2.2萃取條件的選擇

2.2.1不同提取方法的比較

對比了索氏提取、超聲提取和加壓溶劑萃取3種不同提取方法的回收率，見圖4.可以看出，加壓溶劑萃取法回收率明顯高于索氏提取和超聲提取法.在整個萃取過程中，加壓溶劑萃取儀器始終處在密閉的高溫、高壓下進行，而高溫和高壓有助于提高氟吡菌胺在溶劑中的溶解度，顯著提高了萃取效率.其次，在密封的條件下減少了揮發(fā)損失，從而也有助于提高萃取效率。

2.2.2萃取溶劑的選擇

萃取溶劑的選擇對目標化合物的提取影響非常大。分別選擇甲醇、乙腈、正己烷、丙酮、正己烷-二氯甲烷(1∶1)和丙酮-二氯甲烷(1∶2)為提取溶劑，固定加熱溫度120℃，載氣壓力120psi，靜態(tài)萃取15min，萃取池淋洗體積70%池體積，氮氣吹掃時間90s，循環(huán)靜態(tài)萃取次數(shù)2次，按照色譜條件進行檢測，考察萃取溶劑對氟吡菌胺回收率的影響，結果見圖5。

由圖5知，在相同實驗條件下，乙腈的回收率最高，達到了95%～98%，明顯優(yōu)于其他萃取溶劑，因此本試驗選擇乙腈作為萃取溶劑。

2.2.3萃取溶劑的用量

萃取劑乙腈的用量是影響試驗結果的重要因素之一，試驗對比了乙腈用量分別為5、10、15、20、25、30mL時對氟吡菌胺回收率的影響，結果見圖6。

1-正己烷；2-甲醇；3-乙腈；4-丙酮；5-正己烷-二氯甲烷；6-丙酮-二氯甲烷

由圖6知，隨著乙腈用量的不斷增加，目標化合物氟吡菌胺的回收率先逐漸升高，后逐漸趨于平衡，乙腈用量在15mL時，氟吡菌胺回收率達到最高值，平均回收率在90%以上.顯然少量的乙腈不能夠將目標物質完全的萃取，隨著乙腈用量增加，氟吡菌胺萃取效果達到最優(yōu)，回收率達到最高值，但隨著萃取溶劑用量不斷增加，萃取達到相對動態(tài)平衡，回收率變化不明顯.通過試驗最終確定萃取溶劑乙腈用量最佳為15mL。

2.2.4靜態(tài)萃取時間和萃取壓力的選擇

分別設定靜態(tài)萃取時間為2、3、5、8、10、12min，考察萃取回收率。圖7顯示，萃取5min時，回收率在90%以上，再延長萃取時間，目標物的回收率基本不變，故靜態(tài)萃取時間選擇5min。分別選擇50、70、100、120和150psi萃取壓力，考察回收率的變化，結果見圖8.可見，氟吡菌胺的萃取回收率隨著萃取壓力的增加而逐漸提高，在100、120和150psi萃取壓力下，回收率無明顯變化，因此，萃取壓力確定為100psi。

2.3液相色譜和質譜分析條件的優(yōu)化

分別考察了甲醇-10mmol乙酸銨+0.1%甲酸水溶液、甲醇-5mmol乙酸銨+0.1%甲酸水溶液、甲醇-水溶液、甲醇-0.1%甲酸水溶液和甲醇-0.1%甲酸水溶液為流動相對氟吡菌胺分析的影響，結果顯示，甲醇-5mmol乙酸銨+0.1%甲酸水溶液為流動相時，目標物峰形最佳，響應最靈敏。

文獻報道的氟吡菌胺液相色譜-質譜聯(lián)用法一般采用電噴霧離子正離子模式，本文中在全掃描模式下對比了正、負離子模式下氟吡菌胺的響應，結果表明，在正離子模式下氟吡菌胺靈敏度更高，因此選擇正離子模式進行分析.在MS/MS模式中，以錐孔電壓48V進行目標物的子離子檢測，以豐度最大(m/z)172.9作為定量離子，以次靈敏響應離子m/z364.9作為定性離子，優(yōu)化質譜分析參數(shù)見表2。

2.4標準曲線和檢出限

將氟吡菌胺標準儲備溶液用乙腈逐級稀釋成0.025μg/mL、0.050μg/mL、0.125μg/mL、0.250μg/mL、0.500μg/mL標準系列溶液，準確稱取與試樣基質相應的陰性試樣5g(精確至0.01g)，分別加入標準系列溶液200μL，與試樣同時進行提取，制成最終濃度為5.00ng/mL、10.0ng/mL、25.0ng/mL、50.0ng/mL、100ng/mL標準系列工作溶液。按儀器條件對系列進行測定，在5.00～100ng/mL范圍內，濃度值與其對應的峰面積呈線性關系，標準曲線回歸方程為Y=48697X-4711，相關系數(shù)R2>0.9990，定量限為1.00μg/kg。

2.5精密度和準確度試驗

稱取6份5g樣品，在線性范圍內分別加入低、中、高系列濃度分析物，按照前處理過程和儀器條件對6份樣品進行測定，計算相對標準偏差(RSD%)和加標回收率，結果如表3所示。

2.6樣品測定

隨機抽取三家菜市場，每一菜市場選取2種日常食用蔬菜，分別為白菜、西藍花、西紅柿、黃瓜、芹菜和四季豆，按照本方法的前處理和儀器條件進行分離分析，結果在上述蔬菜中均未檢測出氟吡菌胺殘留。同時，對種植過程中噴灑了氟吡菌胺農藥的芹菜和白菜分別進行殘留量測定，結果見表4.其中，芹菜和白菜的施藥劑量均為953(a.i.)g/hm2，施藥次數(shù)均為3次，采集樣品時間至最后一次施藥完成后的第7d。

3結論

本工作建立了以乙腈提取，加壓溶劑萃取-高效液相色譜-三重四級串聯(lián)質譜法測定植物源性食品中氟吡菌胺殘留量的方法，提取方法操作簡單，目標化合物損失小，準確度高，且方法線性良好、精密度、準確度均能滿足定量限在1.00μg/kg的檢測分析要求，適用于植物源性食品中氟吡菌胺農藥殘留量的檢測。

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