隨著現(xiàn)代人們生活水平的不斷提高，健康意識也越來越強，但過快的生活節(jié)奏和較大的工作壓力，易使身體長期處于精力不夠、失眠多夢的亞健康狀態(tài)。因此，具有相應調(diào)理作用、食用方便、副作用小、可長期服用的保健食品，受到消費者的青睞。其中，緩解疲勞類和改善睡眠類的保健食品較為暢銷，品種也較多。

然而，保健品行業(yè)過快、過熱發(fā)展，使市場出現(xiàn)不法商家為牟利在保健品食品中違禁添加大量、多種非法化學藥物成分的不法現(xiàn)象。由于產(chǎn)品標簽中沒有標明添加的藥物成分及劑量，消費者在不知情的情況下攝入，易引起不良反應，對健康造成嚴重危害，進而影響保健食品行業(yè)良性發(fā)展。

目前，保健食品中添加違禁藥物的檢測方法較多，包括：分光光度法、薄層色譜法、高效液相色譜法、色譜-質(zhì)潛法等。由于保健食品的基質(zhì)較為復雜，這些檢測方法存在檢測組分單一、分離效果差、定性準確度不夠、難以鑒別結(jié)構(gòu)相似物、檢測耗時較長等問題，無法滿足高通量檢測的需要。

而國家藥品監(jiān)督管理局的藥品檢驗補充方法和檢驗項目批準件巾緩解疲勞類和改善睡眠類保健品的檢測方法，能同時檢測的藥物種類較少，靈敏度低，定性定量繁瑣。因此，現(xiàn)行標準已無法有效地支撐目前市場監(jiān)管的要求，亟需一種針對性強、準確高效、適用范圍廣的檢測方法。

三重四極桿復合離子阱質(zhì)譜（QTRAP）具有質(zhì)量范圍寬、掃描速度快、靈敏度高的優(yōu)點。與傳統(tǒng)的三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜（MS/MS）相比，在具有相同定量準確性的同時，定性靈敏度要高出500倍，能提供目標物質(zhì)的精確分子量以及它的多級質(zhì)譜碎片離子信息，形成信息庫，將質(zhì)最數(shù)十分接近的離子進行有效分辨，還可以破解化合物結(jié)構(gòu)的信息，有著強大定性能力。

通過單次分析可對成百上下種痕量組分進行定性、定量和確證。本實驗針對30種保健品中緩解疲勞類和改善睡眠類違禁添加藥物，建立了高效液相色譜-三重嗎極桿復合離子阱質(zhì)譜（HPLC-QTRAP）法快速檢測法。本方法通量大、操作簡便、靈敏度高、準確性強，旨在提高違禁添加藥物的檢驗效率和定性準確度，為新形勢下的保健食品臨管提供有效的技術(shù)支持。

