表明恰瑪古中具有含量較高的硫代葡萄糖苷,這一成分在細菌酶亦或是芥子酶催化下能夠降解并生成異硫氰酸鹽，硫代葡萄糖苷及其降解生成的產(chǎn)物是一種化學保護劑，能預防多種癌癥發(fā)生。肖春霞通過恰瑪古膏治療大腸癌FOLFOX4化療后脾虛濕盛型患者，經(jīng)臨床觀察恰瑪古膏可降低FOLFOX4化療后白細胞下降發(fā)生率，可改善白細胞下降程度。恰瑪古膏可以改善FOLFOX4化療后中醫(yī)癥狀積分増加、KPS評分下降及免疫指標下降，從而發(fā)揮減毒功效。但是恰瑪古膏不可預防血紅蛋白下降、不能提高化療完成率。張濤等通過動物體內(nèi)抗腫瘤試驗，觀察其對小鼠肉瘤S180、結(jié)腸癌CT-26的抑制作用。研究發(fā)現(xiàn)恰瑪古硫代葡萄糖苷最佳提取工藝為加8倍量體積分數(shù)95%乙醇回流提取2次，每次1 h。酸性氧化鋁純化該成分的最佳工藝條件為洗脫液KNO3濃度0。15 mol/L,上樣液質(zhì)量濃度1 g/mL、洗脫液用量6倍于柱體積。該提取物對小鼠移植性肉瘤S180、結(jié)腸癌CT-26均顯示出劑量依賴性的抗腫瘤作用。說明酸性氧化鋁對于恰瑪古硫代葡萄糖苷具有一定的富集純化作用，而且其提取物具有抗腫瘤活性。杜琳等通過色譜技術(shù)，對恰瑪古乙醇提取物的化學成分進行系統(tǒng)研究，其中分離出來的兩個三萜類化合物經(jīng)細胞毒性測試，對5種的常見癌細胞均有一定的抑制作用。

3.2.5抗菌作用

有研究表明十字花科蔬菜可預防多種癌癥的發(fā)生，這與十字花科植物富含硫代葡萄糖苷有關(guān)，且相關(guān)研究證實硫代葡萄糖苷除了具有抗癌功效外，其水解產(chǎn)物對植物抵抗細菌、真菌、病毒和蚜蟲都有重要作用。劉藝研究了蕪菁硫代葡萄糖苷的抑菌活性，將硫代葡萄糖苷分成高、中、低3個劑量組。試驗結(jié)果證實，合陽蔓菁總硫苷粗提液各濃度對大腸桿菌(Escherichia coli)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)都有一定的抑制作用，而對枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)則沒有明顯的抑菌活性，且對與大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑制作用表現(xiàn)出一定的量效關(guān)系，兩者比較合陽蔓菁硫苷對金黃色葡萄球菌的抑菌作用好于對大腸桿菌的抑菌作用。王文寧等研究發(fā)現(xiàn)，蔓菁可以促進小鼠腸道內(nèi)有益菌的增殖，抑制致病菌的增殖；同時可以促進小鼠腸道短鏈脂肪酸的產(chǎn)生。

3.2.6抑制甲狀腺素合成的作用

大鼠試驗表明經(jīng)恰瑪古提取物飼喂7個月，可提高甲狀腺中酪氨酸的量，降低甲氨酸的量，說明其具有干擾甲狀腺素后階段合成的功能。

3.2.7抗突變作用

恰瑪古中的葉綠素、維生素、微量元素可能是其抗誘變原因。錢曉薇等對80只小鼠進行腹腔內(nèi)注射環(huán)磷酰胺0。145 g/kg 2次，后取股骨PCE觀察其微核千分率。試驗證實：恰瑪古葉汁及恰瑪古塊根汁降低環(huán)磷酰胺誘發(fā)的小鼠PCE微核率及小鼠骨髓細胞染色體畸變率的機理，可能與其所含葉綠素、維生素、微量元素及其它可能有的抗突變成分有關(guān)，或者是上述成分共同作用的結(jié)果。

3.2.8抗衰老作用

《食療本草》記載：“久蒸久暴；搗為粉，服之長生”。王花等研究發(fā)現(xiàn)，恰瑪古對于D-半乳糖誘發(fā)的亞急性衰老模型有明顯的延緩衰老作用，它能拮抗自由基損傷，減少D氨基半乳糖胺衰老模型小鼠血液丙二醛含量，提高血清超氧化物歧化酶活力與肝組織谷胱甘肽過氧化物酶活力，提高脾和胸腺重量指數(shù)，增強免疫功能，從而達到延緩衰老的目的。

3.2.9抗疲勞

蔡嘯鏑等研究發(fā)現(xiàn)，恰瑪古多糖對運動小鼠具有較好的抗疲勞活性，且濃度越大，抗疲勞活性越強。以小鼠負重游泳時間、小鼠血清尿素氮含量為比較對象；相比于生理鹽水對照組，恰瑪古多糖各試驗組負重游泳時間均有延長，血尿素氮含量明顯低于生理鹽水對照組，而且恰瑪古多糖濃度越大，血尿素氮含量越低。周林研究發(fā)現(xiàn)，恰瑪古多糖對運動小鼠具有較好的抗疲勞活性。以小鼠游泳時間為比較對象，相比于空白對照組，恰瑪古多糖在每次0。33～0。59 g/kg劑量范圍內(nèi)有明顯的抗疲勞活性。唐偉敏研究表明，恰瑪古多糖對負重運動小鼠具有良好的抗疲勞活性；以小鼠負重游泳時間為比較對象，相比于正常組，恰瑪古多糖各試驗組負重游泳時間均有顯著延長，前5 min平均游泳速率都有提高。

