四逆散出自漢代張仲景《傷寒論》，由柴胡、白芍、枳實(shí)和甘草四味常用中藥配伍而成。方中柴胡以其疏肝解郁，透邪外出功效作為君藥。白芍以斂陰養(yǎng)血柔肝作為臣藥，與柴胡合用，以補(bǔ)養(yǎng)肝血，條達(dá)肝氣；佐以枳實(shí)理氣解郁，泄熱破結(jié)，與柴胡為伍，一升一降，加強(qiáng)舒暢氣機(jī)之功，并奏升清降濁之效；與白芍相配，又能理氣和血，使氣血調(diào)和。使以甘草，調(diào)和諸藥，益脾和中。綜合四藥，共奏透邪解郁，疏肝理脾之效，使邪去郁解，氣血調(diào)暢，清陽(yáng)得伸，四逆自愈。

中藥質(zhì)量標(biāo)志物（Q-marker）是近年來(lái)提出的中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)與質(zhì)量控制的核心概念，自提出后我國(guó)學(xué)者對(duì)其展開(kāi)了廣泛研究，但迄今為止，大多數(shù)研究仍?xún)H限于單味藥材和飲片的質(zhì)量標(biāo)志物研究，尚不能全面反映質(zhì)量標(biāo)志物概念的所有要素?；谥兴庂|(zhì)量標(biāo)志物的定義和基本要求，本文在對(duì)四逆散化學(xué)成分、藥理作用、臨床應(yīng)用研究的基礎(chǔ)之上，結(jié)合Q-marker新思路，并以其“五原則”理論為指導(dǎo)，對(duì)四逆散Q-marker的確定進(jìn)行分析與論證，為四逆散質(zhì)量標(biāo)志物的分析提供理論參考。

1 主要化學(xué)成分

中藥復(fù)方是一個(gè)包含多個(gè)組分的復(fù)雜系統(tǒng)，是中醫(yī)臨床用藥的主要形式及手段，但因其成分復(fù)雜、基礎(chǔ)研究薄弱、有效成分不明確、作用靶點(diǎn)多等缺點(diǎn)限制了中藥復(fù)方在更多領(lǐng)域的發(fā)展與應(yīng)用。中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及質(zhì)量控制的關(guān)鍵是對(duì)其化學(xué)成分的分析。目前對(duì)四逆散單味藥化學(xué)成分或復(fù)方中有效部位的分離分析研究較多。孫宗喜等通過(guò)水蒸氣蒸餾法提取柴胡根和莖中的揮發(fā)油成分，并用GC-MS對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行分析鑒定。兩部位共鑒定出95個(gè)化合物，其中根和莖中含量較高的成分分別是正己醛(17.00%)及棕櫚酸(10.79%)。郭敏娜等利用HPLC-Q-TOF-MS技術(shù)對(duì)柴胡所含的化學(xué)成分進(jìn)行分析，該研究共鑒定了21個(gè)化合物，包括3個(gè)酚酸類(lèi)化合物，4個(gè)黃酮類(lèi)化合物，14個(gè)三萜皂苷類(lèi)化合物，其中異綠原酸A、異綠原酸B、7,3′-二甲氧基槲皮素、5-羥基-7-乙酰氧基黃酮等四個(gè)化合物為柴胡中新發(fā)現(xiàn)的化合物。

白芍所含有的主要化學(xué)成分包括萜類(lèi)、黃酮類(lèi)、鞣質(zhì)類(lèi)等。母會(huì)丹等采用超高壓液相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜(UPLC/Q-TOF-MS)技術(shù)來(lái)分析白芍甲醇提取物中的化學(xué)成分，推測(cè)出沒(méi)食子?；崽?，芍藥苷亞硫酸酯，芍藥內(nèi)酯苷，芍藥苷，沒(méi)食子酰芍藥苷及其3種同分異構(gòu)體和苯甲酰芍藥苷等9個(gè)化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。任浚萁等運(yùn)用高效液相色譜-電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC-ESI/MS)分析鑒定出白芍乙醇提取物中的芍藥內(nèi)酯苷、異芍藥苷、芍藥苷亞硫酸酯、沒(méi)食子酰基芍藥苷、芍藥苷、苯甲酰芍藥苷、氧化芍藥苷和苯甲酰氧芍藥苷8種化合物。孫東東等對(duì)白芍水提物中的化學(xué)成分進(jìn)行HPLC-ESI-Q-TOF-MS定性分析，結(jié)果得到?jīng)]食子酸、芍藥苷、白芍苷等11種化合物。

