三、色譜柱

高效液相色譜使用的色譜柱管通常為優(yōu)質(zhì)不銹鋼制成，內(nèi)徑均勻，拋光，無軸向溝槽。不銹鋼色譜柱可耐壓100MPa。常用分析型色譜柱內(nèi)徑為3～4.6mm，長度為lOO～250mm。內(nèi)徑3mm的柱子也被稱為節(jié)省溶劑柱。

依色譜柱內(nèi)徑尺寸還有窄徑柱（2.1mm）、微徑柱（1.0mm）之分，這類色譜柱適合于液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS）分析。在建立分析方法時(shí)可先考慮使用短柱，如果需要特別高的分離度，再用長柱。填料粒度通常為3～10μm。5μm粒度色譜柱通常兼顧了柱效、重現(xiàn)性、可靠性和耐用性。3μm粒度色譜柱通?？梢詫?shí)現(xiàn)快速分析，但粒度較細(xì)而易堵塞，對(duì)過濾要求較高。普通實(shí)驗(yàn)室難以制作高效液相色譜柱。

常用商品牌號(hào)高效液相色譜儀的色譜柱見。在填料或色譜柱上常會(huì)發(fā)現(xiàn)一些英文字母，如BDS、RP、CHS、ODS等。一般認(rèn)為C₁₈是鍵合了十八烷基碳鏈的反相固定相的總稱。C₁₈柱與ODS（十八烷的英文縮寫）柱實(shí)際是有區(qū)別的，只是由于大部分的C₁₈柱是硅膠載體，因此在很多場合下二者混為一談。

除了硅膠載體外，還可以包括其他載體的填料，比如高聚物小球、氧化鋁、氧化鋯、雜化顆粒為載體等鍵合C₁₈或C₈鏈形成的反相固定相。而ODS則是完全以超純硅膠為載體鍵合的C₁₈填料。BDS柱為堿鈍化硅膠柱，特別適合于強(qiáng)極性含氮的堿性化合物分離。RP柱是指內(nèi)嵌了酰胺極性基團(tuán)的可以在100％的水相條件下對(duì)極性化合物有極高保留的C₁₈柱，適用于分離高極性化合物或進(jìn)行離子對(duì)分析；用100％水作流動(dòng)相時(shí)可保持穩(wěn)定，保證填料壽命長，不塌陷。

CHS柱是指表面帶正電荷的雜化顆粒技術(shù)制造的色譜柱。據(jù)資料介紹，CHS柱只使用0.1%甲酸水溶液，不用離子對(duì)試劑就可以進(jìn)行離子對(duì)色譜分析。HSS（highstrengthsilica，HSS）柱是指高強(qiáng)度、耐高壓的一類硅膠柱。XP柱通常是指粒徑為2.5μm的一類色譜柱，可兼容于高效液相色譜和超高效液相色譜系統(tǒng)的操作。HILIC柱為親水相互作用色譜柱。這類色譜柱在草甘膦、滅蠅胺等農(nóng)藥的殘留分析中已有應(yīng)用報(bào)道。

四、檢測(cè)器

在液相色譜檢測(cè)器的發(fā)展過程中，先后出現(xiàn)過40多種檢測(cè)器，目前廣泛應(yīng)用約十幾種。

在農(nóng)藥殘留分析上應(yīng)用的主要有紫外可見光檢測(cè)器（包括光柵型和二極管陣列型）、熒光檢測(cè)器、電化學(xué)檢測(cè)器、質(zhì)譜檢測(cè)器等。

（一）檢測(cè)器的分類

高效液相色譜儀的檢測(cè)器按其性質(zhì)、應(yīng)用范圍、測(cè)量原理等可以有多種分類方法。目前一般認(rèn)為可分為兩大類：通用型檢測(cè)器和專用型檢測(cè)器。

1、通用型檢測(cè)器：通用型檢測(cè)器也稱為總體性能檢測(cè)器。它可連續(xù)測(cè)量色譜柱流出物（包括流動(dòng)相和待測(cè)物）的全部特性變化，通常采用差分法測(cè)量。這類檢測(cè)器有電導(dǎo)檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器等。通用型檢測(cè)器適用范圍廣，但由于對(duì)流動(dòng)相有響應(yīng)，易受溫度、流速和流動(dòng)相組成變化的影響，通常靈敏度低且不宜用于梯度洗脫。

2、專用型檢測(cè)器：專用型檢測(cè)器也稱為溶質(zhì)性能檢測(cè)器。它可測(cè)量被分離樣品某種組分特性的變化。這類檢測(cè)器對(duì)樣品中組分的某種物理性質(zhì)或化學(xué)性質(zhì)敏感，而流動(dòng)相不具備這類性質(zhì)或在操作條件不顯示這類性質(zhì)。這類檢測(cè)器包括紫外檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器等。

（二）檢測(cè)器的性能指標(biāo)

高效液相色譜使用的檢測(cè)器對(duì)噪聲、漂移、靈敏度、檢出限、線性范圍和響應(yīng)時(shí)間有一些基本的要求，有關(guān)知識(shí)可參見本章第一節(jié)相關(guān)內(nèi)容。表5一15列出了幾種常見高效液相色譜檢測(cè)器的性能。

（三）常用檢測(cè)器

1、紫外可見光檢測(cè)器

紫外可見光檢測(cè)器（U1traviolet—vismledetector，UV—VIS）通稱紫外檢測(cè)器，是液相色譜儀應(yīng)用最廣泛的檢測(cè)器，為高效液相色譜儀的基本配置，在各種檢測(cè)器中其使用率高達(dá)70％左右，對(duì)有紫外吸收的化合物均有響應(yīng)，既可測(cè)190～350nm光譜范圍的紫外光吸收變化，又可向350～900nm可見光譜范圍延伸。在目前報(bào)道的高效液相色譜法測(cè)定農(nóng)藥殘留分析的文獻(xiàn)中，約有90％是采用紫外檢測(cè)器。

紫外檢測(cè)器主要有以下特點(diǎn)：靈敏度高，可達(dá)0.111滿度吸光單位（ahsorhanceunitfullscale，AUFS）；噪聲低，可降至10^-5吸光單位（ahsorbanceunit，AU）；對(duì)中等強(qiáng)度紫外吸收的農(nóng)藥，檢出限可達(dá)10^-10g，定量限可達(dá)10^-9g／mL；對(duì)流動(dòng)相組成的變化或溫度變化不敏感，適于梯度洗脫；對(duì)無紫外吸收的物質(zhì)無響應(yīng)或響應(yīng)很小，容易選用在檢測(cè)波長下無紫外吸收的流動(dòng)相，如乙腈、水等；為非破壞性檢測(cè)器，可用于制備色譜或與其他檢測(cè)器聯(lián)用，結(jié)構(gòu)簡單，操作方便，便于維修。

（1）工作原理：紫外檢測(cè)器工作原理基于朗伯一比爾定律。該定律指出，當(dāng)一束平行單色光輻射通過物質(zhì)溶液時(shí)，如果溶劑不吸收光，則溶液的吸光度與吸光物質(zhì)的濃度和光經(jīng)過溶液的距離呈正比，即：

A=I₀（1/T）=εbc

式中，A為吸光度，I₀為入射光強(qiáng)度，I為透射光度，ε為樣品的摩爾吸光系數(shù)，b為光程長，c為樣品的濃度，T為透射率。

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