北方偉業(yè)計量集團有限公司
培養(yǎng)基 | RPMI-1640完全培養(yǎng)基:90%RPMI-1640+10%FBS |
傳代方法 | 復(fù)蘇步驟:①凍存管從液氮或-80℃中取出放入PE手套中,迅速沒入37℃水浴鍋,搖晃凍存管加速溶解,以1分鐘內(nèi)全部溶解為宜;②在超凈臺中將溶解好的細(xì)胞液加入到裝有9ml 完全培養(yǎng)基的離心管內(nèi),1000-1200rpm/min離心5分鐘,棄去上清液,用1-2mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。③然后將細(xì)胞懸液加入到含有5-6mL完全培養(yǎng)基的T25瓶中,放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 細(xì)胞傳代:①將舊培養(yǎng)液吸除,PBS清洗兩遍后,加入1-2mL胰酶(0.25%Trypsin+0.02%EDTA);②鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動時(可用吸管吸起些許胰酶輕輕吹打細(xì)胞層某處,肉眼可見細(xì)胞層脫落,即消化完成,否則繼續(xù)消化),直接吸掉胰酶,加入5-6毫升完全培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,把細(xì)胞層吹落,吹散。③將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的T25瓶中,添加適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。④注意培養(yǎng)基pH值變化和細(xì)胞密度,定期換液(每周2-3次),待細(xì)胞密度達到80%-90%時,重復(fù)傳代操作或者凍存。 |
生長條件 | 培養(yǎng)溫度37℃;氣體環(huán)境5%CO2+95%空氣; |
生長特性 | 貼壁生長 |
存儲條件 | 液氮 |
類型 | 上皮細(xì)胞 hTERT-永生化細(xì)胞 |
安全等級 | 2 |
形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣,多角形,梭形,邊緣不規(guī)則,單層貼壁生長 |
分離基物 | 胰腺; 管 |
應(yīng)用領(lǐng)域 | 將 hTERT-HPNE 細(xì)胞暴露于丁酸鈉和 5-氮雜-2'-脫氧胞苷導(dǎo)致形成以 p-糖蛋白(多藥耐藥性 (MDR-1))、碳酸酐酶 II 和細(xì)胞角蛋白表達為標(biāo)志的胰腺導(dǎo)管細(xì)胞7、8 和 19。發(fā)現(xiàn) hTERT-HPNE 細(xì)胞具有在腺泡到導(dǎo)管化生過程中形成的中間細(xì)胞的特性,其中包括它們的未分化表型、巢蛋白的表達以及活躍的 Notch 信號傳導(dǎo)的證據(jù)Ref。 |
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