枳實(shí)所含有的主要化學(xué)成分包括黃酮類(lèi)、生物堿和揮發(fā)油類(lèi)。于國(guó)華等應(yīng)用超高效液相色譜-線(xiàn)性離子阱軌道阱串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS/MS)定性分析了枳實(shí)中的27個(gè)化合物，其中有14個(gè)黃酮類(lèi)化合物，7個(gè)香豆素類(lèi)化合物，5個(gè)檸檬苦素類(lèi)化合物和1個(gè)生物堿類(lèi)化合物。袁偉彬等采用水蒸氣蒸餾法提取枳實(shí)中的揮發(fā)油成分，通過(guò)GC-MS分析鑒定出19種組分，其中含量最高的為檸檬烯。馮鋒等利用溶劑萃取及柱層析法對(duì)枳實(shí)的化學(xué)成分進(jìn)行分離、純化；同時(shí)，該研究還采用光譜技術(shù)對(duì)分離得到的化合物進(jìn)行鑒定，得到圣草次苷、新北美圣草苷、5，7-二羥基香豆素、柚皮蕓香苷、東莨菪內(nèi)酯、橙皮素-7-O-β-D-葡萄糖苷、花椒毒酚、枳屬苷、異櫻花苷、柚皮素等10個(gè)化合物。

甘草的主要化學(xué)成分有黃酮類(lèi)和三萜皂苷類(lèi)。劉育辰等分別用硅膠、Sephadex LH-20凝膠、RP-18、MCI等柱色譜分離純化出甘草中的二十四烷酸、白樺脂酸、齊墩果酸、甘草苷、甘草酸等33種化合物。胡耿等采用HP-20大孔樹(shù)脂、硅膠、ODS、凝膠等多種柱色譜，結(jié)合制備液相等方法對(duì)甘草中的黃酮類(lèi)成分進(jìn)行分離和純化，得到10個(gè)黃酮類(lèi)化合物，分別鑒定為異甘草查耳酮B、甘草異黃酮G、異甘草素、異甘草苷、刺甘草查耳酮、香豌豆酚、芒柄花苷、2(S)-3´,5´,7-三羥基二氫黃酮、南酸棗苷、4´,7-二羥基黃酮。趙艷敏等采用高效液相色譜-電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（HPLC-QJTOF-MS）鑒定出甘草50%甲醇提取物中的化學(xué)成分，包括28個(gè)黃酮類(lèi)、11個(gè)三萜皂苷類(lèi)和1個(gè)香豆素類(lèi)化合物。

2 藥理作用

2.1抗抑郁作用

周靜洋等在四逆散抗脂多糖（LPS）誘導(dǎo)小鼠抑郁的研究中，發(fā)現(xiàn)四逆散能縮短抑郁小鼠不動(dòng)時(shí)間，降低血清IFN-γ含量且能抑制吲哚胺2，3過(guò)氧化酶（IDO）活性及mRNA表達(dá)數(shù)量，推測(cè)四逆散可通過(guò)阻斷炎性因子誘導(dǎo)IDO激活途徑抑制IDO的活性并降低其含量，從而調(diào)節(jié)TRP-KYN代謝發(fā)揮抗抑郁作用。

此外，有研究表明四逆散還可通過(guò)阻斷炎性因子誘導(dǎo)IDO的激活途徑使IDO活性降低和含量減少，發(fā)揮抗抑郁作用。王慧慧等在網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)合“藥作用機(jī)理輔助解析系統(tǒng)”對(duì)四逆散成分-靶點(diǎn)-疾病幾者之間的關(guān)系展開(kāi)研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)四逆散可通過(guò)調(diào)控β2 腎上腺素、5-羥色胺受體 1A、組胺 H1 受體等多個(gè)相關(guān)靶點(diǎn)調(diào)節(jié)cAMP環(huán)核苷酸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)及其遞質(zhì)、免疫炎癥反應(yīng)、神經(jīng)內(nèi)分泌、鈣離子及其他離子轉(zhuǎn)運(yùn)等多途徑、多靶點(diǎn)發(fā)揮抗抑郁作用。