3.2.10其他藥理作用

錢曉薇以清潔級ICR小白鼠為試驗動物，采用小鼠骨髓PCE微核試驗、小鼠精子畸形試驗以及分光光度法測定小鼠肝臟過氧化氫酶(Catalase,CAT)活性等試驗方法，研究了溫州市區(qū)交通污染物對小鼠的遺傳毒性及恰瑪古塊根汁對它的拮抗效應。結(jié)果表明各試驗點的灌恰瑪古汁組的小鼠PCE微核率、精子畸形率以及CAT活性均明顯低于相應的處理組。微核抑制率及CAT活性抑制率均為：十里亭的>火車站的>南站的；精子畸形抑制率為：火車站的>十里亭的>南站的。說明恰瑪古汁對交通污染物誘導的小鼠PCE微核率、精子畸形率及CAT活性增高效應均具有較強的拮抗作用。錢曉薇以野生型果蠅、白眼果蠅為實驗動物，研究不同濃度恰瑪古塊根汁在不同溫度、不同空間下對其發(fā)生量的影響，在20℃下5%、10%、20%這3種質(zhì)量分數(shù)蕪菁汁對白眼果蠅在廣口瓶內(nèi)的發(fā)生量的影響與野生型果蠅的不同，前者增加幅度分別為-24。23%、14。62%、22。01%,而后者則分別為-25。35%、-17。27%、-17。91%,對白眼果蠅發(fā)生量的影響為低濃度的起抑制作用、中濃度和高濃度均起促進作用，對野生型果蠅發(fā)生量的影響則3種濃度均起抑制作用。25℃下20%質(zhì)量分數(shù)蕪菁汁使白眼果蠅在試管、廣口瓶內(nèi)的發(fā)生量增幅分別為64。51%、-10。11%,說明溫度、濃度相同時大空間內(nèi)白眼果蠅的發(fā)生量反而要小于小空間的，此條件下的小空間可能更有利于白眼果蠅的繁殖和生長，表明不同濃度蕪菁汁對不同溫度下的不同品系果蠅在不同培養(yǎng)瓶內(nèi)的發(fā)生量的影響不同。張謙筱等、趙瀅等研究發(fā)現(xiàn)，恰瑪古多糖具有抗氧化活性，能夠清除羥基自由基和DPPH自由基，低濃度的多糖就能達到較好的抗氧化作用。恰瑪古成熟的種子具有補腎生精，健脾消食之功能，常用于性功能減退等癥。

3.3食品研究

鮮恰瑪古可切片、切絲、切塊直接食用，也可以與羊肉燉服做成一款具有通腸開胃、消食化滯的藥膳。

目前，新疆柯坪縣圣泉實業(yè)有限公司已經(jīng)批量生產(chǎn)了以恰瑪古提取物為主要成分的口服液、膠囊、蜜膏、精油等系列產(chǎn)品。近期已完成恰瑪古蜜膏急性毒性試驗。公司研究了恰瑪古蜜膏和恰瑪古粉對小鼠免疫功能的影響，通過測定小鼠耳廓腫脹度，觀察對二硝基氯苯誘導小鼠遲發(fā)型超敏反應的影響；通過紫外分光光度法測定觀察小鼠單核巨噬細胞對血流中碳粒的清除能力；紫外分光光度法測定小鼠血清IgM抗體水平；鏡檢計數(shù)觀察小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞的能力。結(jié)果顯示恰瑪古蜜膏14 g/kg劑量與恰瑪古粉12 g/kg劑量能明顯抑制二硝基氯苯誘導的小鼠遲發(fā)型超敏反應、促進小鼠血清中IgM抗體的生成，恰瑪古粉6 g/kg和12 g/kg劑量能明顯提高小鼠單核巨噬細胞對血流中碳粒的清除能力、提高小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞的能力。恰瑪古蜜膏和恰瑪古粉均可調(diào)節(jié)機體的免疫功能，恰瑪古粉的作用略優(yōu)于恰瑪古蜜膏。

4討論與展望

恰瑪古是維吾爾族傳統(tǒng)的藥食兩用植物，含有多種有價值的化學成分，具有廣泛的生物活性，研發(fā)前景廣闊。隨著社會進步和人們生活水平的提高，人們愈來愈關(guān)注健康和生活的質(zhì)量，恰瑪古作為新疆的地道藥材，食用方便，且具有抗菌、降血糖、抗癌、抗輻射和增強機體免疫力等廣泛用途而被越來越多的學者所關(guān)注，但是目前對恰瑪古化學成分及活性的研究還相對較少，且對于恰瑪古有效成分的研究還處于新化合物的發(fā)現(xiàn)和結(jié)構(gòu)的測定階段，對于恰瑪古有效成分的構(gòu)效關(guān)系、生物活性的測定方面的研究相對較少。恰瑪古中硫代葡萄糖苷提取工藝主要有高溫水煎煮、溶劑法和酸性氧化鋁提取，但這幾種方法提取硫代葡萄糖苷極易發(fā)生降解，引起成分變化，產(chǎn)率偏低，所以改進恰瑪古中硫代葡萄糖苷提取工藝，減少其降解，是今后研究的方向。恰瑪古水提物對延長果蠅壽命的影響可能與其所含的微量元素或某些特殊成分有關(guān)，其詳細機理有待于進一步的研究和探討。因而，對恰瑪古化學成分進行深入的研究，明確各化合物的提取、純化的方法，了解其構(gòu)效關(guān)系，探討其作用機理對于恰瑪古有效成分的開發(fā)利用及保健品、新藥的研制將有重要的指導意義。

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