中藥橘紅為蕓香科植物橘Citrus.reticulate.Blanco及其栽培變種的外層果皮，性溫，味辛、苦，歸肺、脾經(jīng)。具有理氣健脾、燥濕化痰的功效，用以治療脾胃氣滯引起的胸膈脹滿、食積傷酒及痰濕壅肺的胸膈滿悶、喘滿痰多等癥。文獻關于橘紅的化學成分報道較少，主要有揮發(fā)油和黃酮，具有多種藥理作用，如橘紅素具有抗腫瘤、抗炎、抗哮喘、神經(jīng)保護等作用。

研究中藥橘紅的抗氧化活性，首先比較了十二個提取物樣品在同濃度下清除2.2-二苯基-1-苦基肼自由基(DPPH)作用、金屬離子螯合能力和對黃嘌呤氧化酶的抑制作用，以確定效果較好的樣品和抗氧化模型；然后將活性較好的樣品采用制備薄層層析法進一步分離，比較所得樣品對較適宜抗氧化模型的作用；最后初步確定活性較好的樣品結構類型。實驗結果表明乙酸乙酯提取物所分的兩個部分和無水乙醇提取物所分的兩個部分對DPPH自由基清除作用相對較強；經(jīng)制備薄層層析法進一步得到的二個黃酮類樣品清除DPPH自由基作用與濃度呈較好的量效關系。

機體內的氧化損傷會導致許多疾病的產(chǎn)生，如心血管疾病、白內障、關節(jié)炎和癌癥等，而抗氧化劑是一類能夠延緩、阻止或消除氧化損傷的物質，按其來源可分為人工合成抗氧化劑和天然抗氧化劑。其中天然抗氧化劑因其安全高效性而受到人們的喜愛，是當前抗氧化劑研究中的熱點領域。中草藥是天然抗氧化劑的重要來源，學者認為某些中草藥的療效與其抗氧化作用密切相關，從中草藥中開發(fā)高效抗氧化劑對食品工業(yè)、醫(yī)藥、營養(yǎng)學均有重要意義?？寡趸饔脵C理可以是直接作用在自由基或是間接消耗掉容易生成自由基的物質，防止發(fā)生進一步反應，包括鰲合金屬離子、清除自由基、淬滅單線態(tài)氧、清除氧、抑制氧化酶活性等。

為了研究橘紅中的抗氧化作用成分，本實驗首先將橘紅干燥、粉碎后過100目篩，用石油醚Ⅱ、氯仿、乙酸乙酯、無水乙醇、甲醇和蒸餾水依次對其進行回流提取，每種提取物再根據(jù)是否溶于無水乙醇或其溶液分為二個部分，共得到十二個部分，研究它們在同濃度下對不同抗氧化模型的作用，包括清除2.2-二苯基-1-苦基肼自由基作用、金屬離子螯合能力和對黃嘌呤氧化酶的抑制作用，以確定活性較好的部位和作用模型；然后將活性部位采用制備薄層層析法進一步分離，測定所得樣品對較好作用模型的抗氧化活性，篩選出活性較好的樣品并采用物化數(shù)據(jù)、顏色反應初步確定其結構類型，以期為其作為天然抗氧化劑提供理論參考。

1實驗部分

1.1材料與儀器

DGG-9070AD電熱恒溫鼓風干燥箱(上海森信實驗儀器有限公司)；XL-30C超微粉碎機(廣州市旭朗機械設備有限公司)；JA2603B電子天平(上海精制天美科學儀器有限公司)；DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器(鄭州予華儀器制造有限公司)；N-1300旋轉蒸發(fā)儀(上海愛朗儀器有限公司)；SB-1300水浴鍋(上海愛朗儀器有限公司)；SHZ-D(Ⅲ)型循環(huán)水真空泵(上海邦西儀器科技有限公司)；TDL-40低速臺式大容量離心機(上海安亭科學儀器廠)；ZF-1三用紫外分析儀(上海嘉鵬科技有限公司)；UV-3100PC紫外可見分光光度計(上海美普達儀器有限公司)。

橘紅(購自浙江省金華市磐安藥市)；2.2-二苯基-1-苦味?；杂苫?DPPH)、氯化亞鐵、黃嘌呤、黃嘌呤氧化酶、菲啰嗪單鈉鹽(上海晶純生化科技股份有限公司)；羧甲基纖維素鈉(天津市科密歐化學試劑有限公司)；GF254薄層層析用硅膠(青島海洋化工有限公司)；石油醚、氯仿、乙酸乙酯、甲醇、無水乙醇、乙二胺四乙酸、碳酸鈉、氫氧化鈉(分析純，廣州化學試劑廠)；二甲基亞砜(天津市廣成化學試劑有限公司)。

1.2實驗方法

1.2.1各提取物部分樣品抗氧化活性測試

稱取50.00g橘紅粉末，用500mL石油醚回流提取1h，提取2次，合并提取液，減壓蒸餾去除溶劑，得到石油醚提取物(1)，加入15mL無水乙醇搖勻，4000r/min離心10分鐘，得到溶解部分(1a)和沉淀部分(1b)。同法，氯仿提取物分為醇溶解部分(2a)和沉淀部分(2b)；乙酸乙酯提取物分為醇溶解部分(3a)和沉淀部分(3b)；無水乙醇提取物分為醇溶解部分(4a)和沉淀部分(4b)；甲醇提取物分為甲醇/無水乙醇=1︰1溶解部分(5a)和沉淀部分(5b)；蒸餾水提取物分為無水乙醇/水=1︰1溶解部分(6a)和沉淀部分(6b)。觀察各部分顏色外觀，稱重并計算得率。

將上述各部分樣品分別用二甲亞砜配制為1.00mg/mL待測液。以抗壞血酸(Vc)為對照，參考文獻方法清除DPPH自由基；參考范金波等的實驗方法測定各樣品溶液與金屬離子(Fe²⁺)的螯合能力；參考郭少英等的實驗方法，測定各樣品溶液對黃嘌呤氧化酶(XOD)的抑制作用。

1.2.2各薄層層析制備樣品抗氧化活性測試

將1.2.1實驗結果較顯著的提取物部分用甲醇溶解，采用制備薄層層析法(PTLC)分離，紫外反射儀上觀察，將比較明顯的斑點刮下溶解后過濾，濾液室溫晾干后烘箱干燥，觀察顏色外觀、稱重并計算得率。

各樣品均用二甲亞砜配制成1.00mg/mL待測液，按照1.2.1實驗部分測定它們對較好抗氧化實驗模型的作用。將活性效果較好的樣品配制成不同濃度，測試濃度與清除率的對應關系。

1.2.3活性樣品結構類型初步鑒定

通過理化性質和顯色反應初步確定活性較好的樣品的化學結構類型。

1.2.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

活性實驗重復3次，實驗結果均表示為平均值。采用MicrosoftOfficeExcel2007軟件進行數(shù)據(jù)處理。

2結果與分析

2.1各提取物部分樣品抗氧化活性結果與分析

橘紅粉末依次用石油醚Ⅱ、氯仿、乙酸乙酯、無水乙醇、甲醇和蒸餾水提取，所得各提取物再根據(jù)在無水乙醇或其50%乙醇溶液中的溶解性分為兩個部分，共得到十二個樣品，其理化性質見表1。從中可以看出得率大小為：4a>6b>5b>5a>4b>6a>3b>1b>1a>2b>3a>2a，其中6a和6b部分顏色較深，其它提取物部分顏色相對較淺。

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