嚴(yán)燦等以cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白（CREB）和p-CREB蛋白表達(dá)為指標(biāo)，采用免疫組化法及Westernblot法研究加味四逆散對(duì)皮質(zhì)酮和谷氨酸致?lián)p傷的PC12細(xì)胞中CREB及其磷酸化的影響，發(fā)現(xiàn)加味四逆散的含藥血清能使PC12細(xì)胞模型中CREB和p-CREB的表達(dá)明顯升高；同時(shí)cAMP-CREB信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)激活，故認(rèn)為受體后cAMP-CREB信號(hào)通路是加味四逆散發(fā)揮抗抑郁作用的機(jī)制之一。

彭淑芹等在研究四逆散對(duì)抑郁模型大鼠下丘腦-垂體-腎上腺軸（HPA軸）、海馬腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）及其受體型酪氨酸激酶B（TrKB）的影響中，發(fā)現(xiàn)四逆散高低劑量組（10，5g/kg）均可顯著降低抑郁癥模型大鼠血漿皮質(zhì)醇（CORT）、促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）、下丘腦促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（CRH）的含量；同時(shí)升高大鼠海馬BDNF及其TrKB陽(yáng)性神經(jīng)元面密度值，改善抑郁模型大鼠的抑郁狀態(tài)，由此推測(cè)四逆散可通過(guò)HPA軸增加海馬BDNF、TrKB的表達(dá)而發(fā)揮抗抑郁作用。劉琰通過(guò)中醫(yī)分時(shí)給藥研究加味四逆散抗抑郁作用，觀察卯時(shí)（7：30）、酉時(shí)（17:30）分別給藥對(duì)慢性應(yīng)激大鼠的影響，結(jié)果表明加味四逆散具有明顯的抗抑郁效果。

此外，有學(xué)者通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)四逆散可改善慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠的抑郁狀態(tài)，增加蔗糖水的消耗量。還有研究發(fā)現(xiàn)四逆散有效部位能夠縮短小鼠強(qiáng)迫游泳和懸尾不動(dòng)時(shí)間、拮抗利血平降低小鼠體溫、引起小鼠眼瞼下垂的作用，明顯增加5-羥色氨酸（5-HTP）誘導(dǎo)小鼠的甩頭次數(shù)，以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果均表明四逆散有效部位對(duì)小鼠抑郁行為具有一定改善作用，其作用機(jī)理與增加突觸間單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)有關(guān)。

2.2鎮(zhèn)靜催眠作用

劉立研究表明，四逆散水煎液能夠延長(zhǎng)閾劑量戊巴比妥鈉所致小鼠的睡眠時(shí)間；同時(shí)，該實(shí)驗(yàn)以正交設(shè)計(jì)方法尋找四逆散中延長(zhǎng)閾劑量戊巴比妥鈉所致小鼠睡眠時(shí)間的最佳藥物組合，結(jié)果表明，四逆散整方延長(zhǎng)閾劑量戊巴比妥鈉所致小鼠睡眠時(shí)間效果最為顯著。劉思源用四逆散對(duì)睡眠剝奪大鼠模型和正常大鼠進(jìn)行干預(yù)，發(fā)現(xiàn)四逆散有改善睡眠剝奪大鼠脾淋巴細(xì)胞增殖功能的作用。

神經(jīng)遞質(zhì)5-羥色胺（5-HT）及5-羥基吲哚乙酸（5-HIAA）在調(diào)節(jié)機(jī)體睡眠過(guò)程中扮演重要角色，5-HT是最早發(fā)現(xiàn)與睡眠-覺(jué)醒有重要關(guān)系的神經(jīng)遞質(zhì)之一，可參與情緒調(diào)控、睡眠-覺(jué)醒調(diào)控等多種生理活動(dòng)。

5-羥色胺1A受體(5-HT1A)是5-HT的一個(gè)亞型，主要分布于腦內(nèi)海馬、中縫核及腦皮層邊緣區(qū)，將微量5-HT1A受體激動(dòng)劑8-羥四氫萘（8-OHDPAT）注入背側(cè)中縫核（DRN）能夠增加5-HT1A表達(dá)量，減少中縫核神經(jīng)元的激活及其末梢5-HT的釋放，延長(zhǎng)REMS，從而達(dá)到鎮(zhèn)靜催眠的作用。于爽對(duì)大鼠各睡眠時(shí)相與中縫核5-HT的代謝產(chǎn)物5-HIAA含量之間的相關(guān)性及四逆散鎮(zhèn)靜催眠的5-HT神經(jīng)遞質(zhì)機(jī)制展開(kāi)研究。

