紙莎草（Cyperuspapyrus）為莎草科（Cyperaceae）莎草屬（Cyperus）植物，是一種高大的水生或水濕生植物。紙莎草又稱紙草、埃及莎草或埃及紙草，原生于歐洲南部、非洲北部以及小亞細(xì)亞地區(qū)，是構(gòu)成較深水中植被的主要植物。紙莎草是古埃及文明的一個(gè)重要組成部分，古埃及人利用其制成的書寫載體，曾被歐洲人和阿拉伯人使用，歷3000年不衰，直至公元8世紀(jì)，中國(guó)造紙術(shù)傳到中東取代了莎草紙。

紙莎草具有很強(qiáng)的水體凈化功能，多被培育和改良為水體景觀植物。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)紙莎草的研究主要在其水質(zhì)凈化功能方面，關(guān)于其化學(xué)成分的研究不多，生物活性方面除了美白護(hù)膚作用外鮮有報(bào)道。紙莎草的同科同屬植物莎草（C.rotundus）的干燥根莖為《中國(guó)藥典》收載的常用中藥香附，具有解熱鎮(zhèn)痛和抗炎等活性，臨床常用于治療痛經(jīng)、月經(jīng)失調(diào)和胃腸紊亂等病癥。核因子-κB（NF-κB）是細(xì)胞內(nèi)重要的核轉(zhuǎn)錄因子，它參與機(jī)體的炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答過程，NF-κB信號(hào)通路的過度激活，與人類包括癌癥在內(nèi)的多種炎癥相關(guān)性疾病的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，因此抑制NF-κB信號(hào)通路的過度活化，有可能成為相關(guān)疾病的治療手段。為了深入研究紙莎草化學(xué)及活性成分，對(duì)紙莎草全株進(jìn)行了研究，從中分離鑒定了19個(gè)化合物，并發(fā)現(xiàn)了9個(gè)對(duì)TNF-α誘導(dǎo)激活的NF-κB信號(hào)通路有抑制作用的活性化合物。

1實(shí)驗(yàn)部分

1.1植物材料

紙莎草全株由昆明植分生物技術(shù)有限公司于2018年8月采集于昆明馬金鋪，樣品經(jīng)云南中醫(yī)藥大學(xué)李國(guó)棟副教授鑒定為紙莎草的全草（Cyperuspapyrus），標(biāo)本（YMU-ZF20180917）保存于民族藥資源化學(xué)國(guó)家民委-教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

1.2儀器與試劑

制備、半制備HPLC及LC/MS流動(dòng)相所用有機(jī)溶劑為色譜級(jí)甲醇和乙腈（霍尼韋爾，美國(guó)），水為純凈水（娃哈哈，中國(guó)）；其它化學(xué)試劑均為分析純；SephadexLH-20（GEHealthcare，美國(guó)）；柱色譜用MCIGELCHP20/P120填料（三菱化學(xué)，日本）；薄層色譜硅膠板GF254；柱色譜用硅膠（60~100、100~200、200~300、300~400目）；顯色劑：10%磷鉬酸-乙醇溶液和茴香醛、10%硫酸-乙醇溶液（105℃加熱顯色）、5%硫酸-乙醇溶液、碘；DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清、谷氨酰胺（BiologicalIndustries，以色列）；Lipofectamine2000（ThermoFisher，美國(guó)）；地塞米松（Aladdin，中國(guó)）；雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒（Promega，美國(guó)）。

EYELAN-1100自動(dòng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海愛朗，中國(guó)）；EYELAOSB-2100水浴鍋（上海愛朗，中國(guó)）；NP7000泵-NU3000制備液相（江蘇漢邦，中國(guó)）；6420TripleQuadLC/MS（Agilent，美國(guó)）；1260Infinity半制備高效液相色譜（Agilent，美國(guó)）；DRX-400和DRX-600型核磁共振儀（Bruker，瑞士）；BS124S型電子分析天平（Sartorius，德國(guó)）；SpectraMaxi3x型酶標(biāo)儀（MolecularDevices，美國(guó)）；5424R型離心機(jī)（Eppendorf，德國(guó)）；二氧化碳培養(yǎng)箱（ThermoFisher，美國(guó)）；5977MSD旋光儀（Agilent，美國(guó)）。

