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理化檢測法是利用抗生素分子中的基團(tuán)所具有的特殊反應(yīng)或性質(zhì)來測定其含量，常用的有：氣相色譜法、高效液相色譜法、聯(lián)用技術(shù)等，能進(jìn)行定性定量和藥劑鑒定，敏感性較高。

一、理化檢測法--氣相色譜法（GC）：氣相色譜法是以氣體作為流動相，被測樣品由載氣帶入色譜柱，以吸附色譜或分配色譜使不同組分分離，按順序從色譜柱流出。再經(jīng)過檢測器將組分信號轉(zhuǎn)換并記錄，達(dá)到定性定量分析。其樣品前處理包括提取、甲基化和凈化3個步驟，采用進(jìn)樣口升溫的方式，可以提高測定的靈敏度。該方法與質(zhì)譜技術(shù)結(jié)合，可以對青霉素類、氨基糖苷類、四環(huán)素類等抗生素進(jìn)行定性定量分析。

二、理化檢測法--高效液相色譜法（HPLC）：HPLC引用了GC理論，在技術(shù)上采用了高壓泵、高效固定相和高靈敏度檢測器，經(jīng)過樣品的提取、脫蛋白、離心、層析柱凈化、衍生化等步驟進(jìn)行殘留藥物的分離和檢測，由于HPLC不需高溫條件，故適于易受熱分解，不易氣化的殘留成分分析。HPLC是國內(nèi)藥物殘留檢測應(yīng)用最普遍、最有效的分析方法，其特點是靈敏度高、檢測限低、方法穩(wěn)定。由于氨基糖苷類和大環(huán)內(nèi)酯類抗生素均無紫外吸收，故一般采用離子交換色譜來測定這類抗菌藥物。但是對于絕大多數(shù)抗生素多采用反相色譜法，其中最常用的檢測方法就是紫外檢測器和熒光檢測器。

三、理化檢測法--聯(lián)用技術(shù)：聯(lián)用技術(shù)包括GC－MS、LC－MS 和毛細(xì)管區(qū)帶電泳－質(zhì)譜聯(lián)用法(CZE－MS) 等。實現(xiàn)了高效層析分離和檢測聯(lián)機，可用微電腦控制層析條件、程序和數(shù)據(jù)處理，其特異性、靈敏度和重復(fù)性均好，并可一次同時完成同一樣本中多種藥物及其代謝物檢測。聯(lián)用技術(shù)的檢出限要低于HPLC方法。因此，聯(lián)用技術(shù)在食品殘留藥物檢測中的應(yīng)用越來越廣泛。