除了色譜柱填料粒度直徑為亞2 pm外，還有采用的進樣器與檢測器與高效液相色譜的也有所不同。選擇最高精度和最低擴散的固定環(huán)進樣器(SM-FL)或者選擇高回收率、高精度、寬線性動態(tài)范圍的流通針式進樣器(SM—FTN)。雙通道紫外檢測器或二極管陣列檢測器為高速檢測器，采樣速率高，能準(zhǔn)確積分快速流出的組分。

六、高效液相色譜儀的日常維護

高效液相色譜儀需要日常精心的維護和保養(yǎng)，以便儀器處于正常的工作狀態(tài)，延長儀器、色譜柱的使用壽命，保證分析數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確可靠。

(一)高壓泵的日常維護

長色譜柱或使用了很長一段時間的色譜柱，或加大流動相的流速，柱壓會明顯提高，高壓泵的噪聲也會加大，這屬于正常現(xiàn)象。高壓泵的高壓限制自動保護值不要設(shè)置太高，高效相色譜儀日常分析為20～30 MPa。當(dāng)超壓報警，高壓泵停止泵液時，要逐級拆開管路，找出堵塞處排除后，再復(fù)位工作。每次超壓都會對泵封帶來影響，有可能會導(dǎo)致基線噪聲加大。在維修高壓泵時要特別小心，防止固體顆粒進入泵體，劃傷密封墊、閥球、座和柱塞。防止折斷柱塞桿。如果高壓泵工作時，壓力顯示波動大于5%，通常提示需要停泵排氣泡或清洗單向閥或應(yīng)更換密封墊。

(二)對流動相的要求

所用的流動相和樣品溶液必須經(jīng)過0.45 μm或0.2μm的濾膜過濾才能上機使用。即使過濾后在分析柱前也要加裝保護柱或過濾器。流動相所用的水必須新鮮，可以用超純水制備儀或自行蒸餾，水質(zhì)應(yīng)符合《分析實驗室用水國家標(biāo)準(zhǔn)》(GB／T 6682--2008)規(guī)定的實驗室一級水規(guī)格。通常的做法是對電熱蒸餾水再用全套玻璃蒸餾器重蒸餾一次。要注意用超聲波清洗器定期在稀硝酸或甲醇中清洗過濾頭，過濾頭不通暢容易導(dǎo)致進入高壓泵的流動相在管線中產(chǎn)生氣泡。流動相在一定pH下操作時，要注意空氣中CO₂溶解在流動相內(nèi)對pH變化的影響。更換流動相時，如果兩種流動相互不相溶，需采用過渡溶劑(如異丙醇等)將前一種流動相逐步溶解徹底洗脫后才能換流動相。

(三)進樣系統(tǒng)的維護

使用指定的進樣器，防止進樣器針頭劃傷閥體。在農(nóng)藥殘留分析周期內(nèi)，不要進行有干擾的常量分析。必要時要用乙腈、甲醇、水等反復(fù)清洗進樣口?？兆呋蜻M樣溶劑確認進樣口的潔凈狀態(tài)。

(四)色譜柱的日常維護

每次開機時，流量要逐漸增加或降低，避免突然增壓或降壓，使柱床受到?jīng)_擊，產(chǎn)生空隙。不要接反柱頭或其他連接擰得太緊，不漏液即可，如果擰得過緊易損壞接頭螺紋。要注意使用的色譜柱pH范圍，超出使用范圍、超室溫使用、樣品凈化差、超壓沖擊都會縮短色譜柱的使用壽命。在使用緩沖溶液作流動相時，更換乙腈或甲醇前，一定要用水將鹽沖洗干凈，否則鹽沉積可能導(dǎo)致色譜柱徹底堵塞報廢。高效液相色譜柱與氣相色譜毛細管柱不同，保護再好也有一定的使用壽命。毛細管柱在防止干燒的情況下，可以有很長的壽命。液相色譜柱的壽命與流動相種類及處理、色譜儀操作的流量和壓力、樣品的凈化處理有關(guān)。色譜柱是否報廢，主要取決于對樣品的分離度和在一定流量下的柱壓。不要試圖擰開色譜柱管，這樣重新擰上會導(dǎo)致柱效顯著下降，色譜柱提前報廢。色譜柱經(jīng)過反沖、清洗和再生往往很難使柱效恢復(fù)。色譜柱中的填料隨溫度升降產(chǎn)生膨脹和收縮，在某些情況下，溫度突然變化會損壞柱床，因此使用時溫度要逐漸升高，實驗結(jié)束時色譜柱慢慢降到室溫再停泵。每次實驗結(jié)束后，反相色譜操作方式要用l00%乙腈或甲醇沖洗色譜柱20 min以上才能關(guān)機。拆卸后的色譜柱兩端用盲頭螺絲擰緊，防止封存的溶劑揮發(fā)。反相填料通常要用乙腈或甲醇，正相鍵合相用2，2，4-三甲基戊烷或按照色譜柱使用和維護指南要求封存保管。

(五)儀器組件連接和管路選擇

使用的管路長度越短，內(nèi)徑越細，色譜峰形越窄?，F(xiàn)在高效液相色譜普遍使用PEEK材料(最高耐壓40 MPa)管路和接頭，突出的優(yōu)點是不需要動用扳手，用手?jǐn)Q緊就可以達到不漏液的效果，并且對有些化合物分析會獲得滿意色譜峰形。

(六)工作站的維護和升級

配備色譜工作站的液相色譜儀，通常由儀器生產(chǎn)廠商專門開發(fā)的軟件操作系統(tǒng)來控制儀器的工作狀態(tài)和數(shù)據(jù)處理。在安裝和使用這類軟件時要注意適用的計算機操作系統(tǒng)的版本和語言，對計算機的硬件設(shè)備要安裝驅(qū)動軟件，使之正常工作，否則可能導(dǎo)致計算機經(jīng)常死機、亂碼，影響正常的分析工作。要對原機器帶來的軟件進行拷貝或妥善存檔。高效液相色譜儀工作站版本升級通常要付費。高效液相色譜儀的操作人員要具備計算機的知識并能熟練操作，能解決實際分析工作中遇到的問題。對于不具備這方面能力的人要進行培訓(xùn)，非工作人員不可隨便啟動計算機和液相色譜儀。為了和外界通信(網(wǎng)絡(luò)連接或收發(fā)電子郵件等)，有的計算機必須安裝使用雙網(wǎng)卡。登錄因特網(wǎng)后可能導(dǎo)致產(chǎn)生儀器主機無法與計算機工作站連接的問題。解決這個問題可以嘗試有些殺病毒軟件帶的LSP修復(fù)工具。但有些實驗室為了安全、管理的需要，可能不允許使用或安裝雙網(wǎng)卡。

七、高效液相色譜法的定性分析與定量分析

在定性分析方面，除采用與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的相對保留時間比對外，還可以利用檢測器的選擇性、紫外檢測器全波長掃描功能、改變流動相組成時農(nóng)藥的保留值變化規(guī)律進行定性分析。在農(nóng)藥殘留分析上通常采用外標(biāo)法進行定量分析，較少采用內(nèi)標(biāo)法。在農(nóng)藥原藥和制劑定量分析上，當(dāng)對分析準(zhǔn)確度和精密度有較高要求時，可采用內(nèi)標(biāo)法分析。內(nèi)標(biāo)物通常選用農(nóng)藥殘留標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的內(nèi)標(biāo)物或鄰苯二甲酸酯類同系物。除非是建立方法研究，日常依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的檢測分析只采用單點校正或兩個濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液建標(biāo)進行測定。

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