結(jié)果發(fā)現(xiàn)，正常大鼠或電刺激所致睡眠剝奪大鼠處于睡眠狀態(tài)時(shí)，慢波睡眠第1期(SWS1)與慢波睡眠第2期(SWS2)期間的腦部中縫核5-HIAA含量均降低，故推測(cè)四逆散凍干粉劑鎮(zhèn)靜催眠的機(jī)制與影響腦部中縫核的5-HT含量有關(guān)。張樹(shù)明發(fā)現(xiàn)四逆散有效組分明顯增加給藥后小鼠全腦、丘腦、腦干內(nèi)一氧化氮（NO）含量及小鼠全腦、腦干腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、丘腦白細(xì)胞介素-6（IL-6）水平，降低全腦、腦干前列腺素D2（PGD2）含量，表明四逆散有效組分具有改善睡眠的作用。

此外，另有研究表明四逆散不僅對(duì)失眠模型動(dòng)物具有鎮(zhèn)靜催眠作用，對(duì)正常小鼠也具有催眠作用，且與戊巴比妥鈉有協(xié)同作用。

果蠅攜帶有大量與人類(lèi)睡眠基因相同的基因，因此，以果蠅作為睡眠研究的模式生物具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。李玉萍利用光照和機(jī)械刺激的方法復(fù)制雌、雄果蠅睡眠剝奪模型，以果蠅頭部5-HT的含量及5-HT1A受體的表達(dá)差異來(lái)探討四逆散凍干粉影響果蠅睡眠作用的機(jī)制，結(jié)果發(fā)現(xiàn)四逆散凍干粉能提高果蠅頭部5-HT的含量及5-HT1A受體的表達(dá)，表明四逆散凍干粉可通過(guò)影響果蠅頭部5-HT含量及5-HT1A受體的表達(dá)量有關(guān)。

2.3 保肝作用

羅閎丹等通過(guò)蛋氨酸-膽堿缺乏（MCD）飲食誘導(dǎo)小鼠非酒精性脂肪肝炎模型，以小鼠血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）及肝組組織中三酰甘油（TG）、丙二醛（MDA）的含量和超氧化物歧化酶（SOD）活力為評(píng)價(jià)指標(biāo)，觀察四逆散對(duì)MCD所誘導(dǎo)的酒精性脂肪肝炎的作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)四逆散能降低酒性脂肪肝炎模型小鼠血清ALT、AST及肝臟TG、MDA含量，升高血清中TG含量，增加肝臟組織中SOD的活力；同時(shí)病理觀察發(fā)現(xiàn)四逆散能減少模型組小鼠肝細(xì)胞內(nèi)脂肪空泡和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。表明四逆散對(duì)MCD飲食誘導(dǎo)的小鼠非酒精性脂肪肝炎有預(yù)防作用。

此外，四逆散還具有發(fā)揮抗肝損傷、促進(jìn)肝損傷修復(fù)的作用，柴智等以雷公藤多苷復(fù)制肝損傷模型，運(yùn)用四逆散對(duì)該模型進(jìn)行干預(yù)，發(fā)現(xiàn)經(jīng)四逆散灌胃治療后，發(fā)現(xiàn)四逆散組較模型組肝組織中Bcl-2表達(dá)升高、Bax蛋白及腫瘤壞死因子（TNF-α）mRNA表達(dá)下降、Caspase-3酶活性降低，表明四逆散對(duì)肝細(xì)胞具有一定保護(hù)作用。

徐衛(wèi)東等研究表明四逆散含藥血清能夠促進(jìn)肝臟干細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其分化，促進(jìn)肝損傷修復(fù)。此外，四逆散還具有抗肝纖維化的作用，研究發(fā)現(xiàn)四逆散可通過(guò)下調(diào)RhoA基因和蛋白的表達(dá)，調(diào)控RhoA/ROCK通路、阻斷JAK2-STAT3通路信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)作用等途徑，抑制肝星細(xì)胞的活化與遷移、抑制肝星狀細(xì)胞（HSC）增殖，促進(jìn)HSC凋亡，減少肝細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的生成，從而起到抗肝纖維化的作用。

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