中藥材猴耳環(huán)FoliumArchidendri為豆科植物猴耳環(huán)Archidendronclypearia(Jack.)Nielsen的干燥葉，具有抗真菌、抗病毒、抗炎、抗過敏、抗腫瘤、抗胃潰瘍和抗結(jié)核等藥理作用。目前，對猴耳環(huán)的研究多集中在品種歸屬、化學成分分離與藥理作用，尚未見關(guān)于其農(nóng)藥殘留的報道。本課題組在調(diào)研過程中發(fā)現(xiàn)，在猴耳環(huán)種植過程中存在使用未登記農(nóng)藥現(xiàn)象，對其農(nóng)藥殘留處于監(jiān)管盲區(qū)，導致其使用存在安全隱患。鑒于此，本研究選擇47種農(nóng)藥進行篩查，包括：①課題組實地調(diào)查中發(fā)現(xiàn)種植過程中使用過的農(nóng)藥；②《中華人民共和國藥典》(以下簡稱《中國藥典》)2020年版通則“農(nóng)藥多殘留檢測法第五法藥材與飲片(植物類)中禁用農(nóng)藥多殘留測定法”中收錄的部分禁用農(nóng)藥及農(nóng)藥代謝物；③適用于高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測的農(nóng)藥。根據(jù)猴耳環(huán)基質(zhì)的特點，采用乙腈提取、HLB固相萃取柱凈化的前處理方式，建立了一種簡便、快速、穩(wěn)定性好的農(nóng)藥多殘留快速篩查方法。

1.材料與方法

1.1儀器與藥劑

3200QTRAP質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國ABsciex公司，分析軟件Analyst1.6.3)；1200高效液相色譜儀(美國Agilent公司)；AG245和XP-26電子分析天平(瑞士MettlerToledo公司)；MaxiMixⅡ渦旋混合器(美國Thermo公司)；ST-16高速勻漿儀(德國IKA公司)；Milli-Q超純水制備系統(tǒng)(美國MilliQ公司)。47種農(nóng)藥標準品(表1)包括45種液體(濃度均為1000mg/L)及苯線磷砜和涕滅威砜2種固體(純度≥98%)，德國Dr.EhrenstorferGmbH公司；乙腈和丙酮(色譜純)，德國Merck公司；醋酸(色譜純)、乙酸氨(色譜純)和氯化鈉(分析純)，上海安普科技有限公司；Oasis親水親油平衡材料(HLB)固相萃取柱(規(guī)格200mg，6mL)，美國Waters公司；20批次猴耳環(huán)樣品由廣州萊泰制藥有限公司提供。

1.2試驗方法

1.2.1樣品前處理

將猴耳環(huán)樣品粉碎，過三號篩后，稱取5g(精確到0.01g)于50mL聚苯乙烯聚塞離心管中，加入1g氯化鈉，混勻，加入20mL乙腈，于8000r/min下勻漿提取20min，于3500r/min下離心5min；收集上清液，重復(fù)提取兩次；合并上清液，于40℃水浴濃縮至3～5mL，用1～2mL乙腈多次洗滌并轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，搖勻，于3500r/min下離心3min；取3mL上清液，過HLB固相萃取柱(無需活化，直接上樣過柱)，收集全部凈化液，混勻，待測。農(nóng)藥空白猴耳環(huán)基質(zhì)同法制備。

1.2.2高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測條件

色譜條件：菲羅門KinetexC18色譜柱(100mm×2.1mm,2.6μm)及預(yù)保護柱(4mm×2.0mm，2.6μm)；流動相A相為95%乙腈(含5mmol/L甲酸銨和0.1%甲酸)，B相為水(含5mmol/L甲酸銨和0.1%甲酸)。梯度洗脫程序：0～1min，30%A；＞1～12min，30%→100%A；＞12～14min，100%A；＞14～15min，100%→30%A；＞15～20min，30%A。流速0.3mL/min；柱溫40℃；樣品盤溫度20℃。進樣體積2μL。

質(zhì)譜條件：電噴霧離子源正離子掃描模式(ESI+)，依賴保留時間的多反應(yīng)監(jiān)測模式(scheduledMRM)，檢測窗60s。氣簾氣(CUR)0.01MPa，碰撞氣(CAD)0.06MPa，噴霧電壓(IS)5500V，離子化溫度(TEM)600℃，霧化氣(GS1)與輔助氣(GS2)均為0.35MPa。47種農(nóng)藥保留時間及高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜參數(shù)見表1。

1.2.3標準溶液配制及標準曲線繪制

農(nóng)藥單一標準溶液：分別準確吸取45種液態(tài)農(nóng)藥標準品溶液(1000mg/L)1.0mL，用丙酮稀釋，配制成質(zhì)量濃度為100μg/mL的農(nóng)藥單一標準儲備液；準確稱取苯線磷砜和涕滅威砜2種固態(tài)農(nóng)藥標準品5mg(精確至0.001mg)，用丙酮溶解，配制成質(zhì)量濃度為100μg/mL的農(nóng)藥單一標準儲備液。所有儲備液均于-30℃保存。

農(nóng)藥混合標準溶液：移取一定體積的47種農(nóng)藥單一標準儲備液，用乙腈稀釋，配制成農(nóng)藥混合標準溶液(表2)，于-30℃保存。

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相關(guān)鏈接：苯線磷砜，涕滅威砜，聚苯乙烯，甲酸銨