1.3實(shí)驗(yàn)方法與步驟

1.3.1提取與分離

紙莎草（12kg）干燥樣品粉碎后，用95%甲醇冷浸提取6次，每次48h，合并提取液，提取液經(jīng)過濾、減壓濃縮后得浸膏1kg。將提取物浸膏混懸于適量溫水中，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇各萃取3次，合并濃縮液得到石油醚部分浸膏75g，乙酸乙酯部分浸膏100g和正丁醇部分浸膏12g。

石油醚部分浸膏（75g）先用MCI除色素及分離，洗脫梯度為50%、70%、90%、100%甲醇/水，經(jīng)TLC檢測(cè)合并相同組分，共得到10個(gè)組分，分別記為FrA.1~FrA.10。70%甲醇/水洗脫部分（FrA.4）用60~100目硅膠拌樣進(jìn)行正相硅膠柱色譜分離，洗脫梯度系統(tǒng)為石油醚∶二氯甲烷（1∶0~0∶1），經(jīng)TLC檢測(cè)合并相同組分，共得到5個(gè)組分，分別記為A4.1~A4.5。

A4.2先后用硅膠及SephadexLH-20柱層析分離，得到化合物1（10.5mg）和7（7mg）。A4.3先后用硅膠及SephadexLH-20柱層析分離純化，得到化合物2（20mg）和9（10mg）。70%甲醇/水洗脫部分（FrA.5）用60~100目硅膠拌樣進(jìn)行柱色譜分離，洗脫系統(tǒng)為石油醚∶二氯甲烷=1∶0→0∶1，經(jīng)TLC檢測(cè)合并相同組分，共得到4個(gè)組分，分別記為A5.1~A5.4。A5.3先后用硅膠與SephadexLH-20柱層析（洗脫劑：甲醇）分離純化，得到化合物3（8mg）和4（9mg）。90%甲醇/水洗脫部分（FrA.8）用制備高效液相色譜進(jìn)行色譜分離，共得到5個(gè)組分，分別記為A8.1~A8.5。

A8.3先后用硅膠與SephadexLH-20柱層析分離純化，得到化合物5（22.5mg）、6（10mg）和8（8mg）。乙酸乙酯部分浸膏（100g）先用MCI除色素及分離，洗脫梯度系統(tǒng)為50%、70%、90%、100%甲醇/水，經(jīng)TLC檢測(cè)合并相同組分，共得到8個(gè)組分，分別記為FrB.1~FrB.8。70%甲醇/水部分（FrB.4）用60~100目硅膠拌樣進(jìn)行柱色譜分離，洗脫梯度系統(tǒng)為石油醚∶乙酸乙酯（1∶0→0∶1），經(jīng)TLC檢測(cè)合并相同組分，共得到5個(gè)組分，分別記為B4.1~B4.5。B4.2先后用硅膠與SephadexLH-20柱層析分離純化，得到化合物11（14mg）和19（23mg）。B4.3先后用硅膠柱層析和半制備高效液相色譜進(jìn)行色譜分離純化，分別得到化合物10（18mg，tR=35min）和14（14mg，tR=40min）。

B4.4先后用硅膠與SephadexLH-20柱層析（洗脫劑：甲醇）分離純化，得到化合物15（15mg）。90%甲醇/水部分（FrB.7）用60~100目硅膠拌樣進(jìn)行柱色譜分離，洗脫梯度系統(tǒng)為石油醚∶乙酸乙酯（1∶0→0∶1），經(jīng)TLC檢測(cè)合并相同組分，共得到6個(gè)組分，分別記為B7.1~B7.6。B7.3先后用硅膠與SephadexLH-20柱層析分離純化，得到化合物12（12mg）。B7.4先后用硅膠柱層析、SephadexLH-20柱層析和半制備高效液相色譜進(jìn)行色譜分離純化，分別得到化合物13（10mg，tR=30min）和16（8mg，tR=36min）。B7.5先后用硅膠柱層析與SephadexLH-20（洗脫劑：甲醇）分離純化，得到化合物17（20mg）和18（10mg）。

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