化合物13：黃色針晶，EI-MS：m/z 624 +，分子式為C28H32O16。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 7.87 (1H, s, H-2′), 7.53 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-6′), 6.93 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-5′), 6.41 (1H, s, H-8), 6.20 (1H, s, H-6), 5.45 (1H, d, J = 7.2 Hz, Glc, H-1′′), 4.44 (1H, br s, Rha, H-1′′′), 3.27 (3H, s, -OCH3), 0.99 (3H, d, J = 6.2 Hz, Rha C-6′′′), 0.99 (3H, d, J = 6.1 Hz, Rha, H-6′′′)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ: 177.3 (C-4), 164.5 (C-7), 161.2 (C-5), 157.1 (C-2), 156.1 (C-9), 149.1 (C-4′), 147.5 (C-3′), 133.1 (C-3), 122.4 (C-6′), 121.2 (C-1′), 115.4 (C-5′), 113.4 (C-2′), 103.4 (C-10), 102.2 (C-1′′), 101.0 (C-1′′′), 99.6 (C-6), 94.4 (C-8), 76.7 (C-3′′), 76.1 (C-5′′), 74.5 (C-2′′), 72.1 (C-4′′′), 70.9 (C-2′′′), 70.7 (C-4′′), 70.3 (C-3′′′), 68.5 (C-5′′′), 67.2 (C-6′′), 56.0 (-OCH3), 18.0 (C-6′′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致，故鑒定該化合物為槲皮素-3-O-蕓香糖苷。

化合物14：黃色粉末，EI-MS：m/z 222 +，分子式為C13H18O3。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.01 (1H, d, J = 15.8 Hz, H-7), 6.46 (1H, d, J = 15.8 Hz, H-8), 5.97 (1H, m, H-4), 2.65 (1H, d, J = 17.8 Hz, H-2), 2.32 (3H, s, H-10), 1.91 (3H, d, J = 1.4 Hz, H-13), 1.07 (3H, s, H-12), 1.01 (3H, s, H-11)；13C NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 199.2 (C-9), 199.0 (C-3), 163.1 (C-5), 147.0 (C-7), 130.4 (C-8), 126.5 (C-4), 78.4 (C-6), 49.2 (C-2), 41.7 (C-1), 26.3 (C-10), 23.4 (C-12), 22.1 (C-11), 17.5 (C-13)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致，故鑒定該化合物為去氫吐葉醇。

化合物15：無色油狀物，EI-MS：m/z 224 +，分子式為C13H20O3。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 5.70 (1H, d, J = 15.5 Hz, H-7), 5.63 (1H, d, J = 15.5 Hz, H-8), 5.78 (1H, br s, H-4), 4.19 (1H, d, J = 6.4 Hz, H-9), 2.35 (1H, d, J = 16.6 Hz, H-2a), 2.05 (1H, d, J = 16.6 Hz, H-2b), 1.82 (3H, d, J = 1.2 Hz, H-13), 1.11 (3H, s, H-10), 0.93 (3H, s, H-11), 0.91 (3H, s, H-12)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ: 197.5 (C-3), 164.5 (C-5), 135.8 (C-7), 127.9 (C-8), 125.5 (C-4), 77.9 (C-6), 65.9 (C-9), 49.4 (C-2), 41.0 (C-1), 24.1 (C-10), 23.7 (C-12), 23.1 (C-11), 19.0 (C-13)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致，故鑒定該化合物為布盧門醇A。

化合物16：白色無定形粉末, EI-MS：m/z 196 +，分子式為C11H16O3。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 5.73 (1H, s, H-7), 4.18 (1H, m, H-3), 2.42 (1H, dt, J = 14.0, 2.8 Hz, H-4b), 2.01 (1H, dt, J = 14.5, 2.8 Hz, H-2b), 1.77 (3H, s, H-11), 1.75 (1H, dd, J = 14.0, 3.8 Hz, H-4a), 1.51 (1H, dd, J = 14.5, 3.8 Hz, H-2a), 1.47 (3H, s, H-9), 1.27 (3H, s, H-10)；13C NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 185.4 (C-6), 174.4 (C-8), 113.2 (C-7), 88.8 (C-5), 67.2 (C-3), 47.7 (C-2), 46.3 (C-4), 37.2 (C-1), 30.7 (C-10), 27.1 (C-11), 26.6 (C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致，故鑒定該化合物為黑麥草內(nèi)酯。

化合物17：黃色油狀物，EI-MS：m/z 196 +，分子式為C12H20O2。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 6.75 (1H, dd, J = 7.1, 1.3 Hz, H-3), 5.88 (1H, dd, J = 17.2, 10.7 Hz, H-7), 5.21 (1H, dd, J = 17.2, 1.4 Hz, H-8a), 5.08 (1H, dd, J = 10.7, 1.4Hz, H-8b), 3.71 (3H, s, -OCH3), 2.19 (2H, m, H-4), 1.81 (3H, s, H-10), 1.62 (2H, m, H-5), 1.28 (3H, s, H-9)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 168.7 (C-1), 144.4 (C-7), 142.1 (C-3), 127.6 (C-2), 112.2 (C-8), 73.1 (C-6), 51.7 (-OCH3), 40.7 (C-5), 27.9 (C-9), 23.5 (C-4), 12.2 (C-10)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致，故鑒定該化合物為 (E)-6-羥基-2,6-二甲基辛-2,7-二烯酸甲酯。

