胭脂蟲(chóng)紅色素是一種蒽醌類天然色素，寄生在仙人掌類植物上的雌性胭脂蟲(chóng)是提取胭脂蟲(chóng)紅色素的原料，此種胭脂蟲(chóng)原產(chǎn)于中南美洲、墨西哥等地。20世紀(jì)90年代，我國(guó)首次從國(guó)外引進(jìn)胭脂蟲(chóng)，2002年在云南省開(kāi)始有規(guī)劃種植胭脂蟲(chóng)。目前國(guó)際國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上的胭脂蟲(chóng)紅產(chǎn)品主要分為三種：胭脂蟲(chóng)萃取液、胭脂蟲(chóng)紅鋁、水溶性胭脂蟲(chóng)紅色素。胭脂蟲(chóng)紅色素的主要成分是胭脂紅酸，胭脂紅酸呈極性，易溶于水以及甲醇、乙醇等有機(jī)溶劑，136℃會(huì)分解，光穩(wěn)定性較好。

胭脂蟲(chóng)紅色素因其安全的特性及美麗的顏色被廣泛應(yīng)用于食品。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB2760-2014中對(duì)胭脂蟲(chóng)紅的使用限量（以胭脂紅酸計(jì)）進(jìn)行了要求。目前國(guó)內(nèi)外主要使用分光光度法來(lái)測(cè)定食品中胭脂蟲(chóng)紅的含量，檢測(cè)波長(zhǎng)在可見(jiàn)光區(qū)494nm，此方法不能排除其他在494nm下有吸收的雜質(zhì)組分的干擾。隨著研究的深入，反相薄層色譜（TLC）/光密度掃描分析法、高效毛細(xì)管電泳法、液相色譜法和超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等方法被逐漸應(yīng)用于胭脂蟲(chóng)紅的測(cè)定。由于胭脂紅酸在紫外光區(qū)和可見(jiàn)光區(qū)均有明顯的吸收峰，本研究建立了高效液相色譜法，分別在兩個(gè)光區(qū)選擇最大吸收波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，為胭脂蟲(chóng)紅的測(cè)定提供更精準(zhǔn)的方法。同時(shí)，針對(duì)部分含干擾物質(zhì)較少的樣品，從前處理方法和檢測(cè)波長(zhǎng)兩方面進(jìn)行摸索，建立了快速檢測(cè)胭脂蟲(chóng)紅的方法。

一、實(shí)驗(yàn)部分

1、儀器與試劑

高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent，1260Infinity）；分析天平（德國(guó)Sartorius，QUINTIX224-1CN）l離心機(jī)（德國(guó)Sigma，4-16KS）；恒溫水浴鍋（上海精宏，DKZ-2）；旋渦振蕩器（德國(guó)IKA，MS3）；聚酰胺固相萃取小柱（上海安譜，60mg/3mL）。

除非另有說(shuō)明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。胭脂紅酸（CAS：1260-17-9，德國(guó)Dr.EhrenstorferGmbH）l乙腈（德國(guó)Merck，色譜純）；甲酸（德國(guó)Merck，色譜純）。0.05％甲酸水溶液；2mol/L鹽酸溶液；酸化甲醇（甲酸：甲醇=1:50，v:v）；氨水甲醇（體積分?jǐn)?shù)為5％的氨水:甲醇=1:l，v:v），以上試劑均為廣州化學(xué)試劑廠。

2、標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱取胭脂紅酸標(biāo)準(zhǔn)品0.1g（精確至0.0001g）于100mL容量瓶中，用水溶解定容，配制成質(zhì)量濃度為1000mg/L的儲(chǔ)備液。移取適量標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，以水稀釋成質(zhì)量濃度分別為2.50、5.00、10.0、20.0、40.0、100mg/L系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

3、樣品的前處理

（1）直接提取法

稱取2g均勻后樣品于50mL離心管中，之后加入2mol/L鹽酸溶液10mL，混合均勻，置于80℃水浴中30min，取出充分冷卻后加入15mL甲醇，振蕩2min。于9000r/min轉(zhuǎn)速下離心5min，取上清液，用0.22μm濾膜過(guò)濾后，按色譜條件進(jìn)行測(cè)定。

（2）凈化法

處理方法：稱取2g均勻后樣品于50mL離心管中，之后加入2mol/L鹽酸溶液10mL，混合均勻，置于80℃水浴中30min，取出充分冷卻后加入15mL甲醇，振蕩2min。于9000r/min轉(zhuǎn)速下離心5min，取上清液，用0.22μm濾膜過(guò)濾后，按色譜條件進(jìn)行測(cè)定，待凈化。取上清液5mL于15mL離心管中，加入5mL水充分混勻。用2mL酸化甲醇和2mL水活化聚酰胺固相萃取小柱，將混合液以流速1～2mL/min全部過(guò)柱，用2mL水淋洗并抽干，之后用2mL的氨水甲醇洗脫，并用15mL刻度管收集，再加入300μL甲酸，用水定容至2.50mL，混勻后用0.22μm濾膜過(guò)濾，按色譜條件進(jìn)行測(cè)定。

4、色譜條件

（a）色譜柱：Agilent5TC-C185μm×4.6mm×150mm；

（b）柱溫：35℃

（c）進(jìn)樣量：20μL；

（d）檢測(cè)波長(zhǎng)：276nm和494nm；

（e）流速：1.0mL/min；

（f）流動(dòng)相：A：0.05％甲酸水溶液；B：乙腈；梯度洗脫程序見(jiàn)表1。

二、結(jié)果與討論

1、檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

采用二極管陣列檢測(cè)器對(duì)胭脂紅酸標(biāo)準(zhǔn)溶液在190nm～600nm范圍進(jìn)行吸收光譜掃描，結(jié)果見(jiàn)圖1。觀察發(fā)現(xiàn)胭脂紅酸的最大吸收波長(zhǎng)為276nm和494nm，本研究同時(shí)選擇276nm和494nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與檢出限

以胭脂紅酸溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以在兩種波長(zhǎng)下測(cè)得的峰面積為縱坐標(biāo)，分別繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得回歸方程。在276nm檢測(cè)波長(zhǎng)下，得到的線性回歸方程為y=73.23551x-19.78479，相關(guān)系數(shù)r=0.99998；在494nm檢測(cè)波長(zhǎng)下，得到的線性回歸方程為y=18.64641x+0.0428828，相關(guān)系數(shù)r=0.99997。兩者在2.5～100mg/L范圍內(nèi)均具有良好的線性關(guān)系。直接提取法，以取樣量2g計(jì)，在494nm檢測(cè)波長(zhǎng)下的檢出限為10.0mg/kg（S/N＞3）；凈化法，以取樣量2g計(jì)，在276nm檢測(cè)波長(zhǎng)下的檢出限為1.25mg/kg（S/N＞3），在494nm檢測(cè)波長(zhǎng)下的檢出限為3.75mg/kg（S/N＞3）。

3、精密度實(shí)驗(yàn)

將濃度為20mg/L的胭脂紅酸標(biāo)準(zhǔn)液連續(xù)進(jìn)樣6次，評(píng)估儀器的精密度，結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可看出，在276nm檢測(cè)波長(zhǎng)下，標(biāo)準(zhǔn)液實(shí)測(cè)值為19.5mg/L，RSD為0.49％；494nm波長(zhǎng)下，實(shí)測(cè)值為19.4mg/L，RSD為0.76％。

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