1材料與方法

1.1材料與儀器

50批次緩解疲勞類和改善睡眠類保健品均來源于為市場監(jiān)督抽檢任務，抽檢范同為南京市流通領域的藥店、超市和商場；乙酸銨分析純98％；甲醇和乙腈色譜純美國MERCK公司；超純水；標準品：地西泮（批號171225-201304，純度99.9％）；硝西泮（批號171217-201403，純度99.9％）；氯硝西泮（批號171227-201404，純度99.7％）；氯氮卓（批號171248-200702，純度99.4％）；奧沙西泮（批號171229-200603，純度99.6％）；馬來酸咪噠唑侖（批號171250-20040l，純度99.5％）；勞拉西泮（批號171253-201102，純度99.8％）；艾司嘩侖（批號171219—201604，純度99.9％）；阿普唑侖（批號171218-201305，純度99.5％）；巴比妥（批號171220-200602，純度99.5％）；苯巴比妥（批號171222-201206，純度99.7％）；異戊巴比妥（批號171221-201203，純度99.9％）：司可巴比妥鈉（批號171223-200402，純度99.4％）；氯美扎酮（批號100408-200401，純度99.6％）；佐匹克隆（批號100870-200801，純度99.5％）；馬來酸氯苯那敏（批號100047-201507，純度99.7％）；青藤堿（批號110774-201808，純度94.6％）；鹽酸文拉法辛（批號100543-201602，純度99.9％）；煙酸（批號100434-201603，純度99.8％）；那紅地那非（批號520039-201401，純度98.3％）；紅地那非（批號520047-201401，純度99.9％）；伐地那非（批號520041-201401，純度99.0％）；西地那非（批號510068-201401，純度99.9％）；豪莫西地那非（批號520046-20140l，純度99.6％）；氨基他達拉非（批號520042-201401，純度99.4％）；硫代艾地那非（批號520048-201401，純度99.5％）；偽伐地那非（批號520041-201401，純度99.0％）；那莫西地那非（批號520040-20140l，純度99.5％）；以上標準品均購自中國食品藥品檢定研究院；羥基豪莫西地那非批號CDDM-H942840，純度98.8％，TRC；他達拉非批號CDFZ-T-103，純度99.6％。

1260型高效液相色譜儀：美國Agilent公司；4500型三重四極桿復合離子阱質(zhì)譜（QTRAP）儀：美國SCIEX公司；XS205DU型電子分析天平：梅特勒-托利多儀器；SB-5200DT型超聲波清洗機：寧波新芝生物科技股份有限公司；Milli-Q型超純水系統(tǒng)：美國Millipore公司。

1.2實驗方法

1.2.1溶液制備

1.2.1.1標準品溶液配制

單個標準品儲備液的配制：將30種違禁添加藥物分別稱取約10mg，置于10mL容量瓶中，11種那非類標準品中加入一定量的乙腈超聲溶解后定容，其余標準品加入一定量甲醇超聲溶解后定容，均配制成濃度約為1mg/mL的標準品儲備液，并保存于-4℃冰箱中。
混合標準品溶液的配制：分別精確吸取30種標準品儲備液適黃于一個100mL容量瓶中，用甲醇稀釋混勻后定容。使?jié)舛葹?～10μg/mL的混合標準品溶液，待使用時進一步稀釋。

1.2.1.2供試品溶液的制備

將片劑、顆粒劑和膠囊（內(nèi)容物）樣品細致研磨，得到均質(zhì)樣品后稱量，稱取0.1000g左右樣品于100mL容量瓶中，加入甲醇適量，超聲提取30min，冷卻至室溫，用甲醇定容至刻度，搖勻，靜置，取上清液經(jīng)0.22μm有機濾膜過濾，取濾液待測。若陽性樣品濃度超出線性范圍則用甲醇按一定比例稀釋后再測。

1.2.2高效液相色譜條件

色譜柱：PhenomenexKjneLex-C₁₈色譜柱，規(guī)格50mm×2.1mm，2.6μm；柱溫：40℃；流動相：A為乙腈，B為10mmol/L乙酸銨水溶液；梯度洗脫：0～7min，10％A～90％A，7～8min，90％A，8～8.1min，90％A～10％A，8.1～10min，10％A；流速：250μL/min；進樣量：1μL。

1.2.3三重四極桿質(zhì)譜參數(shù)

離子源：TurboV電噴霧離子源（ESI）；掃描模式：正、負離子同時掃描，定時多反應監(jiān)測→信息依賴性獲取→增強型子離子掃描（ScheduledMRM→TDA→EP）；掃描范圍：50～650Da；氣簾氣（CUR）：30psi；碰撞氣（CAD）：High；噴霧電壓（IS）：5500V/-4500V；離子源溫度：550℃；霧化氣（GASl）：55psi；輔助氣（GAS2）：55psi。經(jīng)質(zhì)潛條件優(yōu)化后，30種物質(zhì)的色譜保留時問、分子離子對及其采集參數(shù)，詳見表1。

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