化合物18：白色無定形粉末，EI-MS：m/z 432 +，分子式為C19H28O11。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.15 (1H, d, J = 6.5 Hz, H-6), 7.03 (1H, d, J = 2.9 Hz, H-2), 6.95-7.02 (2H, m, H-4, 5), 4.86 (1H, d, J = 6.6 Hz, Glc, H-1′), 4.72 (1H, d, J = 1.2 Hz, Rha, H-1′′), 3.86 (3H, s, 3-OCH3), 1.21 (3H, d, J = 5.2 Hz, Rha, H-6′′)；13C NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 150.7 (C-3), 147.8 (C-1), 124.3 (C-2), 122.2 (C-5), 118.5 (C-6), 113.5 (C-4), 102.5 (C-1′), 102.2 (C-1′′), 77.9 (C-3′), 76.8 (C-5′), 75.0 (C-2′), 74.1 (C-3′′), 72.3 (C-4′′), 72.2 (C-2′′), 71.5 (C-4′), 70.1 (C-5′′), 67.9 (C-6′), 56.8 (-OCH3), 17.9 (C-6′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致，故鑒定該化合物為3-甲氧基苯酚-1-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物19：淺黃色粉末，EI-MS：m/z 134 +，分子式為C7H6N2O。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 10.71 (2H, s, 2×NH), 7.04-6.97 (4H, m, H-5, 6, 7, 8)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ: 155.3 (C-2), 129.7 (C-4, 9), 120.4 (C-6, 7), 108.5 (C-5, 8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致，故鑒定該化合物為2-羥基苯并咪唑。

化合物20：無色針狀晶體，EI-MS：m/z 182 +，分子式為C9H10O4。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 9.79 (1H, s, 1-CHO), 7.13 (2H, s, H-2, 6), 3.91 (6H, s, 3, 5-OCH3)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 190.5 (C-1), 147.1 (C-3, 5), 141.0 (C-4), 128.2 (C-1), 106.8 (C-6), 56.3 (3-OCH3, 5-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致，故鑒定該化合物為syringaldehyde。

化合物21：無色粉末，EI-MS：m/z 138 +，分子式為C8H10O2。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.25～7.38 (5H, m, H-2, 3, 4, 5, 6), 4.67 (1H, dd, J = 7.4, 4.7 Hz, H-1′), 3.64 (2H, m, H-2′)；13C NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 143.4 (C-1), 129.1 (C-3, 5), 128.4 (C-4), 127.5 (C-2, 6), 76.1 (C-1′), 68.5 (C-2′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致，故鑒定該化合物為1-苯基-1,2-乙二醇。

3.2 皮質(zhì)酮對PC12細(xì)胞損傷的濃度選擇

實驗結(jié)果顯示，皮質(zhì)酮對PC12細(xì)胞的損傷程度隨濃度呈依賴性上升，450、550、650、750、850、950、1050、1150 μmol/L皮質(zhì)酮作用PC12細(xì)胞48 h后，其細(xì)胞存活率分別為88.81±2.21%、77.07±4.21%、52.47±0.99%、44.78±0.95%、34.26±0.91%、26.96±3.36%、12.32±0.22%、13.21±2.02%。見圖1。

本結(jié)果驗證了一定濃度的皮質(zhì)酮確實能損傷神經(jīng)元，650 μmol/L皮質(zhì)酮作用48 h對高分化PC12細(xì)胞的抑制率接近50%，故選擇以體外650 μmol/L皮質(zhì)酮48 h作用于PC12細(xì)胞以模擬焦慮癥神經(jīng)細(xì)胞損傷狀態(tài)，構(gòu)建抗焦慮活性成分體外細(xì)胞篩選模型。

3.3 單體化合物對皮質(zhì)酮誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用

實驗結(jié)果顯示，與650 μmol/L皮質(zhì)酮組相比，化合物1、2、3、4、5、7、9、10、11、15、16、17與650 μmol/L皮質(zhì)酮共同作用PC12細(xì)胞48 h后，細(xì)胞存活率分別提高至92.29±2.31%、90.74±1.61%、91.62±1.83%、63.11±2.30%、61.01±1.21%、101.18±1.56%、105.23±1.11%、67.77±1.89%、65.66±1.06%、75.94±0.24%、64.39±1.47%、72.88±1.82%。苯丙素、木脂素、黃酮、單萜類均有不同程度的促進(jìn)650 μmol/L誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞增殖的作用。其中，4-O-咖啡?？崴峒柞ィ?）、綠原酸甲酯（2）、綠原酸（3）、腫柄雪蓮苷（7）、蘇式-(7R,8R)-愈創(chuàng)木基丙三醇-8-香草醛醚（9）促進(jìn)650 μmol/L誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞保護(hù)作用最為顯著，實驗結(jié)果見圖2。

4 討論

本研究從睡菜全草醋酸乙酯部位分離并鑒定得到21個化合物，包括3個苯丙素類（1～3），2個香豆素類（4和5），6個木脂素類（6～11），2個黃酮類（12和13），4個單萜類（14～17），4個其他類（18～21）。同時考察了21個化合物對皮質(zhì)酮誘導(dǎo)損傷的PC12細(xì)胞的保護(hù)作用。結(jié)果表明化合物1、2、3、7、9表現(xiàn)出顯著的保護(hù)作用，化合物4、5、10、11、15、16、17表現(xiàn)出中等的保護(hù)作用。

北五味子作為我國傳統(tǒng)的安神藥，近年來的研究報道了北五味子木脂素具有顯著的中樞抑制與安神作用。合歡皮經(jīng)研究也證明其抗焦慮的主要活性成分是 (-)-丁香樹脂酚-4-O-β-D-葡萄糖苷，其作用機(jī)制可能與抑制PC12細(xì)胞線粒體凋亡有關(guān)。后續(xù)將進(jìn)一步探索睡菜主要活性成分對皮質(zhì)酮損傷的PC12細(xì)胞的抗凋亡及保護(hù)作用機(jī)制，闡明睡菜抗焦慮活性的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。

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